Новиков Д.К. (и др.). Медицинская микробиология

Подождите немного. Документ загружается.

221

Лабораторная диагностика

Исследуют отделяемое из язв, пунктаты лимфоузлов, ликвор,

кровь, мокроту.

Бактериоскопический метод. Готовят мазки, окрашивают по

Граму с целью выявления грамотрицательных биполярных овоидных

микроорганизмов.

Бактериологический метод. Материал сеют на простые питатель-

ные среды. Идентификацию возбудителя проводят по морфологиче-

ским, тинкториальным, культуральным, биохимическим, антигенным,

биологическим свойствам и признакам патогенности.

Ускоренный бактериологический метод. Делают посев на среды

со специфическим бактериофагом. Оценивают результаты по нали-

чию негативных фаговых колоний.

Ускоренный метод для определения антигена возбудителя чумы

в материале от больного. С этой целью можно использовать ИФА,

РИФ, РПГА с антительным эритроцитарным диагностикумом.

Молекулярно-генетический метод – постановка ПЦР.

Биологический метод. Заражают морских свинок с целью выде-

ления возбудителя и его идентификации.

Профилактика. Поскольку чума является особо опасной инфек-

цией, то профилактика должна проводиться в нескольких направле-

ниях.

Активная специфическая профилактика проводится живой атте-

нуированной вакциной из штамма ЕV, реже используют химическую

вакцину. Вакцинацию проводят лицам из группы риска (врачи инфек-

ционных больниц, работники санитарно-эпидемиологической служ-

бы.) В очагах чумы вакцинируют пастухов, охотников, геологов, ра-

ботников противочумных учреждений. Иммунитет сохраняется 6-8

месяцев. Неспецифическая профилактика предусматривает профи-

лактическую работу по выявлению очагов чумы; дезинфекцию, дера-

тизацию и дезинсекцию в очагах; раннюю диагностику заболевания,

изоляцию и лечение больных; объявление карантина; обсервацию

контактных; работу в специальных костюмах с материалом от боль-

ных или подозреваемых на заболевание чумой; охрану границ от за-

носа чумы; выполнение международных конвенций по профилактике

чумы.

Лечение. Антибиотики с учётом чувствительности возбудителя к

ним, чаще препараты тетрациклинового ряда (доксициклин), ами-

ногликозиды, левомицетин. Параллельно вводят противочумную сы-

воротку или гамма-глобулин, для дезинтоксикации – полиглюкин, ге-

модез.

222

13.2. Гемофильные бактерии

Впервые гемофильные бактерии были выделены Р. Кохом в

начале 80-х годов XIX века из конъюнктивального экссудата, а позд-

нее М.И. Афанасьев (1891) и Пфейффер (1892) похожий инфект вы-

делили из трупа больного, погибшего от гриппа, и его долго считали

причиной гриппа.

Гемофильные бактерии относятся к семейству Pasteurellaceae,

роду Haemophilus, который включает 16 видов, среди них есть сапро-

фиты и патогенные микроорганизмы.

Наибольшую роль в патологии играет H.influenzae, вызывающий

воспалительные процессы дыхательных путей, менингиты, бронхиты,

и H.ducreyi – возбудитель мягкого шанкра. H. aprophilus, H.

paraprophilus вызывают эндокардиты.

Свойства

Морфология. Являются мелкими коккобактериями, выражен по-

лиморфизм, имеют капсулу, не образуют спор, не имеют жгутиков, по

Граму окрашиваются отрицательно.

Культуральные свойства. Факультативные анаэробы, прихотливы

к питательным средам. Нуждаются в наличии факторов роста в среде.

Этими факторами являются факторы Х или V, которые содержатся в

эритроцитах: V – термолабильный кофермент, он является составной

частью витамина В, содержится в дрожжах, в тканях растений и жи-

вотных, участвует в энергетическом метаболизме; фактор Х – термо-

стабильный, содержится в эритроцитах. Лучшими средами являются

кровяной и шоколадный агар. На этих средах чаще вырастают S-

формы колоний или М – слизистые колонии. Непатогенные, бескап-

сульные штаммы образуют R-формы колоний. Оптимальная темпера-

тура роста 37

С. Длительность роста – 36-48 часов. На кровяном агаре

с добавлением сердечно-мозгового экстракта через 24 часа появляется

рост мелких колоний с радужными переливами, гемолиз отсутствует.

У беcкапсульных вариантов радужная расцветка не выявляется. На

жидких средах с кровью рост чаще диффузный, реже – придонный.

Антигены. О – соматический (ЛПС) и К – капсульный полисаха-

ридный антиген; по К-антигену выделяют в реакции агглютинации,

ИФА, реакции преципитации с монорецепторными сыворотками 6

серовариантов (a, b, c, d, e, f). Белковый антиген М имеется у непато-

генных штаммов.

Биохимические свойства. H.influenzae обладает каталазой, окси-

дазой, разлагает глюкозу, нуждается в X-, V-факторах. H.ducreyi не

обладает сахаролитической активностью, нуждается в X-факторе,

223

имеет каталазу и оксидазу. H.aprophilus разлагает все углеводы ко-

роткого «пестрого ряда» до кислоты, не нуждается в X- и V-факторах.

H.paraprophilus имеет оксидазу, разлагает все углеводы короткого

«пестрого ряда», нуждается в V-факторе для своего роста.

Факторы патогенности: капсулы, пили, IgА-протеазы, липополи-

сахаридные, гликопротеиновые факторы и эндотоксин.

Характеристика заболевания

Источник инфекции – больной человек и носители, в носо-

глотке которых локализуется возбудитель.

Путь передачи – воздушно-капельный, в меньшей степени кон-

тактный.

Патогенез связан с состоянием иммунной системы организма.

Возбудители, особенно H.influenzae, могут быть в слизи носоглотки

здоровых людей, но на фоне других заболеваний H.influenzae раз-

множается на слизистых оболочках внутри- и внеклеточно, проникает

в кровь, а через гематоэнцефалический барьер в мозговые оболочки,

что приводит к менингиту.

Иммунитет после заболевания гуморальный, стойкий; естествен-

ный пассивный иммунитет от матери сохраняется 3-6 месяцев.

Лабораторная диагностика

Материал зависит от формы заболевания, чаще исследуют спин-

номозговую жидкость, мокроту, кровь или мочу.

Бактериоскопический метод носит ориентировочный характер,

выявляют грамотрицательные полиморфные бактерии, чаще с капсу-

лами.

Бактериологический метод. Делают посев на среды с кровью.

Идентификацию проводят по культуральным, биохимическим и анти-

генным свойствам с использованием специфических монорецептор-

ных сывороток.

Для выявления антигенов в исследуемом материале используют

РИФ, ИФА, РПГА с антительным диагностикумом, ВИЭФ. Парал-

лельно проверяют потребность в X и V-факторах. Исследуемую куль-

туру сеют сплошным газоном на плотную питательную среду. На по-

сев накладывают два бумажных диска, смоченных, соответственно X

и V-факторами. Если рост выявляется вокруг дисков, то подтвержда-

ют зависимость культуры от этих факторов.

Можно использовать тест сателлитных культур. На чашку с по-

севом культуры на кровяном агаре наносят в нескольких местах куль-

туру S.aureus, за счет выделяемого ими гемолизина вокруг колоний

стафилококка наблюдается обильный рост исследуемой культуры.

Профилактика специфическая. Вводят химическую вакцину из

капсульных антигенов H.influenzae по эпидемиологическим показани-

224

ям. Неспецифическая профилактика – изоляция и лечение больных,

дезинфекция в очагах.

Лечение. Применяют антибиотики с учетом чувствительности.

Чаще используют ампициллин, рифампицин, эритромицин.

13.3. Гарднереллы

Таксономия. Род Gardnerella, вид Gardnerella vaginalis.

Раньше их относили к роду Haemophilus, открыл их Гарднер и

Дьюкс в 1955 г. Эти возбудители не нуждаются для своего роста и

развития в факторах X и V как обычные гемофилы. Имеют свои от-

личительные признаки и другой путь передачи. В связи с этим их вы-

делили в самостоятельный род.

Гарднереллы вызывают поражение урогенитального тракта в ви-

де бактериального вагиноза, при котором резко уменьшается количе-

ство лактобактерий, т.е. изменяется экосистема влагалища, повыша-

ется рН среды, что способствует накоплению патогенных микроорга-

низмов.

Свойства

Морфологические – это коккобактерии малых размеров (0,3-2

мкм). В мазках могут располагаться одиночно, попарно, параллельно

друг другу и в виде «V». По Граму окрашиваются неодинаково. Есть

и грамположительные и грамотрицательные варианты. Могут иметь

суданофильные включения. При окраске по Нейссеру выявляют ме-

тахроматические гранулы. Не имеют спор, капсул, жгутиков. Являют-

ся кислотонеустойчивыми. По химической структуре имеют принци-

пиальное отличие и от грамположительных, и от грамотрицательных

бактерий (отсутствуют тейхоевая и диаминопимелиновая кислоты,

нет гидроксилированных жирных кислот, характерных для грампо-

ложительных бактерий).

Культуральные свойства. Хемоорганотрофы. Прихотливы к пи-

тательным средам. Нуждаются для своего роста в наличии биотина,

фолиевой кислоты, ниацина, тиамина, рибофлавина. Лучшей средой

является агар с кровью человека или пептон-крахмал-глюкозный

агар. На кровяном агаре есть зоны гемолиза вокруг колоний, а на

пептон-крахмал-глюкозном агаре в результате гидролиза крахмала

образуются зоны просветления. В жидких средах дают помутнение и

осадок. По типу дыхания – факультативные анаэробы. Оптимальная

температура роста 35-37

С, но могут расти и при температуре от 25

до 42

С, рН среды 4,0, желателен доступ СО

. Длительность роста 24-

48 часов.

Биохимические свойства. Гарднереллы разлагают до кислоты

глюкозу, мальтозу, рибозу, крахмал, инулин, непостоянно – лактозу,

225

сахарозу. Не разлагают маннит, белки, не выделяют индол и серово-

дород. Восстанавливают нитраты, не образуют каталазу. Агглютини-

руют на холоду эритроциты человека и лошади.

Антигенная структура. Имеют групповые антигены, общие с

Candida albicans, которые определяют в реакции агглютинации или

ИФА, и типовые антигены, с учетом которых в реакции преципита-

ции выделено 7 серогрупп.

Факторы патогенности: бактериоцины, действующие на нор-

мальную микрофлору; фермент сиалидаза, который разрушает глико-

протеины слизистой оболочки влагалища и способствует проникно-

вению возбудителя в ткани; выражен тропизм к эпителию за счет ад-

гезинов.

Характеристика заболевания

Клинические проявления зависят от изменений экосистемы вла-

галища. Доминирующая флора рода Lactobacillus заменяется другой

флорой – Gardnerella vaginalis. Развитию этого заболевания способ-

ствуют 2 группы факторов:

– эндогенные: изменение гормонального статуса, снижение им-

мунологической реактивности, нарушение микробного биоценоза

кишечника;

– экзогенные: предшествующая длительная антибактериальная

терапия, перенесенные ранее воспалительные заболевания мочеполо-

вой системы, применение иммунодепрессантов и гормональных пре-

паратов.

Источник инфекции – больной человек; путь передачи – поло-

вой.

Входные ворота – слизистые оболочки влагалища.

Патогенез. Вышеуказанные факторы вирулентности приводят к

уменьшению или полному исчезновению физиологических лактобак-

терий, уменьшается количество молочной кислоты, повышается рН

влагалищной среды, что благоприятствует накоплению другой флоры,

в частности Gardnerella vaginalis, которая и вызывает различные кли-

нические формы бактериального вагиноза – гарднереллеза, при кото-

ром появляется зуд, жжение, выделения с рыбным запахом за счет об-

разования аномальных аминов. Это заболевание часто сопутствует

кандидозному и трихомонадному вагиниту.

При гарднереллезе верхних половых путей возбудитель прони-

кает в матку, трубы, яичники. Развиваются воспалительные пораже-

ния, которые могут распространяться даже на брюшину.

Может быть гарднереллез мочевых путей. При этом возникает

геморрагический цистит, пиелонефрит.

Чаще гарднереллезом болеют женщины, если болеют мужчины, у

них также поражается мочеполовая система.

226

Лабораторная диагностика

Бактериоскопический метод. Исследуют отделяемое или соскоб

из пораженного участка. Окрашивают мазок по Граму и выявляют

«ключевые» клетки. Это плоские эпителиальные клетки, к краям ко-

торых прикрепляются грамотрицательные и грамположительные бак-

терии. В мазках обнаруживается мало лейкоцитов. Проводят выявле-

ние аномальных аминов – продуктов симбиоза гарднерелл и влага-

лищных анаэробов. К капле выделений добавляют каплю 5-10% КОН

– соли аномальных аминов превращаются в летучие основания со

специфическим запахом рыбы (аминовый тест). Для выявления анти-

генов в исследуемом материале используют РИФ, ИФА или РИА,

ПЦР для генодиагностики

Профилактика только неспецифическая.

Лечение. Пенициллин, линкомицин, метронидазол, клиндами-

цин, иммуностимуляторы, витамины, препараты для восстановления

биоценоза влагалища: лактобактерин, бифидобактерин (их применя-

ют местно).

13.4. Бордетеллы

Бордетеллы – возбудители коклюша – острого антропонозного

воздушно-капельного инфекционного заболевания детей, которое ха-

рактеризуется цикличным течением и приступообразным спастиче-

ским кашлем.

Возбудитель относится к семейству Alcaligenaceae, роду

Bordetella, виды: В.pertussis – вызывает коклюш; В.parapertusis – па-

ракоклюш; В.bronchiseptica – вызывает острые респираторные заболе-

вания.

Впервые бордетеллы выделены в 1906 г. Ж. Борде и О. Жангу.

Морфология. Очень мелкие овоидной формы, грамотрицатель-

ные палочки (коккобактерии).

Не имеют спор, жгутиков (кроме B.bronchiseptica). Возбудители

коклюша имеют капсулу. При окраске толуидиновым синим выявля-

ются метахроматические биполярные гранулы.

Культуральные свойства. Строгие аэробы, каталазо-

положительны, прихотливы к питательным средам. Нуждаются в фак-

торах роста. В среды добавляют аминокислоты, кровь, уголь, ионооб-

менные смолы, никотиновую кислоту, цистеин, метионин.

Лучшими средами являются глицерино-картофельно-кровяной

агар (среда Борде-Жангу); КУА (казеиново-угольный агар). Уголь и

кровь добавляют в среды для адсорбции жирных кислот, которые об-

разуются в процессе роста бордетелл. На этих средах возбудитель ко-

227

клюша образует колонии в виде капелек ртути, паракоклюша – ко-

ричневые колонии.

Скорость роста – 48-72 часа.

Возбудители коклюша диссоциируют на 4 типа: I – вирулентные

бордетеллы, S -формы, имеют пили; II и III – RS-формы (переход-

ные); IV – авирулентные R -формы, пили отсутствуют.

Антигены. Имеется 14 вариантов О-антигена, для всего рода ха-

рактерен антиген 7, для возбудителя коклюша дополнительно специ-

фический антиген – 1, для возбудителя паракоклюша – 14, для

B.bronchiseptica – 12. Их выявляют в реакции агглютинации с моно-

рецепторными сыворотками.

Биохимические свойства слабо выражены. Белки и углеводы не

разлагают. Имеют фермент аденилатциклазу.

Бордетеллы чувствительны к температуре, солнечным лучам, к

фенолу, лизолу.

Факторы патогенности В.pertussi: имеет специфический трахе-

альный цитотоксин, вызывающий гибель и слущивание мерцательно-

го эпителия, имеет небелковую природу – это продукт синтеза и

трансформации муреина (активатор вторичных месенджеров); другой

- термолабильный белковый токсин представлен двумя субъединица-

ми: А – собственно токсин, В – действует на АДФ-

рибозилтрансферазу. Мишень действия – g-белки обеспечивают кон-

такт А-фракции с цитоплазмой клетки.

Имеется дермонекротический токсин (вторичный месенджер),

оказывает дейтсвие на диамедазу, мишень действия – Rho-g-белки,

под воздействием токсина происходит модификация Rho-белков, ко-

торая заключается в дезаминировании отстатка глютамина с образо-

ванием глютаминовой кислоты, образуется активный Rho-белок, не

способный гидролизовать ГТФ (АДФ); микроворсинки обеспечивают

адгезию к мерцательному эпителию; филаментозный гемагглютинин

связывается с глилипидами мембран клеток мерцательного эпителия

и с CR3 гликопротеиновым рецептором поверхности полиморфно-

ядерных лейкоцитов и инициирует фагоцитоз; эндотоксин (ЛПС) ак-

тивирует комплемент и стимулирует выработку цитокинов; аденилат-

циклаза подавляет активность фагоцитов и миграцию моноцитов.

Характеристика заболевания

Источник инфекции – больной ребенок и бактерионоситель.

Путь передачи – воздушно-капельный.

Инкубационный период – 5-7 дней.

Выделяют 3 периода заболевания:

I. Катаральный – очень заразный (насморк, кашель), длится 2

недели.

228

II. Период судорожного кашля – спастический кашель со спаз-

мом гортани.

III. Реконвалесценция наступает через 4-6 недель.

Иммунитет после перенесенного заболевания или после вакци-

нации стойкий, антивидовой, обеспечивается антителами и Т-

лимфоцитами.

Лабораторная диагностика

Материал для исследования: слизь задней стенки носоглотки,

взятая тампоном. При наличии кашля применяют метод «кашлевых

пластинок».

Идентификацию возбудителя проводят по морфологическим,

культуральным, антигенным (с О-агглютинирующими сыворотками к

1, 14, 12 и 7 антигенам или в РИФ с антителами, меченными флюо-

ресцеином) и биохимическим свойствам. Параллельно возбудителя

коклюша дифференцируют от других видов бордетелл (см. табл. 12).

B. рarapertussis дают рост на МПА в виде коричневых колоний,

выделяют уреазу, используют цитрат, оксидазный тест отрицатель-

ный, не имеют капсул, агглютинируются антисывороткой к антигену

14.

B. рertussis растут только на специальных средах, на КУА – в ви-

де капелек ртути.

Имеют капсулу, гемолиз на кровяном агаре, положительная

внутрикожная проба. Агглютинируются с сывороткой к антигену 1. B.

bronchiseptica – подвижны, агглютинируются сывороткой к антигену

12. Остальные свойства как у B. parapertussis.

Таблица 12.

Дифференциальные признаки патогенных видов бордетелл

Признак

Bordetella

pertussis

Bordetella

parapertussis

Bordetella

bronchisepti-

Жгутики

Редукция нитратов

Утилизация нитрата

Образование уреазы

Потемнение на МПА

Рост на среде Борде-Жангу

через 24-48 ч

через 72-96 ч

Сенсибилизация мышей к ги-

стамину

Специфический термолабиль-

ный антиген

229

Рост на простом агаре

Оксидазная активность

Восстановление нитратов

Капсула

Лимфоцитоз

Чувствительность к ингибито-

рам роста

Серологический метод – выявляют антитела в парных сыворотках

больного, начиная со II периода заболевания в реакции агглютина-

ции, РСК, РПГА или ИФА. Определяют также IgG и IgA против фи-

ламентозного гемагглютина и против токсина B. рertussis.

Аллергическая кожная проба – учет проводится через 20-24 ча-

са (ПЧЗТ).

Профилактика. Неспецифическая включает изоляцию и лечение

больных.

Осуществляют введение иммуноглобулинов направленного дей-

ствия контактным, организуют карантин на 14 дней для детей до 7

лет.

Для специфической профилактики применяют АКДС (ассоцииро-

ванную коклюшно-дифтерийную столбнячную вакцину) с 3-х-

месячного возраста 3 раза с интервалом 45 дней. Ревакцинация моно-

вакциной из убитых коклюшных бактерий в I фазе. Испытывается

вакцина, состоящая из коклюшного анатоксина, гемагглютинина,

пертактина (мембранный протеин) и антигена микроворсинок. Эту

вакцину можно применять и для ревакцинации, и для первичной вак-

цинации.

Для лечения применяют антибиотики – гентамицин, ампициллин,

а также препараты иммуноглобулинов, витамины.

13.5. Бруцеллы

Бруцеллез – зоонозное особо опасное инфекционно-

аллергическое заболевание, склонное к хроническому течению. Про-

текает по типу хрониосепсиса с длительной лихорадкой, поражением

опорно-двигательного аппарата, сердечно-сосудистой, нервной, мо-

чеполовой и других систем организма.

В 1886 г. английский военный врач Д. Брюс в селезенке больно-

го, погибшего от мальтийской лихорадки, обнаружил мелкие кокко-

бактерии, выделил их в чистой культуре и назвал Micrococcus

melitensis. В этом же году ученый Б. Банг выделил такие же коккобак-

терии из околоплодных вод при аборте коров. В 1887 г. А. Райт уста-

новил, что сыворотка больных мальтийской лихорадкой дает реакцию

агглютинации с культурой, выделенной Брюсом. В 1914 г. Д. Траум

230

выделил возбудителя при инфекционном аборте свиней. В 1920 г. все

эти возбудители были отнесены к одному роду, и в честь первого от-

крывателя Д. Брюса род получил название Brucella, семейство

Brucellaceae, а виды получили различные названия, зависящие от ис-

точника инфекции:

B.melitensis – мелкий рогатый скот.

B.abortus (bovis) – крупный рогатый скот.

B. suis – свиньи.

B.canis – собаки.

B. ovis – овцы.

B.neotomаe – крысы.

Заболевание у человека чаще вызывают первых три возбудителя.

Свойства

Морфологические. Бруцеллы представляют собой мелкие, гра-

мотрицательные коккобактерии, не имеют жгутиков и спор, могут об-

разовывать капсулу при культивировании на специальных средах с

добавлением иммунной сыворотки.

Культуральные свойства. Бруцеллы растут на сложных средах с

добавлением глюкозы, крови, тиамина и биотина. Первые генерации

размножаются очень медленно (2-4 недели), последующие – 1-2 неде-

ли. Можно культивировать их на печеночных средах. На плотных

средах бруцеллы могут диссоциировать на S и R-формы, а под дей-

ствием антибиотиков могут переходить в L-формы. Строгие аэробы.

B.abortus в первых генерациях являются микроаэрофилами и нужда-

ются в повышенной концентрации углекислого газа (5-10%).

Биохимические свойства. Разлагают глюкозу и некоторые другие

углеводы до кислоты, разлагают мочевину, аспарагин, гидролизуют

белки до аминокислот, а B.abortus – до сероводорода. Выделяют ка-

талазу, пероксидазу, липазу, фосфатазу, гиалуронидазу. С учетом

ферментативной активности, чувствительности к фуксину и тиамину,

лизабельности фагом Т-6 и способности агглютинироваться моноре-

цепторными сыворотками бруцеллы подразделяются на биовары. B.

melitensis имеет 3 биовара, B. abortus – 8, B.suis – 4.

Антигенные свойства. Бруцеллы имеют два термостабильных

соматических антигена А и М. Количество их варьирует у разных ви-

дов бруцелл. Есть еще L-антиген – поверхностный термолабильный,

сходен с Vi-антигеном у сальмонелл. У R-форм бруцелл есть R-

антиген. Его определяют специфическими антисыворотками при се-

ротипировании бруцелл. Имеется G-антиген – полисахаридный, об-

щий для всех бруцелл.

Факторы патогенности: эндотоксин, гиалуронидаза, низкомоле-

кулярные продукты бруцелл ингибируют фагосомо-лизосомальное

слияние, что способствует незавершенному фагоцитозу.