Карнаухов В.Н. Люминесцентный анализ клеток

Подождите немного. Документ загружается.

значения каждого сигнала, их отношение и изменение во времени. Диски выполнены сменными,

каждый из них содержит определенную комбинацию светофильтров, предназначенную для решения

разных задач. В разработанном приборе соответствующим образом расположенные пары

светофильтров позволяют измерять три-четыре полосы флуоресценции при их оптимальном

возбуждении.

В приборе предусмотрена возможность работы с контактной оптикой, что

позволяет

проводить прижизненные исследования на целых органах животных. Для фокусировки на различную

глубину органа тубусная линза 15 (см. рис. 2.5) заменяется оптической системой 21, состоящей из

неподвижной отрицательной и перемещаемой вдоль оптической оси положительной линзы.

Наблюдение объекта осуществляется в этом случае в свете флуоресценции или по методу темного

поля в падающем

свете.

Раздельное возбуждение с возможностью выбора оптимальных для каждого вещества

условий и раздельная же регистрация их люминесценции с последующей автоматической обработкой

результатов являются, несомненно, одним из важнейших преимуществ описанного

микрофлуориметра. Следует при этом иметь в виду, что использование раздельного возбуждения

меняет величины регистрируемых отношений полос люминесценции. В частности, при исследовании

препарата

рецептора растяжения рака (см. табл. 3) с применением данного микрофлуориметра для

клеток разного типа были получены отношения интенсивности люминесценции окисленных

флавопротеинов к таковой восстановленных пиридиннуклеотидов ξ

, примерно в 2 раза более

высокие, чем аналогичные отношения ξ, измеряемые при суммарном возбуждении обоих

компонентов окислительного обмена излучением с длиной волны 365 им:

Участок препарата

ξ [182] ξ

[284] ξ

/ξ

Быстро адаптирующийся нейрон 0,9 1,9 2,1

Медленно адаптирующийся нейрон 0,6 1,4 2,3

Быстро адаптирующаяся мышца 1,3 2,2 1,75

Медленно адаптирующаяся мышца 0,9 1,8 2

Аксон 1,2 2,1 1,75

Это и следовало ожидать из сопоставления спектров поглощения окисленных

флавопротеинов с длиной волны возбуждения.

Заканчивая рассмотрение различных систем микроспектрального анализа одиночных клеток,

необходимо отметить, что в последнее время в ЛОМО разработана и выпущена специальная

микроспектральная насадка СФН-10, которая в комплекте с микроскопом МЛ-4 или «Люмам-ИЗ», а

также с соответствующими

электронными блоками измерения и регистрации представляет собой

микроспектрофлуориметр для области спектра от 300 до 800 нм.

Приложение 3

П3. Приборы и методы автоматического анализа

клеточных популяций

В заключение следует хотя бы кратко остановиться на методах автоматического анализа

одиночных клеток с целью получения статистически усредненной информации о популяции этих

клеток [397-406]. Задача измерения параметров большого количества одиночных клеток и

последующего построения соответствующих гистограмм приводит к необходимости упрощения

способа регистрации спектральных характеристик клеток. В этом случае микроспектрофлуориметр

заменяется одним из

описанных выше многоканальных микрофлуориметров и измеряются

интенсивности люминесценции одной и той же клетки в нескольких, выбранных в соответствии с

характеристиками красителей длинах волн. Специальные вычислительные устройства используют

эти данные для построения гистограмм, характеризующих популяцию клеток в целом.

Естественно, что при этом автоматизации подлежит и процесс предъявления клеток

анализирующему устройству, что

достигается применением сканирующего столика или проточной

системы и специальной камеры для образца (рис. 3.1), в которой окрашенные клетки (1) потоком

жидкости подаются по капилляру (2) и через зазор между калиброванным концом капилляра и

покровным стеклом камеры (3) выносятся из измерительной камеры 5. Зазор между концом

капилляра и покровным стеклом находится в фокусе

микрообъектива многоканального

микрофлуориметра. Поэтому в момент прохождения клетки через зазор возникает импульсный

световой сигнал определенного спектрального состава. Оптическая система разделяет

монохроматические составляющие этого сигнала и направляет их в соответствующие каналы

регистрации. Автоматические устройства выдают гистограммы сигналов либо для каждого из

каналов регистрации, либо для отношения их.

Рис. 3.1. Проточная камера для

автоматического многоканального анализа

клеточных популяций.

1 – флуорохромированные клетки;

2 – калиброванный капилляр;

3 – покровное стекло камеры;

4 – микрообъектив многоканального микрофлуориметра;

5 – корпус камеры.

Одним из примеров использования такого метода может служить определение ДНК, белка и

объема одиночных клеток из больших популяций с применением двойной окраски [397]. Суспензия

фиксированных клеток предварительно обрабатывалась РНКазой и затем окрашивалась для

определения ДНК раствором пропидиум иодида (0,05 мг/мл в 2%-ном цитрате натрия), одного из

аналогов этидиум бромида [404]. После промывки

эти клетки окрашивались дополнительно

флуоресценизотиоцианатом (ФИТЦ) для выявления белка.

Спектры люминесценции обработанных таким образом клеток имеют максимумы излучения

590 нм (пропидиум иодид) и 530 нм (ФИТЦ). Суспензию окрашенных клеток пропускали через

специальную проточную камеру. Для разделения максимумов излучения использовали

светофильтры. Результаты анализа выражали в виде гистограмм для каждого из каналов,

регистрирующих ДНК

и белки. Недостатком этого способа представления результатов анализа

является то, что двойная окраска не используется здесь для получения характерного для изучаемых

клеток соотношения белок/ДНК и может быть без ущерба для точности результатов заменена

раздельной регистрацией двух порций суспензии, каждая из которых окрашивается

соответствующим красителем.

Наиболее полно преимущества двухволновой регистрации используются

, например, в работе

Торелла[ 406], в которой двухцветная окраска клеток акридиновым оранжевым. применяется для

анализа популяции клеток крови. С этой целью для представление результатов используется фазовая

плоскость (экран осциллографа), в которой одна из осей - интенсивность люминесценции мономеров,

а другая - интенсивность люминесценции димеров. При таком способе можно увидеть разные

подгруппы популяции клеток,

которые характеризуется определенными средними величинами α.

Подобного типа системы особенно перспективны для целей автоматизации медицинской

диагностики клеток.

Приложение 4

Энергетическая яркость в отдельных линиях ртутных ламп [мВт/см

ср

⋅нм] [362].

НМ

ДРШ

250-2М

ДРШ

250-2

ДРШ

250-3

ДРШ

200

ДРШ

100-2

СВД

120А

248,2 2400 4060 500 1620 1210 65

254* 1100 2000 35 830 1530 60

260,3 - - - 90 - 55

265,2 1740 - - - - 110

269,2 330 - - - 60 11

275,3 6,0) 80 190 - 180 75 14

280,4 1050 310 13 330 440 60

289,4 620 770 100 1150 180 29

293,5 60 780 - - - 5

296,7 2550 3900 520 1440 2340 0 90

302,2 (2,6) 4100 4850 900 2370 1920 150

312,6 (3,2) 7500 10600 2700 6200 8400 0 280

334,1 1400 5200 570 1150 1340 40

365,0 (6,3) 7700 12500 3440 7300 10000 240

404,7 (7,8) 2950 6240 1720 3920 8200 120

435,8 3960 6800 2220 4660 6300 190

546,1 4000 8700 3260 4900 6000 330

577,0 (9,0) 5600 12400 3000 5150 5000 350

* Данные ориентировочны из-за самообращения линии.

Приложение 5

Энергетическая яркость ламп со сплошным спектром и фона

ртутных ламп [362].

НМ

ДРШ-

250-2М

ДРШ-

250-2

ДРШ-

250-3

ДРШ-

200

ДРШ-

100-2

СВД-

120А

ДКсШ

-120

ДКсШ

-150

КГМ

27×100

КГМ

9×75

КГМ

6×15

250 50 - - - - 8 50 90 - - -

260 50

- - - -

17 54 100 0,5

- -

270 320

- -

30 10 10 84 140 1,1

- -

280 360 200 10 130 130 4 НО 180 1,7 0,5

290 300 500 40 270 240 4 130 200 2,3 0,6

300 260 640 70 320 320 4 160 230 3,1 1,0 0,5

310 240 720 90 360 500 2 185 255 4,0 1,2 0,6

325 80 750 60 380 480 1.5 225 290 5,3 2,0 1.0

350 40 750 30 120 390 0,7 270 310 7,9 3,2 2,0

380 40 680 50 . 120 410 0,9 300 320 10,9 5,5 3,6

400 40 630 40 120 370 0,5 310 320 12,5 7,0 4,8

450 20 370 20 190 110 0,5. 300 300 19,0 12,0 9,0

500 10 200 10 50 70 0,5 290 310 28,5 20,0 14,5

550 30 440 30 60 160 1,0 270 295 39,0 28,5 21,0

600 - 350

80 30 1,0 240 300 54,6 37,1 28,0

Приложение 6

Российская Академия наук

Институт биофизики клетки РАН

Научно-учебный Центр биологии клетки

(Лицензия № 24Н-0108 Минобразования РФ от 31 марта 2000 г.)

Программа курса

СПЕКТРАЛЬНЫЙ АНАЛИЗ КЛЕТОК

Область знаний-510000 Естественные науки

и математика)

специальность: 01160 (биофизика)

Автор курса:

к.б.н. В.Н. Карнаухов

ПОЯСНИТЕЛЬНАЯ ЗАПИСКА

Данный курс предназначен для ознакомления студентов с методами спектрального анализа

внутриклеточных органелл, одиночных клеток и клеточных популяций как в живых, так и в

фиксированных препаратах. Необходимость использования

этих методов обусловлена большими

достижениями биохимии в исследованиях выделенных из клеток и тканей физиологически активных

макромолекул. Эти достижения во многом базируются на использовании методов классического

спектрального анализа чистых (нерассеивающих) растворов.

Для дальнейшего движения в понимании принципов функционирования живых клеток, данные

биохимии, полученные методами классического спектрального анализа, необходимо “привязать” к

функционирующим одиночным

клеткам, и их популяциям, используя методы спектрального анализа

для изучения таких многокомпонентных и гетерогенных систем, как клетка.

Эти особенности клетки как объекта спектральных исследований создают определенные ограничения

и особенности и методов регистрации и способов интерпретации полученных результатов.

В то же время использование методов спектрального анализа клеток создает уникальные

возможности решения

как фундаментальных проблем биологии, так и прикладных задач в области

медицины, биотехнологии и экологии, что может быть проиллюстрировано оригинальными

примерами.

В предлагаемом курсе должно быть показано соотношение результатов спектрального

анализа клеток с результатами методов классической биохимии, цитохимии и электронной

микроскопии. Особое внимание будет уделено задачам, решение которых невозможно без

применения спектрального

анализа клеток.

ПРОГРАММА КУРСА

А: АБСОРБЦИОННЫЙ СПЕКТРАЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ОДИНОЧНЫХ ЖИВЫХ КЛЕТОК.

1. Физические основы, возможности и ограничения метода. Спектры поглощения, ослабления

и светорассеяния. Особенности спектроскопии поглощающих и рассеивающих

многокомпонентных гетерогенных объектов.

2. Энергетика клетки. Спектры поглощения макромолекул входящих в состав энергосистем

растительных и животных клеток. Гемопротеины, каротиноиды, хлорофиллы и т

.д. Функции

каротиноидов в животных клетках. Разностные спектры.

3. Внутриклеточные пигменты. Спектры поглощения каротиноидов, каротинпротеинов и т.д.

Функции каротинпротеинов.

4. Техника и методы эксперимента. Микроскопы и спектрофотометры, сопряжение,

регистрация. Общая схема микроспектрофотометра. Ошибки и ограничения.

5. Проблемы и перспективы. Новые возможности на новой элементной базе.

Б: ЛЮМИНЕСЦЕТНЫЙ СПЕКТРАЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ОДИНОЧНЫХ ЖИВЫХ КЛЕТОК.

6. Физические основы, возможности и ограничения метода. Роль светорассеяния, изменения

положения максимумов при формировании сложного многокомпонентного спектра

люминесценции. Флюоресценция и фосфоресценция.

7. Энергетика автотрофных клеток. Спектры люминесценции соединений, входящих в состав

энергосистем растительных клеток. Хлорофиллы, фикобилины, фикоцианины и т.д.

Многокомпонентность спектров реальных растительных

клеток.

8. Энергетика гетеротрофных клеток. Спектры люминесценции соединений, входящих в

состав энергосистем клеток животных. Пиридиннуклеотиды и фловопротеины. Определение

энергетической активности клеток. Два пула митохондрий в одиночной нервной клетке.

9. Биолюминесценция и ее связь с энергетикой. Примеры спектров биолюминесценции.

Особенности ее регистрации. Сверхслабое свечение тканей, хемилюминесценция.

10. Роль спектрального анализа одиночных клеток для

понимания глобальных процессов.

Синезеленые – вариотрофный организм. Парадоксы синезеленых. Симбионты. Адаптация

биоценозов тропической зоны Океана к недостатку фосфатов в среде обитания. Красный

прилив.

11. Медицинские приложения. Цитодиагностика заболеваний. Контактная микроскопия.

Примеры из практики.

12. Техника и методы эксперимента. Люминесцентный микроскоп, сопряжение со

спектроанализатором. Регистрация. Общая схема микроспектрофлюориметра. Ошибки и

ограничения.

13. Проблемы и

перспективы. Конфокальные системы, новые регистраторы, компьютерная

обработка данных, времена жизни возбужденных состояний, криомикроскопия.

В: ЛЮМИНЕСЦЕНТНЫЙ СПЕКТРАЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ОДИНОЧНЫХ КЛЕТОК С ПРИМЕНЕНИЕМ

КРАСИТЕЛЕЙ-ЗОНДОВ.

14. Определение жизнеспособности клеток. Основы методов и подходов. Типы флюорохромов,

интерпретация результатов. Акридиновый оранжевый.

15. Динамика нуклеиновых кислот в клетке. Акридиновый оранжевый, димеры и мономеры, их

связь с двухспиральными

(ДНК) и односпиральными (РНК) нуклеиновыми кислотами.

Параметр α и его динамика в процессе синтетической активности клетки. Выявление активной

РНК и его механизм. Примеры использования для исследования нейронов и

иммунокомпетентных клеток крови.

16. Белковый синтез в клетке. Двух- и трехкомпонентные окраски клеток. Флюоресцентно

меченые антитела.

17. Взаимодействие макромолекул. Перенос энергии возбуждения, флюоресцентные

метки,

акцепторы и доноры. Примеры использования.

18. Люминесцентные красители и зонды. Краткий анализ известных данных. Примеры

использования.

19. Проблемы и перспективы. Новые флюорохромы и новая техника измерений.

Г: ЛЮМИНЕСЦЕНТНЫЙ СПЕКТРАЛЬНЫЙ АНАЛИЗ КЛЕТОЧНЫХ ПОПУЛЯЦИЙ.

20. Двухволновая микрофлюориметрия. Основы метода, безразмерные параметры. Техника

эксперимента и примеры приложений в биологии, медицине и экологии.

21. Системы

поиска нетипичных (патологических) клеток. Основы метода, примеры

реализации.

22. Проблемы и перспективы. Новая элементная база, новые возможности.

Д: ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

23. Комбинация нескольких методов применительно к одному и тому же микрообъекту. Техника

эксперимента, интерпретация данных. Примеры применения.

24. Проблемы и перспективы. Новые методы спектрального анализа клеток. Возможности и

перспективы.

Список рекомендуемой литературы

1. Свенсон К., Уэбстер П. Клетка. Мир. М. 1980. С. 1-300.

2. Де Дюв К. Путешествие в мир живой клетки. Мир. М. 1987. С. 1-256.

3. Марголис. Эволюция клетки. Мир. М.

4. Карнаухов В.Н. Функции каротиноидов в клетках животных. Наука. М. 1973. С. 1-107.

5. Карнаухов В.Н. Биологические функции каротиноидов. Наука. М. 1988. С. 1-240.

6. Карнаухов В.Н.

Люминесцентный спектральный анализ клеток. Наука. М. 1978. С. 1-204.

7. Карнаухов В.Н., Яшин В.А. Спектральный анализ морского микропланктона. Пущино. 1980. С. 1-

40.

8. Карнаухов В.Н., Карнаухова Н.А., Яшин В.А. Методы и техника люминесцентной цитодиагностики.

9. Карнаухова Н.А. Люминесцентные параметры ядерных клеток крови в процессе иммунного ответа

организма. Биофизика. Т. 29. №2. С. 267-279.

10. Карнаухов В.Н. Спектральный анализ клеток в экологии и охране окружающей среды. ОНТИ

НЦБИ РАН, Пущино. 1988. С. 1-104.

11. Рощина В.Д., Рощина В.В. Выделительные функции высших растений. Наука. М. 1989. С. 1-214.

12. Рощина В

.В., Мельникова Е.В., Карнаухов В.Н., Головкин Б.Н. Применение

микроспектрофлюориметрии в спектральном анализе секреторных клеток растений. Изв. РАН.

Сер. биол. 1997. №2. С. 167-171.

Обобщенная Схема Окислительного Метаболизма Клетки

Жирными линиями

выделен основной путь окисления углеводов. Сплошными

линиями показаны спектры поглощения и люминесценции восстановленных, а

пунктирными

– окисленных форм компонентов окислительного обмена

Список первоисточников

1. Вавилов С.И. Микроструктура света. М., Физматгиз, 1950.

2.Теренин А.Н. Фотохимия красителей и родственных органических соединений. М.-Л., Физматгиз,

1947.

3. Принсгейм П. Флуоресценция и фосфоресценция. М., ИЛ., 1951.

4. Волькенштейн М. В. Строение и физические свойства молекул. М.– Л., Физматгиз, 1955.

5. Рид С. Возбужденные электронные состояния в химии и биологии. М.,

ИЛ, 1960.

6. Константинова-Шлезингер М.А. Люминесцентный анализ. М., Физматгиз, 1961.

7. Ельяшевич М.А. Атомная и молекулярная спектроскопия. М., Физматгиз, 1962.

8. Владимиров Ю.А., Литвин Ф.Ф. Фотобиология и спектральные методы исследования. Практикум

по общей биофизике, т. 8. М., “Высшая школа”, 1964.

9. Юденфренд С. Флуоресцентный анализ в биологии и медицине. М., “Мир”, 1965.

10. Баренбойм

Г.М., Доманский А.В., Туроверов К. К. Люминесценция биополимеров и клеток. Л.,

“Наука”, 1966.

11. Божевольнов Е.А. Люминесцентный анализ неорганических, веществ. М., “Химия”, 1966.

12. Столяров К.П., Григорьев Н.Н. Введение в люминесцентный анализ неорганических веществ. Л.,

“Химия”, 1967.

13. Степанов Б.И. Введение в химию и технологию органических красителей. М., “

Химия”, 1971.

14. Паркер С. Фотолюминесценция растворов. М., “Мир”, 1972.

15. Черницкий Е.А. Люминесценция и структурная лабильность белков в растворе и клетках. Минск,

“Наука и техника”, 1972.

16. Бурштейн Э.А. Люминесценция белковых хромофоров (Модельные исследования).- Биофизика

(Итоги науки и техники), т. 6. М., ВИНИТИ, 1976.

17. Брумберг Е.М. Флуоресцентная микроскопия биологических объектов при верхнем

освещении.-

Биофизика, 1959, 4, № 4, 471-475.

18. Брумберг Е.М. О флуоресцентных микроскопах.- Журн. общей биол., 1955, 16, № 3, 222.

19. Брумберг Е.М., Гершгорин А.С. Опак-иллюминатор преимущественно для люминесцентного

микроскопа. Авт. свид. СССР № 78637, 1948.

20. Брумберг Е.М., Крылова Г.Н. Применение интерференционных делительных зеркал в

флуоресцентной микроскопии.- Журн. общей биол., 1953, 14, № б, 461-464.

21. Скворцов

Г.Е., Панов В.А., Поляков Н.И., Федин Л.А. Микроскопы. Л., “Машиностроение”, 1969.

22. Поллистер П., Орнштейн А. Цитофотометрический анализ в видимой части спектра.- В кн.:

Методы цитологического анализа. М., ИЛ, 1957, с. 9–97.

23. Карнаухов В.Н. Спектральные исследования энергетического аппарата живых нервных клеток.–

Биофизика, 1968, 13, № 4, 622–629.

24. Карнаухов В.Н. Живая клетка

как объект спектральных исследований.- Биофизика живой клетки,

т. 1. Пущино, 1970, 113-117.

25. Левин С.В. Количественное изучение светорассеяния в отдельных живых клетках.- Цитология,

1960, 2, 489-493.

26. Карнаухов В.Н. Спектрофотометрические исследования живых клеток.- Биофизика живой клетки,

т. 4. Пущино, 1973, 185-198.

27. Н.S.Conn's Biological stains. Lillie R.D. (Ed.). Baltimore, Williams and Wilkins Co., 1969.

28. Лаптев Н.Г., Богословский Б.М. Химия красителей. М., “Химия”, 1970.

29. Мельников Б.Н., Морыганов П

.В. Применение красителей. М., “Легкая индустрия”, 1971.

30. Gurr E. Synthetic dyes in biology, medicine and chemistry. New York - London, Acad. Press, 1971.

31. Красовицкий Б.М., Болтин Б.М. Органические люминофоры. Л. “Химия”, 1976.

32. Пирс Э. Гистохимия, теоретическая и прикладная. М., ИЛ, 1962.

33 Лилли Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия. М., “Мир”, 1969.

34. Мейсель М.Н., Гуткина А.В. Люминесцентная микроскопия в биологии и медицине.- В кн.:

Люминесцентный аналиа. М., Физматгиз, 1961, 309–324.

35. Михайлов В.Г. Люминесцентный анализ в медицине. Ташкент, Медгиз УзССР, 1963.

36. Зеленин А.В. Люминесцентная цитохимия нуклеиновых кислот. М., “Наука”, 1967.

37. Мейсель М.Н. Флуоресцентная микроскопия и цитохимия в общей микробиологии.- В кн.:

Успехи микробиологии, вып. 7. М., “Наука”, 1971, 3–32.

38. Люминесцирующие антитела. М., “Медицина”, 1972.

39. Гольдин Р.Б., Белецкая

Л.В., Крюкова И.Н., Шаханина К.Л. Иммунолюминесценция в медицине.

М., “Медицина”, 1977.

40. Kasperson T. The cell functions and cell growth. W.W. Norton and Co, I950.

41. Методы цитологического анализа. М., ИЛ, 1957.

42. Роrrо Т.J., Dadik S.P., Green М., Morse H.Т. Fluorescence and absorption spectra of biological dyes.-

Stain Technol., 1963, v. 38, 37.

43. Porro Т.J., Morse Н.Т. Fluorescence and absorption spectra of biological dyes. II.- Stain Technol., 1965,

v. 40, 173.

44. Введение в количественную цитохимию. М., “Мир”, 1969.

45. Introduction to quantitative cytochemistry. Wied G.L. (Ed.). New, York - London, Acad. Press. 1966.

46. Fluorescence techniques in cell biology. Thaer A.A., Sernet М. (Eds). Berlin, Springer, 1973.

47. Агроскин Л.С., Папаян Г.В. Цитофометрия. Л., “Наука”, 1977.

48. Хачатурова Е.Н., Смирнова Е.А. Применение риванола - SO

для цитофотометрии ДНК. - Изв. АН

СССР. Сер. биол., 1966, № 6, 900-905.

49. Колесников В.А. Ранние изменения цитохимических свойств хроматина в регенерирующей

печени. Канд. дис. М., 1976.

50. Laurence D.S.R. A study of the adsorption of dyes on bovine serum albumin by the method of

polarization of fluorescence.- Biochem. J., 1952, v. 51, № 2, 168.

51. Duke J.А., МсКау R., Botts J. Conformational change accompanying modification of myosin ATP-ase.-

Biochim. et biophys. acta, 1966, v. 126, № 3, 600-603.

52. Cheung Н., Morales М. Studies of myosin conformations by fluorescent techniques. Biochemistry, 1969,

v. 8, 2177-2182.

53. Aronson J.F., Detern A., Morales М. Myofibrillar shortening observed with a fluorescent “Vital Stain”.-

Fed. Proc., 1967, v. 26, 553.

54. Франк Г.М., Теплова В.В., Карнаухов В.Н. Люминесцентные спектральные исследования

распределения полярных

и гидрофобных групп в саркомере.- Биофизика живой клетки, т. 2.

Пущино, 1971, 6-15.

55. Azzi A., Chance В., Radda G.К., Lee С.Р. A fluorescence probe for energy dependent structural changes

in fragmented membranes.- Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1969, v. 62, 612–619.

56. Chance В., Azzi A., Mela L., Radda G., Vainic H. Local anesthetic induced changes of a membrane-

bound fluorochrome. A link between ion uptake and membrane structure.- FEBS Letters, 1969, v. 3, №

1, 10-13.

57. Tasaki J., Watanabe A., Sandlin R., Garnay L. Changes in fluorescence, turbidity and birefringence

associated with nerve exitation.- Proc. Nat. Acad. Sci.. USA, 1968, v. 61, 3, 883-888.

58. Rigler R., Ehrenberg M. Molecular interactions and structure as analysed by fluorescence relaxation

spectroscopy.- Quart. Rev. Biophys., 1973, v. 6, № 2, 139-199.

59. Vallee В.L., Riordan J.F., Johansen J.Т., Livingston D.M. Spectro-chemical probes for protein

conformation and function.- Cold Spring Harbor Sympos. Quant. Biol, 1972, v. 36, 517-531.

60. Brandt L., Gohlke J.R. Fluorescent probes for structure. Annual Rev. Biochem., 1972, 41, 808.

61. Williamson С.Е., Corvin А.H. Dyes as biologie probes, colour and dye microenvironments.- J. Colloid

and Interface Sci., 1972, v. 38, № 3, 567-576.

62. Cornelius G., Görtner W., Haynes D.H. Cation complexation by valinomycin- and nigericin-type

ionophores registered by the fluorescence signal of Tl

.- Biochemistry, 1974, v. 13, № 15, 3052.

63. Cohen L.В., Salzberg В.M., .Davila H.V., Ross W.N., Landowne D., Waggoner A.S., Wang C.H.

Changes in axon fluorescence during activity: Molecular probes of membrane potential.- J. Membr.

BioL, 1974, v. 19, 1-36.

64. Карнаухов В.H. Спектральные методы исследования энергетики и регуляции в живой клетке.-

Биофизика живой клетки, т. 3. Пущино, 1972, 100-117.

65. Карнаухов В.H. Спектральный анализ в изучении внутриклеточной регуляции обмена веществ и

энергии.- Цитология, 1976, т. 18, №. 4, 408-418.

66. Браун А.Д., Кудрявцев Б.H. Исследования по количественной цитохимии в СССР.- Цитология,

1976, т. 18, № 4, 379-396.

67. Брумберг Е.М. Ультрафиолетовая флуоресцентная микроскопия.- Журн. общей биол. 1956, т. 17,

№6, 401– 412.

68. Розанов Ю.М., Черногрядская H.А., Шуделъ М.С., Боровиков Ю.С. Изучение спектров

ультрафиолетовой флуоресценции клеток различных тканей.- Цитология, 1969, т. 11, № 1, 104.

69. Владимиров Ю.А. Некоторые особенности флуоресценции ароматических аминокислот.- ДАН

СССР, 1957, т. 116, № 5, 780-783.

70. Конев С.

В. Спектры флуоресценции и спектры действия флуоресценции некоторых белков.--ДАН

СССР, 1957, т. 116, № 4, 594-596.

71. Владимиров Ю.А. О люминесценции ароматических аминокислот в молекуле белка.- ДАН СССР,

1961, т. 136, № 4, 960-963.

72. Бурштейн Э.А. Люминесценция ароматических аминокислот и белков в растворах при

возбуждении в коротковолновой ультрафиолетовой области.- Биофизика, 1961, т. 6, № 6, 753–

763.

73. Черногрядская H.А., Пильщик Е.М., Шуделъ М.С; Кудрявцева М.В., Асташина Т.П. Некоторые

данные по ультрафиолетовой флуоресценции клеток различных тканей.- В кн.: "Электронная и

флуоресцентная микроскопия клетки". М.-

Л., “Наука”, 1964, 82-87.

74. Штранкфельд И.Г. О люминесценции мышц и мышечных блоков.- Биофизика, 1963, т. 8, № 6,

690-695.

75. Барский И.Я., Брумберг Е.М., Брумберг В.А. Об ультрафиолетовой флуоресценции мышц.- ДАН

СССР, 1962, т. 147, № 2, 474.

76. Черногрядская Н.А., Шуделъ М.С., К вопросу об ультрафиолетовой флуоресценции

околоядерных телец сперматид некоторых саранчовых.- ДАН СССР

, 1962, т. 145, № 4, 917-919.

77. Брумберг Е.М., Барский. И.Я., Черногрядская В.А., Шудель М.С. К вопросу о природе

ультрафиолетовой флуоресценции клеток.- ДАН СССР, 1963, т. 150, № 6, 1356-1358.

78. Хрущев Н.Г. Ультрафиолетовая флуоресценция.элементов рыхлой соединительной ткани в норме

и в условиях воспаления. Архив анат. гистол. эмбриол., 1963. т. 46, № 2, 39-45.

79. Сафронов В.Г

., Ягунов А.С. УФ-флуоресценция живых и убитых клеток крови и костного мозга

облученных животных.– Цитология, 1969, т. 10, № 4, 471-475.

80. Воробцова Н.Е., Сафронова В.Г. Исследование УФ-флуоресценции клеток костного, мозга

потомков облученных животных.– Цитология, 1969, т. 11, № 2, 255-259.

81. Брумберг И.Е. Изменение интенсивности ультрафиолетовой флуоресценции лейкоцитов

периферической крови при различных условиях

облучения животного.- Цитология, 1969, т. 11,

№ 2, 251-254.

82. Проценко М.И., Ганин А.Ф., Груздев А.Д., Мосолов А.Н. Исследование повышенного уровня УФ-

флуоресценции и синей люминесценции в культуре фибробластов после однократного

рентгеновского облучения.- Цитология, 1970, т. 12, № 2, 214-219.

83. Черногрядская В.А., Пильщик Е.М., Шудель М.С., Кудрявцева. М.В., Асташина Т.П

. К вопросу

об ультрафиолетовой флуоресценции митохондрий - ДАН СССР, 1964, т. 156, 174-176.

84. Шудель М.С. УФ-флуоресценция живых клеток асцитной карциномы Эрлиха при различных

взаимоотношениях в них дыхания и гликолиза.- В кн.: "Электронная и флуоресцентная

микроскопия клетки". М.– Л., “Наука”, 1964.

85. Конев С.В. Электронно-возбужденные состояния биополимеров. Минск, “Наука и техника”, 1965.

86. Розанов

Ю.М., Черногрядская Н.А., Барский И.Я., Боровиков Ю.С., Шудель М.С. Поляризованная

УФ-флуоресценция мышечных волокон и некоторых других анизотропных цитологических

объектов.- Цитология, 1971, т. 13, № 2, 190-200.

87. Черногрядская Н.А., Шудель М.С., Барский И.Я., Розанов Ю.М., Боровиков Ю.С. Изучение

фотографическим методом поляризованной ультрафиолетовой флуоресценции саркомера

гигантских мышечных волокон Balanus rostratus.- Цитология. 1972, т. 14, 10, 1233-1238.

88. Шудель М.С., Боровиков Ю.С., Яснецкий Г.Н. Изучение методом поляризованной УФ-

флуоресценции саркомера гигантских мышечных волокон Balanus rostratus.- В кн.: "Структура,

функция и реактивность клеток". Л., “Наука”, 1973, 10-12.

89. Карнаухов В.Н. Микроспектральные исследования метаболизма гигантских нейронов большого

прудовика.– В кн.: "Свойства и функции макромолекул и

макромолекулярных систем". М.,

“Наука”, 1969.

90. Warburg О. Wasserstofföbertragende Fermente. Berlin, 1948, s.21.

91. Ленинджер А. Биохимия. М., “Мир”, 1974, 434-436.

92. Massay V. Lypoil deghydrogenase.- In: The Enzymes, v. 7. New York, Acad. Press, 1962, p. 275.

93. Theorell H. Das gelbe Oxydationsferment. - Biochem.. Z., 1935, v. 278, 263.

94. Chance В., Schoener В. Fluorimetric studies of flavin component of the respiratory chain. In: “Flavins

and flavoproteins”. Slater (Ed.). Amsterdam - New York - London, Elsevier Publ., 1966, p. 510-528.

95. Chance В., Mela L., Wong D. Flavoproteins of the respiratory chain.- In “Flavins and flavoproteins”.

K.Yagi (Ed). Baltimore, Univ. Park Press, 1968, p. 107.

96. Flavoproteins. Kamin H. (Ed.). Baltimore, Univ. Park Press, 1970.

97. Зинченко В.П., Щипакин В.H., Карнаухов В.H. Люминесцентное определение флавопротеинов и

пиридиннуклеотидов в микросомах и митохондриях.- В кн.: "Митохондрии. Молекулярные

механизмы ферментативных реакций". М., “Наука”, 1972, 185-188.

98. Duysens L.N.М., Amez J. Fluorescence spectrophotometry of reduced phosphopyridine nucleotide in

intact cells in the nearultraviolet and visible region.- Biochim. et biophys. acta, 1957, v. 24, 19.

99. Chance В., Baltscheffsky H. Respiratory enzymes in oxidative phosphorylation. VII. Binding of

intramitochondrial reduced pyridine nucleotide.- J. Biol. Chem., 1958, v. 233, 736.