Страйер Л. Биохимия. Том 3

Подождите немного. Документ загружается.

Рис. 31.7. Модель генетической реком-

бинации, предложенная Роби-

ном Холидеем (Robin Holliday).

Одна из родительских двухце-

почечных молекул изображена

синим цветом, а другая

красным. Более темная нить

в каждом дуплексе - (+)цепь.

Буквами X, Y и Z обозначены

три гена; х, у и z - их аллели. В

и Г - ковалентное соединение

родительских молекул ДНК.

Е - иное представление ком-

плекса молекул, изображенно-

го на рис. Д. Обратите внима-

ние, что эта структура на рис. Е

может быть разрезана по гори-

зонтальной или по вертикаль-

ной оси. Воссоединение нитей

на рис. Ж и З дает два раз-

личных набора рекомбинантов

(И и К). Участки, содержащие

по одной цепи каждого из ро-

дительских дуплексов, отме-

чены звездочками. [Potter H.,

Dressier D., Cold Spring Harbor

Symp. Quant. Biol., 43, 973

(1979).]

происходят при участии подвижных генети-

ческих элементов (табл. 31.1). Важный класс

подвижных генетических элементов - плаз-

миды. Это кольцевые двухцепочечные моле-

кулы ДНК (рис. 31.9), размер которых коле-

блется от двух до нескольких сотен тысяч

пар оснований (kb). Плазмиды содержат

гены, ответственные за инактивирование ан-

тибиотиков, метаболизм природных соеди-

нений и образование токсинов. В сущности,

плазмиды представляют собой дополни-

тельные хромосомы. Они отличаются от

бактериальной хромосомы тем, что без них

в определенных условиях клетка может

обойтись. Кроме того, плазмиды обладают

способностью реплицироваться независимо

от клеточной хромосомы. Клетка Е. coli

обычно содержит около 20 копий мелких

хромосом и 1-2 большие.

31.5. Фактор F позволяет бактериям

передавать гены реципиентам путем

конъюгации

Некоторые плазмиды обусловливают пере-

нос бактериями генетического материала

31. Перестройки генов

201

Рис. 31.8. Спаривание одноцепочечной

молекулы ДНК (показана

красным цветом) с комплемен-

тарной цепью (желтым) ду-

плекса, катализируемое бел-

ком rec A. В результате обра-

зуется структура, называемая

D-петлей.

в другие бактерии путем образования непос-

редственных межклеточных контактов.

Этот процесс, названный конъюгацией, от-

крыли в 1946 г. Джошуа Ледерберг

и Эдвард Татум (Joshua Lederberg, Edward

Tatum). При конъюгации клеток Е. coli один

партнер (мужского пола) служит донором

генетического материала, другой (женского

пола) - реципиентом. Бактерии мужского

пола имеют на поверхности особые отрост-

ки, получившие название половых пилей,

а женские клетки несут рецепторные участ-

ки, которые связывают пили. Пиль связы-

202

Часть IV.

Информация

Таблица 31.1. Мобильные генетические элементы

Тип

Плазмиды

Фактор F (фактор

фертильности, фак-

тор плодовитости)

Факторы F'

Факторы R (факто-

ры устойчивости)

Факторы колицино-

генности

Лизогенизирующие фа-

кторы

Лямбда

Мю

Послeдовательности-

вставки

(IS-элементы)

Раз-

мер,

>100

4-117

6-141

От 0,8

до 1,4

Свойства

Сообщает клетке

мужской фенотип,

переносится при

конъюгации

Переносят, помимо

генов фактора F, ге-

ны Е. coli

Содержат гены устой-

чивости к различ-

ным веществам:

кроме того, некото-

рые из нихсодер-

жат гены, обеспечи-

вающие конъюга-

цию

Переносят гены, про-

дуцирующие коли-

цин (токсин); неко-

торые содержат,

кроме того, гены,

обеспечиваюшие

конъюгацию

Небольшая часть фа-

гов переносит гены

Е. coli (gal или bio)

наряду с вирусными

генами

Все фаги мю несут

короткий участок

генома Е. coli

Гены, обрамленные

парой IS-элементов,

могут переноситься

с места на место

внутри клетки

вает между собой мужскую и женскую клет-

ки (рис. 31.1). Затем он сокращается, что

позволяет клеткам вступить в непосред-

ственный контакт для передачи ДНК

(рис. 31.10). Бактерия мужского пола содер-

жит плазмиду, называемую фактором F (от

англ. fertility - плодовитость), которая несет

гены, детерминирующие образование по-

ловых пилей и других компонентов, уча-

ствующих в конъюгации. При конъюгации

одна цепь плазмиды фактора F разрывается

в одном месте, и происходит расплетание

двухцепочечной молекулы (рис. 31.11). 5'-ко-

нец разорванной цепи входит в реципиент-

ную клетку, и на ней синтезируется компле-

ментарная цепь. При этом образуется

замкнутая кольцевая двухцепочечная моле-

кула. Присутствие плазмиды фактора F

в реципиентной клетке (первоначально F

)

превращает ее в мужскую клетку (F

). Му-

жская клетка может спонтанно терять свой

фактор и ревертировать таким образом к ге-

нотипу F

Плазмида фактор F может интегриро-

вать с бактериальной хромосомой. Интегра-

ция происходит путем кроссинговера с од-

ним из множества мест в бактериальной

хромосоме. Частота интеграции составляет

примерно 10

-5

в расчете на одну генерацию.

Бактерии, несущие фактор F в своих хромо-

сомах, называются клетками Hfr (от англ.

high frequency of recombination - высокая ча-

стота рекомбинации). Клетки Hfr, как

и клетки F

, участвуют в конъюгации в ка-

честве доноров (рис. 31.12). Различие между

ними состоит в том, что клетка Hfr пере-

дает всю бактериальную хромосому (вклю-

чая интегрированный фактор F), тогда как

клетка F

передает реципиенту только фак-

тор F. При скрещивании Hfr x F

вся хро-

мосома переносится примерно за 90 мин.

Порядок входа передаваемых генов в реци-

пиентную клетку зависит от места, в кото-

ром произошла интеграция фактора F и от

его полярности. Поэтому порядок генов

в хромосоме донора можно легко устано-

вить, прерывая конъюгацию в различные

моменты времени и определяя, какие мар-

керы успели перейти. Передаваемая хромо-

сома донора может рекомбинировать с хро-

мосомой реципиента. Частота рекомбина-

ции выше всего для генов, которые вошли

в реципиентную клетку первыми, так как

они находятся там дольше всего. Таким

образом, можно строить генетические

карты, определяя время входа и частоту ре-

комбинации маркеров, передаваемых доно-

ром.

При исключении фактора F из хромо-

сомы Hfr-клетки она переходит в состояние

. Этот процесс, обратный интеграции

фактора F, также происходит с частотой

примерно 10

-5

за одну генерацию. В не-

большой части ревертантов кроссинговер

происходит в сайте, отличном от сайта ин-

теграции. В результате образуется плазми-

да, содержащая, помимо генов фактора F,

хромосомные гены (рис. 31.13). Такая плаз-

мида называется фактором F'; штрих обоз-

начает, что в ней присутствуют хромосом-

ные гены. Конъюгация клетки F' с клеткой

приводит к переносу этих хромосомных

генов из донора в реципиентную клетку,

которая в результате становится диплоид-

ной по этим генам.

Рис. 31.9. Электронная микрофотогра-

фия небольшой плазмиды фак-

тора R. (Печатается с любезно-

го разрешения д-ра Jack

Griffith.)

Рис. 31.10. Электронная микрофотогра-

фия двух клеток Е. coli во время

конъюгации. (Печатается с лю-

базного разрешения д-ра

Lucien Саrо.)

31. Перестройки генов

203

Рис. 31.11. Предполагаемый механизм

переноса нити фактора R при

конъюгации. В суперспирали-

зованную молекулу фактора

R в клетке F

-донора вносится

одноцепочечный разрыв, и по-

сле этого он расплетается,

Перенос одной цепи фактора

R в клетку F

-реципиента со-

пряжен с репликацией этой це-

пи донора. Затем в реципиент-

ной клетке синтезируется ком-

плементарная цепь. [War-

ren G.J., Twigg A.J., Sher-

ratt D. J., Nature, 274, 260

(1978).]

Рис. 31.12. Схема образования Hfr-клеток

путем интеграции фактора F

с хромосомой Е. coli.

204

Часть IV.

Информация

Таким образом, у бактерий имеется меха-

низм для переноса целых хромосом или не-

скольких генов из одной клетки в другую.

Фактор F можно рассматривать как особый

переносчик (вектор), возникший специально

для обмена генетическим материалом. Ин-

тересно отметить, что лизогенизирующие

фаги также могут участвовать в обмене ге-

нов клетки-хозяина. Например, ДНК фага

λ может интегрировать между генами gal

и bio хромосомы Е. coli (разд. 30.16). Исклю-

чение профага из хромосомы обычно проис-

ходит точно, но не всегда. Примерно

в одном вирионе на 10

ДНК фага λ содер-

жит оперон gal или ген bio. При заражении

такими фагами, называемыми λgal и λbio,

эти гены вводятся в клетку Е. coli вместе

с генами фага λ. Другой родственный фаг,

который называется φ80, интегрирует вбли-

зи оперона trp и может переносить гены trp

Рис. 31.13. Аномальное исключение фак-

тора F приводит к образова-

нию плазмиды F', содержащей

часть хромосомы Е. coli.

из одной зараженной клетки в другую. Бак-

териофаг μ интегрирует почти в любом ме-

сте хромосомы Е. coli и при исключении

всегда захватывает кусок бактериальной

хромосомы. Эти трансдуцирующие фаги,

подобно фактору F, представляют собой

подвижные генетические элементы, ко-

торые обеспечивают взаимообмен бакте-

риальных генов. Не исключено, что транс-

дукция ускоряет эволюцию бактерий.

31.6.

Плазмиды

факторы

придают

бактериям устойчивость к антибиотикам

Поразительным примером необычно бы-

строй эволюции бактерий может служить

эпидемия бактериальной дизентерии, проте-

кавшая в 1955 г. Один из штаммов Shigella

dysenteriae приобрел устойчивость одновре-

менно к хлорамфениколу, стрептомицину,

сульфаниламидам и тетрациклину. Такого

рода множественная устойчивость к лекар-

ственным препаратам в настоящее время

широко распространена среди многих пато-

генных микроорганизмов. Гены, придаю-

щие устойчивость к многим антибиотикам,

соединены вместе в плазмидных факторах

R (от англ. resistance - устойчивость), назы-

ваемых также факторами устойчивости.

Наиболее крупные из этих плазмид наряду

с несколькими генами r содержат также фак-

тор переноса устойчивости (resistance

transfer factor - RTF) (рис. 31.14). Участок

RTF позволяет плазмиде переноситься

в другие бактерии с помощью конъюгации.

В действительности гены участка RTF весь-

ма сходны с аналогичными генами факто-

ров F. Гены r кодируют ферменты, инакти-

вирующие определенные лекарственные ве-

щества. Факторы R, имеющие участок RTF,

могут переноситься между различными ви-

дами бактерий при совместном культивиро-

вании. Следовательно, множественная

устойчивость к антибиотикам может быть

трансмиссивной.

Маленькие плазмиды факторы R лишены

области RTF и обычно придают клетке

устойчивость только к одному антибиотику.

Например, плазмида R pSC101 длиной 8,2

kb несет ген устойчивости к тетрациклину,

но она не может быть перенесена путем

конъюгации. Однако этот ген r может при-

соединиться к другой плазмиде, несущей

иной ген устойчивости к какому-либо веще-

ству (рис. 31.15). Если эти гены r интегри-

руют с плазмидой, содержащей область

RTF, возникает трансмиссивная R-плазми-

Рис. 31.14. Схематическое изображение

фактора R. Гены RTF (ответ-

ственные за конъюгацию и ре-

пликацию) показаны зеленым

цветом, а гены r (ответственные

за устойчивость к различным

лекарственным веществам) —

красным. IS-элементы пока-

заны желтым цветом.

Рис. 31.15. Инфекционный фактор R обра-

зуется, когда ген r присоеди-

няется к плазмиде RTF.

31. Перестройки генов

205

Рис. 31.16. Перенос гена (показано крас-

ным цветом), граничащего с

обеих сторон с IS-элементами

(желтый цвет). При транспози-

ции реципиентный участок (си-

ний цвет) удваивается. Один

конец транспозона предста-

вляет собой обращенный по-

втор другого конца.

да. Следовательно, плазмиды, являющиеся

сложными факторами R, образуются из

весьма подвижных элементов, обусловли-

вающих, устойчивость к отдельным химиче-

ским соединениям. Такие генетические эле-

менты, способные к переносу, теперь назы-

вают транспозонами.

31.7. IS-элементы могут присоединяться

к неродственным генам

Что лежит в основе высокой подвижности

транспозонов? Электронно-микроскопиче-

ские исследования и определение последова-

тельности нуклеотидов в ДНК показали,

что последовательность, расположенная на

одном конце транспозона, повторяется на

другом конце. Например, концы Tn3-транс-

позона, кодирующего устойчивость к ампи-

циллину,- представляют собой обращенные

повторы длиной 38 пар оснований. После-

довательности нуклеотидов в ДНК реце-

пиенте, граничащие с обеих сторон с транс-

позоном, являются прямым повтором по-

следовательности 5-9 пар оснований, при-

сутствовавшей до вставки транспозона

(рис. 31.16). Между этими обрамляющими

206

Часть IV.

Информация

последовательностями реципиентной ДНК

и концевыми последовательностями транс-

позона нет никакой гомологии. Кроме того,

гены rec E. coli не участвуют в процессе ин-

теграции транспозона, что в корне отличает

его от общей генетической рекомбинации.

Концы транспозона, возможно, служат IS-

элементами, направляя действие нуклеаз

и других белков, участвующих в интеграции.

Самое главное заключается в том, что

транспозон не обязательно гомологичен ре-

ципиентной ДНК, так как специфичность

интеграции определяется в первую очередь

ДНК-белковыми взаимодействиями, а не

спариванием оснований.

Самые маленькие подвижные генетиче-

ские элементы - это последовательности-

вставки (IS-элементы), которые имеют дли-

ну около 1 kb. В отличие от транспозонов

IS-элементы не несут никаких генов. Однако

они оказывают существенное влияние на

выражение соседних генов. IS-элементы

обычно блокируют транскрипцию ди-

стальных генов транскрипционной единицы.

Кроме того, они могут выступать в качестве

новых промоторов. К тому же IS-элементы

способствуют таким хромосомным пере-

стройкам, как делеции и инверсии. В хромо-

соме E. coli было обнаружено несколько ко-

пий четырех различных IS-элементов (IS1,

IS2, IS3 и IS4). К тому же концевые последо-

вательности некоторых транспозонов иден-

тичны одному из этих IS-элементов. По всей

вероятности, транспозон образуется в том

случае, когда какой-либо ген оказывается

окруженным парой IS-элементов.

Мы уже видели, что плазмиды и фаги мо-

гут обмениваться блоками генов с бакте-

риальными хромосомами. Кроме того,

плазмиды и фаги способны рекомбиниро-

Рис. 31.17. Синтез и клонирование ре-

комбинантных молекул ДНК.

вать друг с другом. Было показано, что ге-

нетический элемент, отвечающий за устой-

чивость к тетрациклину, перемещается из

плазмиды фактора R в фаг, размножающий-

ся в клетках Salmonella, а оттуда в хромосо-

му Salmonella, затем в фаг λ и из фага λ в trp-

оперон E. coli и обратно в фаг λ. Это

замечательное путешествие показывает, на-

сколько подвижны гены прокариот. Было

бы интересно выяснить, обладают ли гены

эукариот столь же высокой подвижностью.

31.8. В лаборатории можно сконструировать

новые геномы и клонировать их

в клетках-хозяевах

Разработанная в последние годы техноло-

гия рекомбинантных ДНК - важнейшее до-

стижение молекулярной биологии. Появи-

лась возможность создать в лабораторных

условиях новые комбинации неродственных

генов. Затем эти новые геномы можно вве-

сти в подходящие клетки и размножить во

много раз с помощью механизмов синтеза

ДНК клетки-хозяина. Некоторые из таких

введенных в клетки генов могут также тран-

скрибироваться и транслироваться в новом

окружении. Основные этапы клонирования

ДНК сводятся к следующему (рис. 31.17).

1. Создание рекомбинантной молекулы.

Интересующий исследователя фрагмент

ДНК ковалентно присоединяется к ДНК

вектора. Основное свойство вектора со-

стоит в том, что он может автономно репли-

цироваться в подходящем хозяине. Напри-

мер, плазмиды и фаг λ наиболее удобные

векторы для клонирования генов в клетках

Е. coli. Как будет описано ниже, молекулы

31. Перестройки генов

207

Химерная ДНК -

рекомбинантная молекула ДНК, содержащая неродственные гены. От слова хи-

мера - мифологическое существо с головой льва, телом козла и хвостом змеи.

«...Коей порода была от богов, не от смертных: Лев головою, задом дракон

и коза серединой, Страшно дыхала она пожирающим пламенем бурным».

Гомер, «Илиада», пер. Н. Гнедича, гл. VI, стих 180.

ДНК можно соединить путем лигирования

(т.е. воздействием лигазы) фрагментов

с липкими одноцепочечными концами или

же с тупыми концами.

2. Введение в клетку-хозяина. Большин-

ство бактериальных и эукариотических кле-

ток поглощает голые молекулы ДНК из

среды. Эффективность поглощения низка

(примерно 1 на 10

молекул ДНК), но в спе-

циально подобранных экспериментальных

условиях можно трансформировать значи-

тельную часть клеток. Существует и другой

метод: клетки заражают реконструиро-

ванными вирионами, содержащими реком-

бинантные молекулы ДНК. В таком синте-

тическом вирусном геноме интересующий

исследователя ген замещает участок вирус-

Рис. 31.18. Электронная микрофотогра-

фия pSC101 - плазмидного век-

тора, использованного для

клонирования ДНК. (Печа-

тается с любезного разрешения

д-ра Stanley Cohen.)

208

Часть IV.

Информация

ной ДНК, не имеющий существенного зна-

чения для репликации.

3. Отбор. Следующий этап состоит в том,

чтобы определить, какие клетки несут ре-

комбинантную молекулу ДНК, содержа-

щую нужный ген. Такие клоны можно ото-

брать по признаку присутствия вектора или

самого встроенного гена. Например, неко-

торые плазмидные векторы сообщают клет-

ке устойчивость к какому-либо антибиоти-

ку. Другой подход состоит в том, чтобы

определить, какие клетки связывают РНК,

комплементарную нужному гену, или синте-

зируют кодируемый им белок. Клоны, со-

держащие рекомбинантную ДНК, ста-

бильны, по крайней мере в течение несколь-

ких сотен поколений.

Клонирование рекомбинантной ДНК уже

внесло большой вклад в наши представле-

ния о структуре хромосомы и выражении ге-

на. Многие встроенные гены удалось раз-

множить путем клонирования, что дало

большие количества ДНК для определения

последовательности оснований и электрон-

но-микроскопических исследований. Кроме

того, с помощью этих клонов были синтези-

рованы в больших количествах белки, ко-

торые в обычных условиях образуются

в ничтожных количествах. Методы

рекомбинантных ДНК используются также

для изучения сложных геномов и регуляции

их выражения.

31.9. Ферменты рестрикции и ДНК-лигаза -

необходимые инструменты для получения

рекомбинантных молекул ДНК

Молекулы ДНК можно легко соединять in

vitro с помощью рестриктирующих эндону-

клеаз (разд. 24.27), ДНК-лигаз (разд. 24.15)

и других высокоспецифических ферментов,

действующих на ДНК. В эксперименте по

получению рекомбинантной ДНК вектор

подготавливают к соединению с клони-

руемым фрагментом путем расщепления

в одном определенном месте с помощью ре-

стрикционной эндонуклеазы. Например, не-

большую плазмиду pSC101 можно расще-

пить в одном месте ферментом рестрикции

EcoR1. Если с помощью этого фермента две

Рис. 31.19. Соединение молекул ДНК

с помощью метода липких кон-

цов. Одна из родительских мо-

лекул ДНК (показано зеленым

цветом) несет гены Р и Q, разде-

ленные участком рестрикции,

а другая (красный цвет) несет

гены X и У. Одна из реком-

бинантных молекул несет гены

Р и У, а другая - Q и X.

Рис. 31.20. Соединение молекул ДНК с по-

мощью наращивания poly (dA)-

и poly(dT)-концов (коннек-

торным методом).

цепи ДНК расщепить наискосок, то обра-

зуются комплементарные одноцепочечные

концы (липкие концы). Предположим те-

перь, что фрагмент ДНК, который необхо-

димо ввести в эту плазмиду, образован пу-

тем расщепления большой молекулы ДНК

эндонуклеазой EcoR1. Тогда одноцепо-

чечные концы этого фрагмента будут ком-

плементарны концам расщепленной плаз-

миды. Теперь фрагмент ДНК и плазмиду

можно подвергнуть отжигу и соединить

ДНК-лигазой (рис. 31.19). Затем бактерии

инкубируют в присутствии этой смеси моле-

кул ДНК. Небольшую часть бактерий, несу-

щих плазмиду, отбирают, исходя из того

что pSC101 сообщает клеткам устойчивость

к тетрациклину. Затем используют другой

метод отбора для выявления клонов, содер-

жащих плазмиду со встроенной ДНК.

Второй метод соединения двух нерод-

ственных молекул ДНК основан на присое-

динении poly(dА)-фрагментов к обоим

3'-концам одной молекулы и poly(dТ)-фраг-

ментов к обоим 3'-концам другой молекулы

(рис. 31.20). Эти гомополимерные последо-

вательности синтезируются терминальной

дезоксинуклеотидил-трансферазой (терми-

нальной трансферазой) - ферментом, при-

соединяющим нуклеотиды к 3'-гидроксиль-

ной группе цепи ДНК. Эта трансфераза

в отличие от ДНК-полимеразы не зависит

от матрицы, поэтому с ее помощью можно

присоединить последовательности из ну-

клеотидов только одного тина (обычно дли-

ной 100 остатков). Ро1у(dА)-концы одной мо-

лекулы ДНК отжигают с poly(dT)-конца-

ми другой. Длины этих концевых последова-

тельностей могут несколько колебаться,

поэтому, прежде чем соединить цепи ДНК-

лигазой, бреши заполняют с помощью

ДНК-полимеразы I. Точно так же можно ис-

пользовать для соединения различных мо-

лекул ДНК и концевые poly(dG)- и poly(dC)-

последовательности.

Третий подход к соединению молекул

31. Перестройки генов

209

Рис. 31.21. Образование липких концов

путем присоединения и расще-

пления химически синтезиро-

ванного линкера.

ДНК сочетает преимущества метода липких

концов с универсальным характером

(dA—dТ)-метода (коннекторного). К концам

фрагмента ДНК или вектора ковалентно

присоединяют химически синтезированный

линкер, т.е. связующую цепь (длиной от ше-

сти до десяти пар оснований), чувстви-

тельный к расщеплению каким-либо фер-

ментом рестрикции. 5'-концы десятинуклео-

тидного линкера и молекулы ДНК фосфо-

рилируют полинуклеотидкиназой и соеди-

няют лигазой фага Т4, которая может

образовывать ковалентную связь между мо-

лекулами ДНК с тупыми концами. Если

обработать эти концевые участки соответ-

ствующим ферментом рестрикции, обра-

зуются липкие концы (рис. 31.21). Таким

образом, почти у любой молекулы ДНК

можно вызвать образование липких концов,

соответствующих специфичности данного

фермента рестрикции.

31.10. Плазмиды и фаг лямбда -

наиболее подходящие векторы

для клонирования ДНК в бактериях

Для увеличения эффективности проникнове-

ния рекомбинантных ДНК в клетку и облег-

чения отбора содержащих такие молекулы

бактерий создаются новые векторы. Напри-

мер, плазмида pBR322 содержит гены

210

Часть IV.

Информация

устойчивости к тетрациклину и ампицилли-

ну (сходный с пенициллином антибиотик).

Эту плазмиду пять различных рестриктаз

расщепляют в каком-то одном определен-

ном месте каждая (рис. 31.22). Введение

ДНК в участок рестрикции EcoR1 не затра-

гивает генов устойчивости к антибиотикам.

В то же время введение ДНК в участки ре-

стрикции HindIII, SalI или BamHI приводит

к инактивации гена устойчивости к тетраци-

клину; это явление называется инактива-

цией вставкой (инсерционной инактива-

цией). Клетки, содержащие pBR322 со

вставленной ДНК, устойчивы к ампицилли-

ну, но чувствительны к тетрациклину; по-

этому их легко отобрать. Клетки, которые

не смогли воспринять ДНК вектора, чув-

ствительны к обоим антибиотикам, а клет-

ки, содержащие pBR322 без вставки ДНК,

к обоим антибиотикам устойчивы.

Другая группа векторов создана на осно-

ве плазмиды ColE1, кодирующей колицин

Е - белковый токсин, убивающий некоторые

штаммы Е. coli. Преимущество использова-

ния этих колициногенных плазмид в качестве

Рис. 31.22. Генетическая карта плазмиды

pBR322, несущей два гена

устойчивости к антибиотикам.