Журнал. Биотехнология. Теория и практика

Подождите немного. Документ загружается.

Биотехнология. Теория и практика. № 20092

к возрастанию или уменьшению содержания

ДНК,

хромосомным и генным мутациям,

нарушению структуры хроматина, что, в

свою очередь, приводит к клеточному поли-

морфизму, наблюдаемому при цито-

логическом исследовании. В нормальных

клетках молочной железы содержание ДНК

диплоидное (2с); в период лактации в

клетках обнаружено как диплоидное (2с),

так и тетраплоидное (4с) содержание ДНК,

что указывает на нормальную проли-

ферацию. При доброкачественных заболева-

ниях молочной железы в 97,9% наблюдениях

обнаружены только диплоидные клетки, и

лишь в 2,1% случаях предраковой

пролиферации эпителия выявлены

анеуплоидные ДНК-гистограммы [9]. При

злокачественных новообразованиях

молочной железы в 55-75% случаев

выявляются анеуплоидные опухоли[9, 10].

прогностических маркеров клинического

исхода и связан с обоснованием адекватной

гормональной терапии – в случаях эстроген-

или прогестерон-позитивной опухоли,

последняя управляема и контролируема

антиэстрогеновыми препаратами [6, 7].

Определение рецепторов стероидных

гормонов позволяет составить прогноз

заболевания. Так, не леченные пациенты с

первичнодиагностированным РМЖ и

отрицательными рецепторами эстрогенов

имеют более высокий риск рецидива по

сравнению с пациентами в аналогичной

стадии заболевания с положительными

рецепторами эстрогена. То же самое касается

больных, опухоли которых содержат

рецепторы прогестерона – выживаемость

без рецидивов и метастазов у них достоверно

выше, чем у пациентов с опухолями,

отрицательными по рецепторам прогес-

терона [8]. Для больных, находящихся в

репродуктивном возрасте, содержание

рецепторов прогестерона менее значимо,

чем для больных в менопаузе, а более

значимо содержание рецепторов эстрогенов.

Нарушения ДНК, происходящие в

опухолевых клетках в результате процессов

репликации, а также аномальное прохож-

дение клетки по клеточномуциклу приводят

Плоидность

Течение болезни у больных с диплоидными

опухолями значительно лучше, чем у

больныхс анеуплоидными опухолями.

Многофакторный анализ влияния

плоидности опухолевых клеток на общую

выживаемость показал, что у больных с

диплоидными и тетраплоидными опухолями

отмечалось относительно доброкачествен-

ное течение болезни. Показатели общей

выживаемости в каждой из двух групп

статистически значимо отличаются (р<0,05)

от соответствующих показателей больных с

анеуплоидными опухолями[9, 10].

Протоонкоген Her-2/neu (c-erbB-2)

локализуется в 17 хромосоме и кодирует

трансмембранный белок (185 кД),

обладающий тирозин-киназной

активностью, по строению гомологичный

рецептору эпидермального фактора роста

(EGFR). Название Her-2 происходит в

результате сокращения полного названия

этого онкогена «Human Epidermal growth

factor Receptor». Установлено, что ген,

кодирующий Her-2/neu белок, входит в

состав семейства тирозин-киназных рецеп-

торов, состоящего из четырех взаимо-

связанных рецепторных молекул: EGFR или

Her-1 (erbB-1), Her-2 (erbB-2), Her-3 (erbB-3)

и Her-4 (erbB-4) [11,12, 13].

Факторы опухолевого роста

HER-2/neu - эпидермальный фактор

роста.

Комбинация рецепторов Her-2 и Her-3

является важным фактором для возникно-

вения РМЖ и его прогрессии. Her-4

обуславливает блокирование роста

опухолевых клеток (его обнаружение

связывают с благоприятным прогнозом

РМЖ) [14].

Гиперэкпрессия белка Her-2/neu

обнаружена во многих типах опухолей

эпителиального происхождения и

ассоциированы с худшим прогнозом течения

РМЖ. Наличие негативного Her-2/neu-

статуса хорошо

[8].

Сверхэкспрессия Her-2/neu свидетельствует

о резистентности опухоли к химиотерапии.

У больных РМЖ с метастазами при

адъювантной химиотерапии тамоксифеном

5-летняя выживаемость при отсутствии

коррелирует с чувствитель-

ностью пациентов к химиотерапии

Биотехнология. Теория и практика. № 20092

что является важной составляющей

проце

ссов регенерации и репарации тканей

(заживление ран), а также женского

репродуктивного цикла. При патологичес-

ких процессах, например, опухолеобра-

зовании, связанных с нарушением

механизмов, регулирующих деятельность

сосудистой системы, образование новых

сосудов осуществляется за счет неоангио-

генеза. Это комплексный процесс, зави-

сящий от множественных взаимодействий

опухоли и окружающей ткани, от баланса

стимулирующих ангиогенез эндотелиаль-

ных ростовых факторов (VEGF). Члены

семейства VEGF оказывают свое влияние на

эндотелиальные клетки, действуя через

специфические тирозин-киназные рецеп-

торы: VEGFа, .VEGFb, VEGFc, VEGFd

экспрессии Her-2/neu равнялась 75%, а при

его сверхэкспрессии снижалась до 13%

[15,16]. Наличие сверхэкспрессии Her-2/neu

является показанием (при соматическом

благополучии, не считая основного

заболевания) к применению препарата

герцептин (гуманизированное моно-

клональное антитело, избирательно

блокирующее экстрацеллюлярный домен

рецептора к эпидермальному фактору роста)

[17]. Недавно получено новое anti-ErbB2

моноклональное антитело - 6G10,

внутрибрюшинная инъекция которой

полностью останавливала рост опухоли,

индуцированных инъекцией опухолевых

клетокРМЖ - BT47 и SK-BR-3 [18].

Экспрессия Her-2/neu подтверждается

проведением FISH-метода (оценка амплифи-

кации гена). Таким образом, маркер

Her-2/neu можно считать фактором неблаго-

приятного прогноза, а его высокую экс-

прессию показателем высокой метастати-

ческой способности опухоли [19]. Диагнос-

тические тесты определения Her-2/neu в

сыворотках крови обеспечивают возмож-

ность контроля эффективности лечения или

прогрессии болезни у пациентов РМЖ [20].

Во взрослом организме образование

новых капилляров происходит за счет

ангиогенеза из предсуществующих сосудов,

VEGF - фактор роста эндотелия

сосудов

Регуляторы клеточного цикла

Степень злокачественности и дифферен-

цировки РМЖ во многом определяется

пролиферативной активностью опухолевых

клеток. Изучение негистонового протеина

Ki-67 (маркера пролиферации), экспрес-

сирующегося во всех клетках, вышедших из

G фазы, позволяет определить пролифера-

тивный потенциал опухоли и судить о

степени злокачественности [23]. Моно-

клональные антитела Ki-67, используемые

для определения числа пролиферирующих

клеток, окрашивают ядра делящихся клеток

во всех активных фазах клеточного цикла

(поздней G ,S и G +M), исключая фазу покоя

G и раннюю G фазу. Рисунок окрашивания

клеток антителами MIB1 на парафиновых

срезах полностью соответствовал характеру

окраски клеток антителами Ki-67 на свеже-

замороженном материале, полученном от

тех же больных. Быстрый клеточный обмен в

высокопролиферирующих опухолях может

служить свидетельством их агрессивности.

Опухоли, которые имеют более высокий

пролиферативный индекс (определяемый

как отношение Ki-67 позитивных клеток к

общему числу клеток), как правило,

низкодифференцированные [24, 25].

представляет собой протеин,

регулирующий клеточный цикл, который

экспрессируется в конце G -фазы и

поддерживается в клетке на протяжении

S фазы. Комплекс циклин/циклинзависимую

киназа 2 нициирует целый каскад событий,

Циклин Е

и VEGFe. Эти рецепторы представляют

собой трансмембранные белки со сходной

структурой. При РМЖ экспрессируются все

типы ангиогенных факторов, но внутри-

опухолевая концентрация VEGFа значи-

тельно выше остальных [21].

Некоторые исследователи обнаружили

связь между уровнем экспрессии VEGFа и

безрецидивной выживаемостью больных.

Значительно более короткий период

выживания был у пациентов с высокими

значениями экспрессии VEGFа. Установле-

но, что активация индукции ER_в культи-

вируемых линиях клеток РМЖ сопровож-

дается увеличением экспрессии VEGF [22].

Биотехнология. Теория и практика. № 20092

пролиферирующих и регенерирующих

тк

анях и определяющий апоптотический

путь элиминации клеток. Одним из

«стратегических» решений опухолевой

ткани представляется мутация гена с

синтезом «мутантного» типа (mt р53) белка,

«имитирующего» свойства «дикого» и,

таким образом, ускользающего из-под

влияния системы иммунного надзора.

Накопление mtр53 свидетельствует об

агрессивном поведении формы РМЖ, более

коротком безметастазном и безрецидивным

периоде, худшем прогнозе и более

«жесткой» терапии [30, 31].

Ген Bcl-2

представляет собой протоонкоген,

локализующийся в 18 хромосоме человека. В

настоящее время его считают одним из

Bcl-2-онкопротеин.

приводящих к разблокировке генов,

специфичных для S-фазы [26, 27]. Более чем

в половине случаев со сверхэкспрессией

циклина Е наблюдается мутация р53-онко-

протеина и анэуплоидия опухолевых клеток

[26, 27, 28]. Высокая экспрессия циклина Е

отражает крайне неблагоприятное течение

опухолевого процесса, особенно у пациен-

тов,не получавших химиотерапии[29].

За последнее время

доказано, что в эукариотических клетках

противоопухолевые препараты индуцируют

апоптоз посредством повреждения ДНК.

Программируемая клеточная гибель

является зависимым процессом, т. е. для ее

активации необходимы специфические

гены, а именно - активация гена p53 (маркера

апоптоза). В обычных условиях ген р53

является «защитником» генома, «реанима-

тором» ДНК, а также индуктором апоптоза.

При сублетальных повреждениях ДНК,

данный ген блокирует клеточный цикл в G -

фазе, и запускает процессы восстановления

ДНК [5]. Следовательно, р53 в норме

является ограничителем пролиферативной

активности клеток и ингибитором

злокачественных трансформаций.

Мутация р53 наиболее часто встречается

в онкогенезе. На данный момент описаны 2

типа р53-протеина: wt (wild type) p53 –

«дикий» тип р53, присутствующий во всех

Онкопротеины-регукляторыапоптоза

Р53-онкопротеин.

основных ингибиторов апоптоза опухоле-

вых клеток. Онкопротеин Bcl-2 – маркер,

свидетельствующий о блоке апоптоза в

опухолевой ткани (экспрессия bcl-2 спо-

собствует защите клеток от инициации

гибели и отсутствии ответа при проведении

химиотерапии). Bcl-2 выполняет противо-

положную функцию гену р53 в регуляции

апоптоза [32]. Установлено, что экспрессия

bcl-2 коррелирует с позитивным ER-стату-

сом и более длительным безметастазным и

безрецидивным периодом по сравнению с

bcl-2-негативными РМЖ.

Для РМЖ повышенная экспрессия bcl-2

связана с лучшим прогнозом исхода

заболевания и чувствительностью опухоли к

химиотерапии [33]. Чем выше экспрессия

Bcl-2 при РМЖ, тем лучше выживаемость

пациентов. Резистентность к воздействию

противоопухолевых препаратов и облуче-

нию может быть обусловлена повышенной

экспрессией Bcl-2, поскольку гибель опухо-

левых клеток при этих воздействиях проис-

ходит по механизму апоптоза. Таким обра-

зом, экспрессия Bcl-2 имеет непосредствен-

ное отношение и к эффективности химио-

терапии.

представляет со-

бой поверхностный протеогликан, который

осуществляет регуляцию клеточной проли-

ферации, адгезию неопластических

клеток в строме и инвазивные свойства

опухолевой ткани

Маркеры клеточной кластерной

дифференцировки

Синдекан-1 (CD138)

[34, 35]. При высоком

уровне экспрессии синдекана-1 существен-

но повышается смертность при РМЖ.

Синдекан-1экспрессируется как в эпителии,

так и в строме опухолевой ткани (61 и 67%

соответственно). Потеря экспрессии синде-

кана в эпителиальном компоненте опухоли

коррелирует с показателями выживаемости

[36, 37]. При наличии экспрессии синдекана-

1 в эпителиальном компартменте опухоли

10-летняя выживаемость составляет 65%,

тогда как при его отсутствии - 82% [35].

из семейства Са -зависи-

мых молекул клеточной адгезии, в обычных

условиях экспрессирующийся в ткани

молочной железы, используется как маркер

Е-кадгерин

Биотехнология. Теория и практика. № 20092

Раковоэмбриональный антиген (РЭА)

–

поверхностный гликопротеид с

молекулярной массой 200-250 кД. Среди

больных РМЖ высокий уровень РЭА

отмечается у 20-53% лиц. Повышенная

концентрация РЭА в крови до операции дает

основание заподозрить поражение регионар-

ных лимфатических узлов. Определение

РЭА в сыворотке крови не применимо для

диагностики I-II стадий рака молочной желе-

зы из-за его низкой специфичности, но

может оказать большую пользу совместно с

СА15-3 для выявления рецидивов и метаста-

зов в отдаленный период после операции и

оценки эффективности лечения [46]. Ис-

пользование аналогичной комбинации анти-

генов обусловило возможность раннего

обнаруженияРМЖ [47].

прогноза течения РМЖ (в связи с активиза-

цией опухолевого роста из-за утраты клеточ-

ных взаимодействий) [38, 39]. При анализе

экспрессии Е-кадгерина в дольковых РМЖ

учитывается только мембранное распреде-

ление метки. По данным Rakha E.A. с соавт.,

2005 [40], в 7,2% случаев дольковых РМЖ

отмечается отсутствие экспрессии Е-кадге-

рина. Таким образом, утрата экспрессии Е-

кадгерина свидетельствует о худшем прогно-

зе течения РМЖ [38]. Другими исследова-

телями установлена существенная корреля-

ция между показателями E-cadherin и

статусом лимфоузлов при инвазивно-прото-

ковой карциномах [41].

Изучение экспрессии опухолевыми клет-

ками матриксных металлопротеиназ (ММР)

также целесообразно при оценке статуса

РМЖ, поскольку отражает способность к

деградации экстрацеллюлярного матрикса,

разрушению базальных мембран, а также к

метастазированию и инвазии [41, 42].

Наиболее изученными при РМЖ являются

MMP 2 и 9 типов. На сегодняшний день 5-

летняя выживаемость у пациентов с ER-

MMP9+статусом составляет 37%, тогда как

при ER-MMP9 – 63% [43, 44, 45]. При оценке

экспрессии MMP9 необходимо учитывать

реакцию как в опухолевой ткани, так и в

строме.

Матриксныеметаллопротеиназы

Мукогликопротеин СА 15-3 является

повышенного его уровня в крови больше,

чем у больных без метастазов. Содержание

ТПА быстро уменьшается после любой

терапии, т.е. определение его может быть

полезно при мониторинге за больными

РМЖ. Повышение уровня ТПА в крови чаще

наблюдается при прогрессировании опухо-

левого процесса [49].

В соответствии с вышеизложенным, ис-

следователи считают возможным уже в бли-

жайшее время создать модель, в частности,

для канцерогенеза РМЖ, включающую в

себя исторически накоплен-ные и частично

систематизированные знания о некоторых

биологических особенностях и факторах

прогноза при РМЖ. Очевидно, что в основе

этой модели будут нарушения в геноме на

тканевом уровне, проявляющиеся в не-

контролируемой пролиферации опухолевых

клеток, а также на клеточном уровне - в от-

клонениях содержания ДНК в опухолевых

клетках от нормального, то есть в виде анеу-

плоидии. Следовательно, параметры моле-

кулярно-генетических маркеров, ассоциро-

ванных с канцерогенезом, могут быть отра-

жением биологической агрессии опухоли.

опухолевым маркером РМЖ (с молекуляр-

ной массой 300 кД), полученным и

охарактеризованным с помощью гибридом-

ной технологии. Уровень маркера в крови в

норме не должен превышать 10 МЕ/мл.

Определение уровня СА15-3 обычно

используется для мониторинга течения

заболевания и эффективности терапии при

карциноме молочной железы по сравнению с

ее доброкачественными заболеваниями [48].

Повышенный уровень наблюдается пример-

но у 80% женщин с метастазирующим РМЖ.

Рецидив часто сопровождается значитель-

ным повышением уровня СА 15-3 в

сыворотке задолго до клинических прояв-

лений заболевания[46].

представляет собой компонент

клеточного эндоплазматического ретикулу-

ма и поверхностной мембраны. При I-II

стадиях рака молочной железы средние

показатели концентрации ТПА в сыворотке

крови не отличаются от нормы, но

повышение уровня растет по мере

распространенности процесса. У больных

РМЖ с метастазами частота (60 – 64%)

Тканевый полипептидный антиген

(ТПА)

Биотехнология. Теория и практика. № 20092

Литература

Заридзе Д. Г.Канцерогенез. - М.:Медицина,2004. - С. 576.

2. Тюряева И.И. Опухолевые антигены // Цитология.- 2007. – Т 50. - №3. - С.189-209.

3. Шпонька И.С., Бондарева В.А., Гриценко П.А. Роль тканевых маркеров оценке

биологических свойств и прогнозе течения рака молочной железы // Проблемы онкологии. -

2007. - №6. - С. 68-79.

4. Fitzgibbons M.D., Zhou B.P., Li Y., Hung M.C. Prognostic Factors in Breast Cancer //Arch.

Pathol. Lab. Med. - 2000. -Vol. 124. - P. 966–978.

5. Shirley SH, Rundhaug JE, Tian J et al. Transcriptional regulation of estrogen receptor-alpha

by p53 in human breast cancer cell // Cancer Research. - 2009. -Vol. 15. - ?.

6. Esslimani-Sahla M., Marin M.C., Brishay S. Increased estrogen receptor betacx expression

during mammary carcinogenesis // Clin. Cancer Res. - 2005. - Vol.11,№9. - P. 3170-3174.

7. Wojnar A, Drozdz K, et al., Differentiated expression of estrogen

receptors (ER) and progesterone receptors (PgR) in ductal breast cancers // Folia Histochem

Cytobiol. - 2009. – Vol. 47. - ?.

8. Hiroko Nogi, Tadashi Kobayashi, Isao Tabei et al., The predictive value of PgR and HER-2

for response to primary systemic chemotherapy in infl ammatory breast cancer // Int. J. Clin. Oncol. -

2008. – Vol. 13. - Р. 340–344.

9. Богатырев В.Н. Прогностическое значение отдельных количественных параметров

клеток опухоли. Клиническая лабораторная аналитика / Под ред. В.В. Меньшикова. - М.:

Медицина, 1999. – Т. 2. – С. 189.

10. Taniguchi E, Yang Q, Tang W et al. Cytologic grading of invasive breast carcinoma // Acta

Cytologica. – 2000. – Vol .44. – P.587-591.

11. Montgomery R.B., Jacobson M.D., Burne J.F., et al. Endogenous anti-HER2 antibodies

block HER2 phosphorylation and signaling through extracellular signal-regulated kinase // Cancer

Res. - 2005. - Vol. 65, №2. - P. 650-656.

12. Hayes D.F., Thor A.D. C-erbB-2 in breast cancer: development of a clinically useful marker

// Semin. Oncol. - 2002. - №3. - P.231-245.

13. Nunes R.A., Harris L.N. The HER2 extracellular domain as a prognostic and predic-tive

factor in breast cancer // Clin. Breast Cancer. - 2002. - №2. - P. 125-135.

14. Angelos K. Koutrasa, George Fountzilasb, Konstantine T. Kalogerasb et al., The upgraded

role of HER3 and HER4 receptors in breast cancer // Critical Reviews in Oncology/Hematology. -

2009. – Vol. 142. - Р. 651-663.

Podhorska-Oko wMł

15. Revillion F., Bonnetere J., Peyrat J.P. C-erb-B2 oncogene in human breast cancer and its

significance // Europ. J. Cancer. – 2008. - Vol. 34. – P. 808-818.

16. Tsutsui S., Joosens E., Makar A.,. et al. Prognostic value of c-erbB2 expression in breast

cancer // J. Surg. Oncol. - 2002. - Vol. 79, №4. - P. 216-223.

17. BankfalviA. HER-2 diagnostics / Mag. Onkol. - 2002. - Vol. 46, №1. - P. 11-15.

18. Seiji Kawa a, Hirohisa Matsushita b, Hirokazu Ohbayashi b. et al., A novel mouse

monoclonal antibody targeting ErbB2 suppresses breast cancer growth // Biochemical and

Biophysical Research Communications. - 2009. – Vol. 384. - Р. 329–333.

19. Meche A, , Raica M., Immunohistochemical expression and significance of

epidermal growth factor receptor (EGFR) in breast cancer // Rom.J. Morphol. Embryol. - 2009. –

Vol. 50. - Р. 217-221.

Cmpean AM

20. Seidenfeld J, Samsom DJ, Rothenberg BM et al., HER2 testing to manage patients with

breast cancer or other solid tumors // Evid. Rep. Technol. Assess (Full Rep). – 2008. – Vol. 172. – Р.

362-376.

21. Relf M, LeJeune S, Scott PAE et al. Expression of angiogenic factors vascular endothelial

growth factor, acidic and basic fibroblast factor, tumor growth factor -1, platelet-derived

endothelial growth factor, placenta growth factor and pleiotrofin in human primary breast cancer

Биотехнология. Теория и практика. № 20092

33. Laura M. Vargas-Roiga, F. Darı´o Cuello-Carrio´na et al., Prognostic value of Bcl-2 in breast

cancer

patients treated with neoadjuvant anthracycline based chemotherapy // Molecular Oncology.

- 2008. –Vol. 2. - Р. 102-111.

34. Su G, Blaine SA, Qiao D, Friedl A, Membrane type 1 matrix metalloproteinase-mediated

stromal syndecan-1 shedding stimulates breast carcinoma cell proliferation. - 2008. - Vol. 68. - Р.

9558-9565.

35. Tsanou E. Nunez G., Milliman C. et al Clinicopathological study of the expression of

syndecan-1 in invasive breast carcinomas. correlation with extracellular matrix components // J.

Exp. Clin. Cancer Res. - 2004. - Vol. 23, №4. - P. 641-650.

36. Leivonen M. Homesley H.D., Zaino R: et al. Prognostic value of syndecan-1 expression in

breast cancer // Oncology. - 2004. - Vol. 67, №1. - P. 11-18.

and its relation to angiogenesis // Cancer Res. – 1999. –Vol. 57. – P. 963-969.

22. Rebecca A. Stein, Stйphanie Gaillard, Donald P. McDonnell, Estrogen-related receptor

alpha induces the expression of vascular endothelial growth factor in breast cancer cells // Journal of

Steroid Biochemistry & Molecular Biology. - 2009. – Vol. 114. - Р. 106–112.

23. Maggie C. U. Cheang , Stephen K. Chia , David Voduc et al., Ki67 Index, HER2 Status, and

Prognosis of Patients With Luminal B Breast Cancer// J. Natl .Cancer Inst. - 2009. – Vol. 101. - Р.

736–750.

24. Molino A, Micciolo R, Turazza M, et al. Ki-67 immunostaining in 322 primary breast

cancers: association with clinical and pathological variables and prognosis // Int. J. Cancer. - 1997. -

Vol. 74. - P. 433–437.

25. Jeziorski A, Blonski JZ, Niewiadomska H. The expression of products of oncogens c-erbB2

and EGFR and proliferating antigens Ki67 and PCNA in primary invasive ductal cancer of female

breast.// J Exp Clin Cancer Res. – 2000. – Vol. 19. – P.61-67.

26. Lindahi T. Kandemir E.G.,Yaylaci M., et al. Overexpression of cyclin E protein is associated

with specific mutation types in the p53 gene and poor survival in human braest cancer //

Carcinogenesis. - 2004. - Vol. 2, №3. - P. 375-380.

27. Chappius P.C., Onyekwere O., Sidransky D., et al. Cyclin E expression in breast cancer:

predicting germline BRCA1 mutations, prog-nosis and response to treatment //Ann. Oncol. // 2005.

-Vol. 16, №5. - P.735-742.

28. Span P.N., Kommos F., Pfisteres J., et al. Cyclin E is a strong predictor of endocrine therapy

failure in human breast cancer // Oncogene. - 2003. - Vol. 22, №31. - P. 4898-4904.

29. Agarwal R, Gonzalez-Angulo AM, Myhre S, Carey M et al., Integrative analysis of cyclin

protein levels identifies cyclin b1 as a classifier and predictor of outcomes in breast cancer // Clin

Cancer Res. - 2009. – Vol. 15. - Р. 3654-3662.

30. Elledge R.M., Green S., Howes L., Clark G.M., Berardo M., Allred D.C., Pugh R., Ciocca

D., Ravdin P., O'Sullivan J., Rivkin S., Martino S., Osborne C.K. Bcl-2, p53, and Response to

Tamoxifen in Estrogen Receptor-positive metastatic breast cancer: A Southwest Oncology Group

Study // J. Clinical Oncology. - 1997. - Vol.15, p. 1916-1922.

31. Golubovskaya VM, Conway-Dorsey K, Edmiston S. FAK overexpression and p53

mutations are highly correlated in human breast cancer // Int. J. Cancer. - 2009. – Vol. 7. - Р.1276-

1284.

32. RuibalA. NaimiA, EftekhariA, MesbahA. et al. Clinico-biological impact of pS2 positivity

in estrogen receptor negative-infiltrating ductal carcinomas of the breast // Rev. Esp. Med. Nucl. -

2000. - Vol. 19, №6. - P. 428-433.

37. D. Loussouarn, L. Campion, C. Sagan et al., Prognostic impact of syndecan-1 expression in

invasive ductal breast carcinomas // British Journal of Cancer. - 2008. – Vol. 98. - Р. 1993–1998.

38. Somesh Baranwal, Suresh K. Alahari, Molecular mechanisms controlling E-cadherin

expression in breast cancer // Biochemical and Biophysical Research Communications. - 2009. –

Vol. 384. - Р. 6–11.

39. Wang L.H. Vega F.J., Caldes T., et al Relationship between lymph node metastasis and the

expressions of E-cadherin, N-cadherin, and matrix metalloproteinase in breast carcinoma //Ai

Биотехнология. Теория и практика. № 20092

Түйін

Summary

Қазіргі заман ұғымында ісіктің даму процессі, сонымен қатар сүт безінің ісігі, канцерогенезбен

ассоциацияланатын молекулалық-генетикалық факторларды идентификациялау клиникалылық тәжірибе және

эксперименталды мәліметтерге негізделеді. Ісікті трансфоромациялау молекулалық-генетикалық маркерлердің

параметрлері ісіктің биологиялық агрессиясының нәтижесінде байқалады.

Modern representations about development of tumoral process, and in particular a breast cancer, are based both on

big clinical experience, and on experimental data of identification of molecular-genetic factors that associated with

oncogenes. Parameters of molecular-genetic markers of tumoral transformation may influence to the biological

aggression of tumor.

Vol. 384. - Р. 6–11.

39. Wang L.H. Vega F.J., Caldes T., et al Relationship between lymph node metastasis and the

expressions of E-cadherin, N-cadherin, and matrix metalloproteinase in breast carcinoma // Ai

Zheng. - 2002. - Vol.21, №9. - P.965-969.

40. Rakha E.A. Ichihara A., Tanaka K. et al. E-cadherin expression in invasive non-lobular

carcinoma of the breast and its prog-nostic significance // Histopathology. - 2005. - Vol. 46, №6. - P.

685-693.

41. Mohammadizadeh F, Ghasemibasir H, Rajabi P et al., Correlation of E-cadherin expression

and routine immunohistochemistry panel in breast invasive ductal carcinoma // Cancer Biomarkers.

- 2009. –Vol. 5. - Р. 1-8.

42. Sangmin Kim, Jae Hyuck Choi, Hye In Lim, Se-Kyung Lee Silibinin prevents TPA-induced

MMP-9 expression and VEGF secretion by inactivation of the Raf/MEK/ERK pathway in MCF-7

human breast cancer cells // Phytomedicine. - 2009. - Vol .16. - Р. 573–580.

43. Pellikainen J.M. Lopez J.A., Torres A.J., et al. Expression of matrix metalloproteinase

(MMP)-2 and MMP-9 in breast cancer with a special reference to activator protein-2, HER2, and

prognosis // Clin. Cancer. Res. - 2004. -Vol. 15, №22. - P.7621-7628.

44. Wang H.Y. Caldes T., Massa M., et al Expression of matrix metalloproteinase 9 (MMP-9)

and laminin-receptor in breast carcinoma and their correlation with tumour metastasis and prognosis

//Ai Zheng. - 2003. - Vol. 22, №5. - P. 529-532.

45. Rahko E. Aroni K., Delivelioti K., et al. Matrix metalloproteinase-9 (MMP-9)

immunoreactive protein has modest prognostic value in locally advanced breast carcinoma patients

treated with an adjuvant anti-estrogen therapy // Anticancer Res. - 2004. - Vol. 24, №6. - P. 4247-

4253.

46. Mariani L, Miceli R, Michilin S, Gion M., Serial determination of CEAand CA15.3 in breast

cancer follow-up: an assessment of their diagnostic accuracy for the detection of tumour recurrences

// Biomarkers. - 2009. - Vol .14(2). - ?.

47. Verma M. Breast Cancer Screening and Biomarkers // Methods of Molecular Biology,

Cancer Epidemiology . - 2009. –Vol. 472. – 256 р.

48. Adrian Kruit, Madeleine M. Tilanus-Linthorst, Joke G. Boonstra et al. MUC1 568 A/G

genotype-dependent CancerAntigen 15-3 levels in breast cancer patients // Clinical Biochemistry. -

2009. – Vol. 42. - Р. 662–665.

49. AydinerA, Topuz E, Disci R, et al. Serum tumor markers for detection of bone metastasis in

breast cancer patients //Acta Oncol. - 1994. – Vol. 33. - Р. 181–186.

Биотехнология. Теория и практика. № 20092

УДК

МАКР

О- И МИКРОВАРИАБЕЛЬНОСТЬ ГАСТРИТ - АССОЦИИРОВАННОЙ

БАКТЕРИИ

575.113.4:579.835.12, 575:579.84

HELICOBACTER PYLORI

К.Т. Момыналиев

Национальный центр биотехнологий Республики Казахстана, г. Астана

Научно-исследовательский институт физико-химической медицины, г. Москва

Helicobacter pylori –

H. pylori

Helicobacter pylori

pylori

H. pylori

pylori

грамотрицательная,

микроаэрофильная бактерия, колони-

зирующая слизистую желудка и ассоцииро-

ванная с язвенной болезнью желудка и

двенадцатиперстной кишки, атрофическими

гастритами, аденокарциномой или экстра-

нодальной В-клеточной MALT-лимфомой

(Mucosa Associated Lymphoid Tissue) [1-4, 5,

9, 10]. является одним из самых

распространенных возбудителей ин-

фекционных заболеваний. Согласно

некоторым эпидемиологическим оценкам,

более половины населения мира

инфицированы этим микроорганизмом,

однако инфекция часто не имеет

клинических проявлений. Только у

определенной части инфицированных

людей (10–15%) с течением времени

появляются клинически значимые

симптомы заболевания: развивается

хронический гастрит, язвенная болезнь

желудка и двенадцатиперстной кишки, рак

желудка. В 2005 г. первооткрыватели

бактерии, австралийские врачи Робин

Уоррен (Robin Warren) и Барри Маршалл

(Barry Marshall), были удостоены

Нобелевской премии по физиологии и

медицине «за открытие бактерии

и ее роли в развитии

гастрита и язвы желудка» [60, 93].

Интенсивное изучение физиологии

и его факторов вирулентности вызвано

в первую очередь тем, что у 80% больных,

страдающих раком желудка, в анамнезе была

зафиксирована инфекция [6-8]. В

1995 г. Международная ассоциация по

изучению рака (IARC, ВОЗ) признала

канцерогеном 1 класса.

Эпидемиологические и серологические

исследования показали, что клиническая

картина заболеваний, вызываемых

во многом зависит от факторов

вирулентности, таких как CagA, VacA, IceAи

BabA [15, 21, 27, 44]. Однако до настоящего

времени не обнаружено тесной связи между

определенным генотипом

(различные комбинации аллелей

и ) и заболеваниями желудочно-

кишечного тракта. С другой стороны,

классификация , проведенная с

помощью различных молекулярно-

биологических методов (вычитающая гиб-

ридизация, амплификация со случайными

праймерами, пульс-электрофорез), выявила

значительную межштаммовую гетеро-

генность этой бактерии и показала, что

каждый инфицированный индивид является

носителем уникального штамма .

В отличие от многих других бактерий, в

изолятах идентичные аллели генов

встречаются очень редко. Экстраординарная

генетическая гетерогенность была

впервые показана Кансау и соавт. в 1996 г.

[47]. Было продемонстрировано, что среди

29 клинических штаммов

нуклеотидная последовательность

является уникальной для каждого штамма. В

настоящее время уникальность

нуклеотидных последовательностей

подтверждена на большом количестве

генов: ,

причем для большинства пар генов между

неродственными штаммами обычно

наблюдается 5%-ная нуклеотидная

дивергенция. Для сравнения, гомология

ДНК между двумя родственными видами

составляет ~98–99% и ~85% между

H. pylori,

H. pylori

vacA, cagA,

babA iceA

H. pylori

ureC

pylori

cagA, vacA, flaA, flaB, cysS, ureI, trpC

H. pylori

Salmonella typhimurium Salmonella typhi

Биотехнология. Теория и практика. № 20092

представителями двух разных родов

и [99]. С

помощью ДНК-матриц было показано, что

уровень макровариабельности генома

на уровне генов может доходить до

25–30% от всех ОРС [39, 40, 43, 85].

Таким образом, в настоящее время

сложилась парадоксальная ситуация, когда

значительная генетическая вариабельность и

разнообразие достоверно

зарегистрированы, но механизмы, которые

обеспечивают генетическое разнообразие в

и значение этой вариабельности в

адаптации к хозяину и патогенезе, еще не

полностью понятны. Очевидный дефицит

генов в геноме участвующих в

процессах рекомбинации/репарации, пред-

полагает вероятное объяснение гене-

тического разнообразия высокой скоростью

мутаций, однако для подтверждения данного

предположения необходимо функционально

охарактеризовать значительную часть генов

этой бактерии. Не выявлены причины,

ограничивающие способность

импортировать только небольшие фрагмен-

ты чужеродной ДНК ( – в среднем

417 п.н., 6000 п.н.,

14000 п.н.), несмотря на естественную ком-

петентность природных изолятов[34, 63].

Скорость дивергенции внутри

хозяина в настоящее время остается также

предметом острых дискуссий. Если, по

данным Д. Фалуша и его коллег [35],

штаммы последовательно

выделенные, через определенные промежут-

ки времени от одного пациента варьируют

достаточно сильно, то А. Люндином [55]

было показано, что последовательно выде-

ленные штаммы изменяются незначительно

или вообще не меняются, по крайней мере за

9 лет. Возможно, что относительная

стабильность штаммов показанная

А. Люндином, обусловлена отсутствием

смешанной инфекции, вероятность которой

изменяется параллельно распространен-

ности инфекции хеликобактера в популяции

и оказывает очевидный эффект на

межштаммовую рекомбинацию. Другая

причина в расхождении оценки скорости

мутаций и рекомбинации может

заключаться в отсутствии согласованной

процедуры проведения исследований по

typhimurium Escherichia coli

pylori

H. pylori

H. pylori,

H. pylori

S. pneumoniae – E. coli –

H. pylori

H. pylori,

in vivo

генетической вариабельности В

большинстве исследований обычно харак-

теризуется только штамм

выделенный в определенное время, и

поэтому невозможно понять за какое время и

какиевариациипоявились в геноме

Целью данного обзора является оценка

современного состояния вопроса поиска

причин, обуславливающих макро- и

микрогетерогенность

H. pylori.

H. pylori,

H. pylori.

Патогенна ли бактерия Helicobacter

pylori?

Выше уже отмечалось, что только у

определенной части инфицированных

(10–15%) с течением времени появляются

клинически значимые симптомы болезни:

развивается хронический гастрит, язвенная

болезнь желудка и двенадцатиперстной

кишки, рак желудка. У 80% больных,

страдающих раком желудка, в анамнезе была

зафиксирована инфекция С другой

стороны, существует достаточно данных,

свидетельствующих, что в

зависимости от определённых условий мо-

жетбытьнетолькопатогеном,нои

симбионтом. Таким образом, несмотря на

интенсивные исследования, вопрос,

является ли истинно патогенным

микроорганизмом для человека до сих пор

остается открытым [22, 24].

Каждое млекопитающее является

носителем одного или более доминантных

видов , которые являются

высокоспецифичными для хозяина [51].

Например, хеликобактер, адаптировавшийся

к желудку человека, не может существовать в

организме других животных, за исключе-

нием других приматов [19]. Это согласуется

с гипотезой о том, что когда около 150 млн.

лет назад предки современных млекопитаю-

щих дивергировали от рептилий, они уже

были носителями хеликобактера, который

начал эволюционировать вместе со своими

хозяевами. Согласно этой гипотезе, хелико-

бактер представляет собой древнюю биоту

(флору)в желудке млекопитающих [24].

Хотя мы не можем точно установить, как

долго присутствует в желудке

человека, возможно, что предки этого

микроорганизма уже существовали, когда от

приматов около 4 млн. лет назад дивер-

H. pylori.

H. pylori

Helicobacter

H. pylori

Биотехнология. Теория и практика. № 20092

гировали предки современного человека. В

по

льзу этого предположения свидетель-

ствуют результаты филогеографических

исследований, указывающие, что у наших

предков уже присутствовал в

желудке, когда группа первобытных людей, в

конечном итоге населившая большую часть

планеты, покинула Африку более 58 тыс. лет

назад [54]. Во всяком случае, точно известно,

что колонизирует желудок человека

со времен Палеолита.

Человек приобретает в раннем

детстве, обычно после первого года жизни

[58]. Путь передачи – фекально-оральный и

орально-оральный [77]. После попадания в

желудок, в отсутствие приема антибиотиков,

персистирует на протяжении

десятилетий, а в большинстве случаев – в

течение всей жизни хозяина [88]. Штаммы

обладают значительной вариабель-

ностью, при этом на взаимодействие

макроорганизма и бактерий влияют

различные факторы. В частности, штаммы с

интактным островком (островок

патогенности) доставляют CagA в

эпителиальные клетки желудка хозяина, где

он фосфорилируется эукариотической

тирозинкиназой и вызывает ее морфологи-

ческие и функциональные изменения [72].

Штаммы не содержащие

островок в геноме, ассоциированы с

меньшим риском развития воспалительных

заболеваний желудка [64, 78].

На протяжении большей части своей

истории человек жил в небольших

родственных группах [17], в которых

микробиота свободно смешивалась между

отдельными ее членами. В условиях

отсутствия какой-либо гигиены практически

на протяжении всей истории существования

человека, передача желудочно-кишечных

микробов осуществлялась очень легко.

Сегодня в развивающихся странах, где

уровень гигиены еще не достиг уровня стран

Запада, повсеместно распростра-

нена и частота ее встречаемости у взрослого

населения составляет около 80%. В популя-

циях с высокой распространенностью

H. pylori

pylori

cag

H. pylori, cag

H. pylori

Инфицирование и персистенция H.

pylori

микроорганизма.

Несмотря на неопровержимые доказа-

тельства древности происхождения и

повсеместной колонизации у

людей, в настоящее время можно говорить о

том, что распространенность

быстро снижается. Это следствие так

называемого эффекта поколения, начавшего-

ся в начале ХХ в. во многих развитых

странах и усилившегося после Второй

мировой войны [16, 49, 79]. Этот эффект

настолько выраженный, что сегодня в США

и других индустриализованных странах

только менее 10% детей в возрасте до 10 лет

являются носителями по сравнению

с историческим уровнем 70–90% [49, 79, 38].

В результате такого изменения, наблюдаемо-

го в разных странах в различной степени,

стало возможным определить факторы риска

приобретения К ним относятся

большая семья (количество членов),

носительство родителями

(особенно матерью), брат или сестра,

положительные по , стесненные

условия проживания в детстве. Таким

образом, исчезновение с каждой

новой генерацией будет ускоряться,

поскольку вода будет становиться чище,

семья – меньше, а питание – лучше [97].

Другой феномен, который вносит свой

вклад в исчезновение является

широкое использование антибиотиков,

особенно в раннем детском возрасте [62].

Для адекватной эрадикации сегодня

необходима комбинация двух-четырех анти-

бактериальных препаратов, однако в ранних

исследованиях с применением монотерапии,

в том числе лактамными антибиотиками

и макролидами, частота успешной

эрадикации составляла 10–50% [81, 83].

Учитывая, что относительная эрадикация

происходит каждый раз, когда ребенок

получает антибиотики для лечения

инфекции верхних дыхательных путей,

инфекции кожи или отита, снижение

распространенности у детей в

развитых странах понять не трудно.

Проблема исчезновения H. pylori

H. pylori

H. pylori.

H. pylori

H. pylori,

H. pylori

H. pylori часто наблюдается колонизация

желудканесколькими штаммами этого