Новиков Д.К. (и др.). Медицинская микробиология

Подождите немного. Документ загружается.

301

стимулирует рост диплоидных фибробластов, приводя к повышению

продукции глюкозаминогликанов, коллагена и белков основного ве-

щества соединительной ткани, способствуя фиброобразованию.

Пролиферацию фиробропластов также активирует интерлейкин-

1 (ИЛ-1), вырабатываемый активированными макрофагами.

Наравне с активацией Т

-хелперного звена, также идет наработка

большого количества цитокинов в макрофагах с последующей акти-

вацией «респираторного взрыва». Но выбрасываемые при этом сво-

бодные радикалы не способны повредить жесткую клеточную стенку

как элементарных телец Chlamydia trachomatis, прочность которых

обеспечивается за счет антиоксидантной роли дисульфидных (-S-S-)

связей между структурными белками МОМР, так и ретикулярных те-

лец. Прочность последних обусловлена полисахаридной микрокапсу-

лой, устойчивой к супероксидному радикальному окислению. Вместо

микробицидного действия, активные формы кислорода приводят к

активации перекисного окисления липидов (ПОЛ) и повреждению

двойного фосфолипидного слоя мембран собственных клеток.

К цитокинам, вырабатываемым активированными макрофагами

относятся -интерферон ( -ИФ), фактор некроза опухоли- (ФНО- ) и

ИЛ-1. Функциями -ИФ является:

- усиление экспрессии антигенов клеточных мембран, включая

антигены главного комплекса гистосовместимости I и П классов, Fc-

рецепторы. Эти эффекты приводят к активации не только макрофагов,

но и к активации так называемых «непрофессиональных фагоцитов –

фибробластов и эпителиальных клеток, что приводит к возрастанию

адгезивной способности мембран непораженных клеток и быстрей-

шему их заражению – формируется первый порочный круг хлами-

дийного инфицирования;

- стимуляция выработки ИЛ-1 и ИЛ-2;

- регуляция иммунологической функции макрофагов, что прояв-

ляется в активации фагоцитарной активности – формирование второ-

го порочного круга;

- стимуляция выработки иммуноглобулинов В-лимфоцитами;

- индукция микробицидных продуктов метаболизма кислорода

(свободных радикалов).

Высокие дозы -ИФ полностью ингибируют рост хламидий. Низ-

кие же – напротив индуцируют развитие морфологически аберрант-

ных форм включений.

Воздействие -ИФ на эпителиальные клетки приводит к актива-

ции синтеза индоламн-2,3-диоксигеназы – фермента, запускающего

кислороде- и NADPH+H

-зависимый фенил-кинурениновый цикл де-

градации триптофана на наружной мембране митохондрий в цитозо-

ле. Истощение внутриклеточного пула триптофана вызьвает хлами-

302

дийную стресс-реакцию, что приводит к формированию патологиче-

ских морфологических форм Chlamydia trachomatis.

У персистирующих микроорганизмов изменена не только мор-

фология, но также и экспрессия ключевых хламидийных антигенов. У

аберрантных форм отмечается уменьшение синтеза всех основных

структурных компонентов, придающих особую прочность клеточной

стенке (МОМР, белок клеточной стенки массой 60 кДа и липополиса-

харид (ЛПС)). На этом фоне идет беспрерывный синтез белка тепло-

вого шока (hsp 60 (heat shock protein 60 kDa)). Данный белок запуска-

ют вторичный иммунный ответ, что является важным моментом в

иммунопатогенезе персистирующей инфекции и поддержании посто-

янной воспалительной реакции. Белок теплового шока (БТШ) массой

60 кДа ведет к:

а) антигенной перегрузке организма и запуску вторичного гумо-

рального ответа с гиперпродукцией IgG и IgA;

б) активации реакции гиперчувствитеяьности замедленного типа

(ГЗТ), обуславливая лимфоцитарную и моноцитарную инфильтрацию

подслизистых оболочек;

в) являясь подобием белков эукариот, стимулирует запуск ауто-

иммунного перекрестного ответа;

г) эффекту теплового шока у клетки-хозяина, стимулирует разви-

тие стресс-реакции у микроорганизма, проявлением которой является

остановка клеточного цикла на стадии ретикулярных телец. Активи-

рованные макрофаги также продуцируют ФНО- , который опосредо-

ванно через ИЛ-1, активирует пролиферацию основных клеток соеди-

нительной ткани, способствуя фиброобразованию. А также повышает

адгезивную способность лимфоцитов к эндотелию сосудов и реакти-

вирует макрофаги.

Таким образом, основным механизмом, препятствующим реди-

фереренциации РТ в ЭТ, является особый цитокиновый спектр веду-

щий к дефициту компонентов и/или блокаде синтеза белков наружной

мембраны ЭТ хламидий под действием медиаторов персистенции.

Это приводит к продолжению роста микроорганизма без соответ-

ствующего деления. Неполноценность наружной мембраны и клеточ-

ной стенки способствует увеличению интрацеллюлярного осмотиче-

ского давления, ответственного за разбухание хламидийных структур.

Трахома. Трахома – это хроническое инфекционное заболева-

ние, характеризующееся поражением клеток конъюнктивы глаза и

прилегающих тканей с образованием фолликулов, рубцов, первичным

поражением нервных окончаний в конъюнктиве и регионарных лим-

фатических узлах. Заболевание часто приводит к слепоте.

Иммунитет нестойкий.

Профилактика – неспецифическая.

303

Урогенитальные хламидиозы. По клиническим проявлениям

мало отличаются от поражения урогенитального тракта другими воз-

будителями. Часто приводят к трубному бесплодию.

Хламидийные конъюнктивиты новорожденных. Инфекции

новорожденных развиваются как следствие заражения при физиоло-

гических родах от больной матери. Заболевание характеризуется вос-

палительной инфильтрацией конъюнктивы нижнего века, часто за-

канчивается спонтанным выздоровлением. Реже развивается доброка-

чественный фолликулярный конъюнктивит, который продолжается

около года.

Орнитоз (пситтакоз). Впервые заболевание описано в конце

XIX века у лиц, контактировавших с попугаями. Резервуар инфекции

– различные птицы (более 150 видов). В природе основной резервуар

– водоплавающие птицы, в местах обитания человека основную опас-

ность представляют голуби, утки, индейки. Заболевание считается

профессиональным. Чаще болеют работники птицеводческих хо-

зяйств, где происходит заражение обслуживающего пресонала. Отме-

чается высокая летальность при генерализованных формах инфекции.

Пути передачи – воздушно-капельный или воздушно-пылевой.

Выражен тропизм к тканям дыхательных путей и лимфатическим уз-

лам. Наблюдается гибель зараженных эпителиальных клеток, местная

воспалительная реакция. Возбудитель поглощается макрофагами и

транспортируется в печень, селезенку. Здесь он размножается и дис-

семинирует с кровью в легкие и другие ткани. Формируются очаги

некротического гранулематозного поражения с большим количеством

геморрагий.

Возбудитель хламидийной бронхопневмонии (C. pneumoniae).

C. pneumoniae патогенна только для человека. Механизм передачи –

контактный. Инкубационный период составляет 1-2 недели. Заболе-

вание начинается с подъема температуры, головной боли. Сначала

поражаются верхние дыхательные пути, а затем развивается брон-

хопневмония.

Паховый лимфогранулематоз протекает циклично. Первая

стадия развивается через 1,5-2 недели после заражения. Появляются

пузырьки у входных ворот. Они переходят в эрозии, могут изъязв-

ляться. Затем наступает генерализованный период, который сменяется

третичным периодом – развивается спаечный процесс промежности

с появлением фистул.

Болезнь Рейтера – системный хламидиоз. На фоне дефектов си-

стемы иммунитета одновременно развивается триада симптомов –

уретрит, конъюнктивит, артрит.

304

Все хламидийные и хламидофильные инфекции сопровождаются

вторичными иммунодефицитами, возможна персистенция возбудите-

ля.

Лабораторная диагностика

Материал зависит от формы заболевания. При трахоме – соскоб

конъюнктивы глаза, при орнитозе – мокрота, при урогенитальных по-

ражениях – соскоб, отделяемое уретры, влагалища, моча.

Цитологический метод: приготовление мазков из скарификатов

пораженных тканей. Окрашивают по Романовскому-Гимзе и выявля-

ют ретикулярные тельца сине-голубого цвета возле ядра, элементар-

ные тельца обнаруживаются вне клетки, и они окрашиваются в розо-

вый цвет.

Цитоскопический метод широко доступен, но эффективен лишь

при острых формах инфекции, значительно менее эффективен и ин-

формативен при хронических формах заболевания. При урогениталь-

ном хламидиозе частота обнаружения телец Провачека в соскобах

уретры и цервикального канала не превышает 10-12 %. Наличие этих

телец подтверждает диагноз хламидиоза, однако их отсутствие не ис-

ключает наличие инфекции.

Иммуноцитологический метод – выявление антигенов возбуди-

теля в исследуемом материале с помощью специфических антител в

РИФ, ИФА, ВИЭФ.

Молекулярно-биологический метод – определение специфиче-

ского участка ДНК или РНК генома возбудителя полимеразной цеп-

ной реакцией (ПЦР) и методом рРНК-зондов, реже ДНК-зондов, ко-

торые являются уникальными генетическими маркерами. В настоящее

время культуральный метод считается «золотым стандартом» диа-

гностики хламидийной инфекции. Для этой цели обычно используют

чувствительную культуру клеток, обработанную циклогексамидом.

Чувствительность культурального метода по сравнению с ПЦР со-

ставляет 70-80%, но в то же время он превосходит молекулярно-

биологические методы диагностики по специфичности.

Хламидии культивируют на мышах, куриных эмбрионах или

культурах клеток. Заражают белых мышей внутрь мозга 3 раза, гото-

вят мазки отпечатки, выявляют ретикулярные тельца. Для идентифи-

кации используют реакцию нейтрализации образования ретикуляр-

ных телец. В курином эмбрионе для индикации используют реакцию

гемагглютинации, для идентификации – РТГА с моноклональными

антителами. В оболочках куриного эмбриона выявляют ретикулярные

тельца, их идентифицируют в реакции нейтрализации. В культуре

клеток через 6-8 дней выявляют включения в виде ретикулярных те-

лец с последующей их идентификацией в реакции нейтрализации.

305

Серологический метод – РСК, ИФА в парных сыворотках с типо-

выми и видовыми антигенами. В ИФА определяются антитела.

Аллергический метод – с 3 дня выявляют ПЧЗТ.

Профилактика неспецифическая – изоляция и лечение больных,

использование презервативов и других средств защиты от урогени-

тальных хламидиозов.

Лечение. Назначают антибиотики группы тетрациклина (докси-

циклин), азитромицин, иммуностимуляторы – цитокины, индукторы

интерферона и т.д.

306

XIX. МИКОПЛАЗМЫ

Микоплазмы – уникальная группа прокариотов, которая харак-

теризуется полным отсутствием клеточной стенки. Впервые с этой

группой бактерий столкнулся Л. Пастер, изучая плевропневмонию

крупного рогатого скота. В 1944 г. Итон выделил их из мокроты

больного атипичной пневмонией. В 1962 г. микоплазмы были выде-

лены в самостоятельный род.

Таксономия. Класс Mollicutes, порядок Mycoplasmatales.

Семейство Mycoplasmataceae включает 3 рода: род Mycoplasma, в

него входят виды: M. pneumoniae (патогенный), M. hominis,

М. arthritidis, М.genitalium, М. lipophilum, М.orale, М. buccale,

М. primatum, М. salivarium и др. – условно-патогенные микоплазмы.

Род Ureaplasma включает патогенный для человека вид U.urealyticum

(14 сероваров). Третий род Acholeplasma включает непатогенный для

человека вид А. laidlawaii.

Общие свойства

Морфологические. Мелкие (105-220 нм), грамотрицательные ор-

ганизмы, выражен полиморфизм, нет клеточной стенки, роль ее вы-

полняет трехслойная ЦПМ, состоящая из стероидов, липидов и бел-

ков. ЦПМ регулирует внутриклеточный метаболизм, обеспечивает ад-

сорбцию на эпителиальных клетках и эритроцитах. Микоплазмы

имеют специальные липопротеиновые структуры для взаимодействия

с рецепторами клеток макроорганизма, что способствует их перси-

стенции в организме людей. Нет спор, капсул, жгутики есть не у всех

видов.

Размножаются микоплазмы путем бинарного поперечного деле-

ния, фрагментацией клеток, почкованием и путем высвобождения

множества элементарных телец, образующихся в нитях.

Культуральные свойства. Факультативные анаэробы. Культиви-

руются в курином эмбрионе, культуре клеток и на специальных сре-

дах с высокой концентрацией серы, холестерином, кровью или сыво-

роткой, белковыми гидролизатами. Холестерин стабилизирует мем-

брану клетки, обусловливает проникновение и утилизацию жирных

кислот. Стерины являются источниками энергии. Колонии на этих

средах мелкие, их сравнивают с «яичницей-глазуньей». Для диффе-

ренциации микоплазм от уреаплазм их выращивают на средах с моче-

виной, аргинином или глюкозой и индикатором сульфатом марганца.

Уреаплазмы разлагают мочевину и дают через 5-7 дней рост коричне-

вых колоний, а микоплазмы мочевину не разлагают и дают рост бес-

цветных колоний.

Факторы патогенности: продукты обмена – ионы аммония; кото-

рые повышают чувствительность клеток к вирусам; ферменты агрес-

307

сии и инвазии (нейраминидаза, нуклеаза, фосфатаза, пероксидаза,

РНКаза, ДНКаза, тимидинкиназа, аминопептидаза), экзотоксин, об-

ладающий гемолитическим, некротическим и нейрогенным действи-

ем; эндотоксин, оказывающий пирогенное действие, вызывающий

лейкопению, тромбогеморрагические поражения, которые могут при-

вести к отеку легких, коллапсу.

Возможна персистенция микоплазм, что обеспечивает хрониче-

ское течение заболевания, характерен незавершенный фагоцитоз.

Резистентность. Очень неустойчивы в окружающей среде, чув-

ствительны к УФ-облучению, солнечным, рентгеновским лучам, из-

менению рН среды, к действию высокой температуры, высушиванию,

обычным химическим дезинфектантам.

Иммунитет нестойкий. Высока роль IgА, но они появляются

поздно.

Характеристика заболеваний

Микоплазменная пневмония и другие респираторные заболева-

ния.

Источник инфекции – больной человек.

Путь передачи – воздушно-капельный.

Входные ворота – верхние дыхательные пути.

М.pneumoniae обладают выраженным тропизмом к базальным

мембранам мерцательного эпителия. Адсорбция возбудителя приво-

дит к продукции перекисей, и, следовательно, к цитотоксическому

действию. Развиваются местные цитотоксические реакции в бронхах

и прилежащих тканях. В процесс вовлекаются альвеолы. Возможна

диссеминация процесса. В результате могут развиваться гемолитиче-

ские анемии, артриты, энцефалиты, что связано с нарушением в им-

мунной системе, появляется ПЧЗТ и аллергические реакции типа им-

мунокомплексных и цитотоксических.

Иммунитет после острой респираторной инфекции сохраняется в

течение 5-10 лет, обеспечивается антителами, макрофагами и Т-

лимфоцитами. После стертых форм инфекции иммунитет кратковре-

менный и слабо выражен.

Патогенез поражений урогенитального тракта.

Особенно опасен микоплазмоз для беременных, т.к. М.hominis и

М.genitalium способны колонизировать эндометрий и плод, индуци-

ровать выработку простагландинов и других метаболитов арахидоно-

вой кислоты. Микоплазмоз в ранние сроки беременности приводит к

ее прерыванию или задержке внутриутробного развития. В более

поздние сроки беременности возможно инфицирование плода через

систему кровообращения. Возникновение пороков развития плода

связано с необратимыми поражениями хромосомного аппарата эм-

308

бриона. Возможно и интранатальное заражение плода во время про-

хождения через родовые пути больной матери.

Урогенитальные микоплазмозы передаются половым путем и по

клиническим проявлениям почти не отличаются от урогенитальных

поражений другой этиологии.

Иммунитет нестойкий, гуморальный, в меньшей степени клеточ-

ный. Обеспечивается IgА, IgG и холодовыми IgМ к поверхностным

гликолипидам. В процессе заболевания развивается ПЧЗТ.

M.arthritidis может быть причиной воспаления синовиальных

оболочек суставов. Патогенез таких артритов требует изучения, но

достоверно установлено, что M.arthritidis может персистировать в си-

новиальной жидкости и тканях пораженных суставов.

Лабораторная диагностика

Материал для исследования. При пневмониях и ОРЗ исследуют

мокроту, при поражении урогенитального тракта – мочу, отделяемое

из уретры, влагалища, цервикального канала. В более поздние сроки

исследуют сыворотку на наличие антител.

Серологический метод. Исследуют парные сыворотки в ИФА,

РПГА, РСК с целью выявления увеличения титра антител в 3-4 раза.

Экспресс-диагностика. Для выявления антигена в качестве экс-

пресс-метода можно использовать РИФ или ИФА, ВИЭФ.

Бактериологический метод. Производят посев исследуемого ма-

териала на вышеуказанные среды для культивирования микоплазм.

Индикацию проводят по выявлению колоний типа «яичницы-

глазуньи», а идентификацию – по реакции ингибиции роста или

угнетения метаболизма со специфическими сыворотками на средах с

мочевиной, глюкозой или аргинином и индикатором, добавленным

непосредственно к среде. Если на средах рост отсутствует, то вид

микроба соответствует сыворотке. При оценке реакции ингибиции

метаболизма результаты оценивают по отсутствию изменений цвета

среды. При этом необходимо учитывать, что аргинин разлагают

М.hominis, глюкозу – M.hominis и M.geпitalium, маннозу –

M.pneumoniae, мочевину – U.urealyticum (субстраты разлагаются до

кислоты).

Молекулярно-биологический метод – ставят ПЦР со специфиче-

скими праймерами.

Метод молекулярной гибрдизации (ДНК-зондов) позволяет уста-

новить не только наличие микоплазм в исследуемом материале, но и

определить их видовую принадлежность.

Профилактика неспецифическая.

Лечение: назначают антибиотики (кроме группы пенициллина и

цефалоспоринов, т.к. микроб не имеет клеточной стенки). Лучше ис-

309

пользовать макролиды последнего поколения (рокситромицин, азит-

ромицин), а также тетрациклины (доксициклин).

310

B. ЧАСТНАЯ ВИРУСОЛОГИЯ

XX. ВОЗБУДИТЕЛИ ВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ ЧЕЛОВЕКА

20.1. РНК-геномные вирусы

20.1.1. Семейство ортомиксовирусов (Оrthomyxoviridae)

Вирусы гриппа.

К семейству ортомиксовирусов (греч. orthos – правильный, myxa

– слизь) относятся вирусы гриппа родов Influenzavirus А, В, С, имею-

щие тропизм к эпителию слизистых оболочек дыхательных путей.

Вирусы гриппа типа А патогенны для человека и некоторых живот-

ных (лошади, свиньи), а также для птиц. Вирусы типа В и С поражают

только людей. Вирус гриппа человека типа А был выделен В. Смитом,

К. Эндрюсом и П. Лейдлоу в 1933 г. В 1940 г. Т. Френсис и Т.

Меджилл выделили вирус типа В, а в 1949 г. Р. Тэйлор – вирус типа

С.

Грипп – острое инфекционное заболевание, чаще поражающее

слизистые оболочки верхних дыхательных путей и сопровождающее-

ся лихорадкой, головными болями, недомоганием.

Морфология и свойства. Вирионы имеют сферическую форму,

диаметр 80-120 нм, сердцевину и липопротеидную оболочку (рис.20).

Сердцевина содержит геном-линейную, фрагментированную

однонитевую (-)РHK, каждый из 8 ее фрагментов кодирует свой ви-

русный протеи (семь сегментов вирусного генома кодируют струк-

турные белки, восьмой сегмент кодирует неструктурные белки NS

). Важное значение имеет матриксный белок (М) и нуклеопроте-

идный (NP). РНК покрыта белковым капсидом, который окружен сло-

ем матриксного белка М, учавствующего в сборке вирионов. Нуклео-

касид имеет спиральный тип симметрии, содержит фермент РНК-

полимеразу, фосфопротеин, ассоциированный с РНК (NP). В тран-

скрипции и репликации вируса принимают участие внутренние белки

(Р

, Р

На поверхности суперкапсида есть шипы – гликопротеины со

свойствами гемагглютинина и нейраминидазы (рис. 21).

Репликация ортомиксовирусов первично осуществляется в ци-

топлазме инфицированной клетки. Вирусная РНК синтезируется в яд-

ре клетки хозяина.

Культивирование. Для культивирования вируса используют ку-

риные эмбрионы, клетки культур; заражают интраназально белых

мышей.