Попова Т.Н., Рахманова Т.И., Попов С.С. Медицинская энзимология

Подождите немного. Документ загружается.

Окончание таблицы 2

Определение активности ГГТ основано на измерении скорости фермен-

тативной реакции переноса гамма-глутамиловой группы с субстрата-донора на

субстрат-акцептор. В первом методе определения активности фермента был

использован его природный субстрат глутатион. Однако этот метод сложен в

постановке, поэтому в клинической биохимии широкого распространения не

получил. Современные лабораторные способы определения активности ГГТ

основаны на применении синтетических хромогенных субстратов-доноров.

Начиная с 1960-х годов в качестве такого субстрата большинство биохимиче-

ских лабораторий использовало гамма-глутамил-р-нитроанилид, а в качестве

субстрата-акцептора гамма-глутамиловой группы – глицилглицин. Данный

колориметрический тест основан на следующей ферментативной реакции:

L-гамма-глутамил-р-нитроанилид + глицилглицин

ГГТ

¾¾¾¾¾¾®

ГГТ

¾¾¾¾¾¾®

L-гамма-глутамилглицилглицин + р-нитроанилин

Заболевание

или состояние

Фермент

Активность

фермента, Е/л

Кратность пре-

вышения нор-

мы

Частота случа-

ев повышения

активности, %

ГГТ 220 4,4 83

ЩФ 945 3,5 100

АсАТ 110 2,9 83

Цирроз печени

АлАТ 36 0,9 33

ГГТ 505 10,1 100

ЩФ 1350 5,0 100

АсАТ 57 1,5 100

Гранулема печени

АлАТ 56 1,4 80

ГГТ 500 10,0 100

ЩФ 1400 5,2 80

АсАТ 57 1,5 80

Острый панкреатит

АлАТ 44 1,1 40

ГГТ 30 0,6 –

ЩФ 890 3,3 100

АсАТ 27 0,7 –

Здоровые подростки

АлАТ 12 0,3 –

ГГТ 15 0,3 –

ЩФ 430 1,6 100

АсАТ 42 1,1 21

Беременные женщины

без патологий

АлАТ 12 0,3 –

Активность ГГТ определяется по скорости расщепления хромоген-

ного субстрата с образованием р-нитроанилина, интенсивность окраски

которого (оптическая плотность при длине волны 405 нм) пропорциональ-

на активности фермента в анализируемой пробе. Широкое применение

данного метода на практике и в научных исследованиях позволило устано-

вить нормальные значения активности ГГТ в сыворотке крови пациентов

различного возраста и пола, а также величин, соответствующих различным

патологическим состояниям, на которые ориентируются и в настоящее

время.

К недостаткам применения гамма-глутамил-р-нитроанилида в каче-

стве хромогенного субстрата относится его низкая растворимость, затруд-

няющая приготовление его раствора с необходимой концентрацией, а так-

же недостаточная стабильность рабочего раствора, в котором при хране-

нии спонтанно образуется р-нитроанилин. Этих недостатков лишен широ-

ко применяемый в настоящее время для анализа ГГТ гамма-глутамил-3-

карбокси-4-нитроанилид (ГГКНА). Этот субстрат с растворимостью в

50 раз выше, чем гамма-глутамил-р-нитроанилид, образует высокоста-

бильные растворы. Кинетические константы ферментативной реакции для

обоих субстратов сходны.

Международная федерация клинической химии (IFCC) рекомендует

в качестве референтного метода определения активности ГГТ колоримет-

рический кинетический метод с ГГКНА в концентрации, обеспечивающей

максимальную скорость ферментативной реакции (6мМ). Однако для ру-

тинного анализа в лабораториях чаще применяют модифицированный ме-

тод Зейца (Szasz), в котором концентрация с ГГКНА ниже (3–4 мМ). Ре-

зультаты определения активности ГГТ, получаемые при этом, ниже (при-

близительно на 7 %), чем по методу IFCC, однако они полностью совпада-

ют со значениями активности фермента, определенными с применением в

качестве субстрата гамма-глутамил-р-нитроанилида. Метод Szasz дает

возможность использовать установленные ранее привычные нормы актив-

ности ГГТ и весь накопленный клинический опыт.

Глутаматдегидрогеназа

Глутаматдегидрогеназа (ГДГ; КФ 1.4.1.3) – фермент, катализирую-

щий превращение глутамата в 2-оксоглутарат и аммиак. ГДГ в незначи-

тельных количествах обнаружен в нервной ткани, скелетных мышцах,

миокарде и молочной железе, в наибольшем количестве содержится в

клетках печени. Уровень активности ГДГ в норме 0–0,9 МЕ/л (Назарен-

ко Г.И. и др., 2002). Фермент находится внутри митохондрий гепатоцитов,

поэтому увеличение его активности отражает глубину цитолиза клеток; по

степени ее повышения можно судить о тяжести патологического процесса.

Увеличение активности фермента происходит при поражении печени раз-

личной этиологии и поражении желчевыводящих путей: острые гепатиты с

некрозом печени, рак печени, печеночная кома, острая интоксикация, ме-

ханическая желтуха и т.п. При вирусном гепатите ГДГ повышается в пер-

вые сутки желтушного периода. Высокая активность ГДГ отмечается у

больных первичным и метастатическим раком печени. При выраженном

обострении цирроза печени подъем активности ГДГ бывает значительным,

причем высокая активность фермента рассматривается как неблагоприят-

ный признак. Алкогольная интоксикация сопровождается значительным

увеличением активности ГДГ в крови.

Повышение активности ГДГ и ГГТ во многом сходно, но есть разли-

чия: высокая активность ГДГ наблюдается при острых повреждениях пе-

чени, а высокая ГГТ – при длительных патологических процессах в печени.

Одновременное исследование активности ГДГ и сорбитолдегидроге-

назы (СДГ) позволяет рассчитать коэффициент СДГ/ГДГ. В первую неде-

лю вирусного гепатита этот коэффициент обычно превышает 0,5, состав-

ляя в среднем 1,3. В первую неделю обтурационной желтухи он ниже 0,5.

Глутатионредуктаза

Глутатионредуктаза (ГР; КФ 1.6.4.2) – НАДФ-зависимый фермент,

катализирующий превращение окисленной формы глутатиона в восста-

новленную. ГР присутствует практически во всех тканях, но наибольшее

его содержание в почках, печени, сердце и эритроцитах. Повышение ак-

тивности фермента наблюдается при гепатите, механической желтухе, са-

харном диабете, при дефиците глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, серпо-

видной и мегалобластной анемиях, после введения никотиновой кислоты,

после физической нагрузки. Недостаток ГР отмечается при дефиците ри-

бофлавина.

Глутатионпероксидаза

Глутатионпероксидаза (ГП, КФ 1.11.1.9) – один из ключевых фер-

ментов антиоксидантной системы организма, функцией которого является

разрушение и инактивация пероксидов водорода и гидропероксидов (пе-

роксидных радикалов) – токсичных соединений кислорода. Содержится

практически во всех тканях. В норме активность фермента в эритроцитах

составляет 29,6–82,9 МЕ/г Hb (Назаренко Г.И. и др., 2002).

ГП клеток печени состоит из четырех субъединиц, каждая из кото-

рых содержит в активном центре атом селена. В клетках печени ГП лока-

лизована в цитозоле и матриксе митохондрий. Таким образом, Н

, обра-

зующаяся при работе пероксисомальных ферментов, удаляется содержа-

щейся в пероксисомах каталазой, а Н

, образующаяся в митохондриях и

эндоплазматическом ретикулуме, разрушается преимущественно под дей-

ствием ГП. ГП обладает в 1000 раз бóльшим сродством к Н

по сравне-

нию с каталазой, поэтому ГП рассматривают в качестве антиоксидантного

фермента, имеющего первостепенное значение в защите клетки от посто-

янно образуемого пероксида водорода. Наряду с этим, ГП способна вос-

станавливать гидропероксиды жирных кислот, пероксиды белкового и нук-

леиновокислотного происхождения. Помимо селенсодержащей ГП в орга-

низме животных обнаружена ГП, не содержащая селена, которая имеет

другие физико-химические и каталитические свойства. Активность селен-

содержащей ГП напрямую зависит от уровня селена в организме. Сниже-

ние активности фермента при недостаточности селена зависит от умень-

шения количества мРНК этого белка. Пероксид водорода и активные ради-

калы образуются в результате пероксидного окисления липидов (ПОЛ),

которые приводят к дестабилизации клеточных мембран и, в тяжелых слу-

чаях, к их разрушению. Активация ПОЛ наблюдается при различных забо-

леваниях: ишемия органов и тканей, сахарный диабет, атеросклероз и мн.

др. Определение ГП помогает оценить антиоксидантную способность ор-

ганизма при различных заболеваниях, а также у людей с повышенным рис-

ком селенового дефицита (в старческом возрасте, при плохом питании, ку-

рении, алкоголизме, стрессе, почечной недостаточности, химиотерапии и

др.), рекомендовать назначение препаратов для антиоксидантной терапии

и оценивать эффективность терапии.

Желательно использовать нормы значений активности фермента

применительно к лабораториям, в которых производилось исследование.

Увеличение активности наблюдается при: дефиците глюкозо-6-

фосфатдегидрогеназы, остром лимфоцитарном лейкозе, талассемии.

Уменьшение активности ГП сопровождает сердечно-сосудистые заболева-

ния, атеросклероз, сахарный диабет, аутоиммунные заболевания (ревмато-

идный артрит), процессы старения организма, муковисцидоз. Снижение

активности ГП выявляется у больных шизофренией и маниакально-

депрессивным психозом, где свободным радикалам отводится ведущая

роль в патогенезе их развития.Уменьшение активности ГП значительно

повышает риск возникновения раковых заболеваний. Низкая активность

ГП и уровень селена могут быть причиной бесплодия. Мониторинг актив-

ности ГП через 1–5 лет позволяет эффективно проводить профилактиче-

ское лечение антиоксидантами.

Глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа

Глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа (Г6ФДГ; КФ 1.1.1.49) – фермент,

участвующий в процессах окисления глюкозы. Наибольшее содержание

фермента обнаружено в селезенке, лимфатических узлах, эритроцитах и

молочной железе. Одним из основных поставщиков НАДФН для глута-

тионовой антиоксидантной системы является пентозофосфатный путь,

ключевым ферментом которого является Г6ФДГ. В большом количестве

находится в эритроцитах и используется, в основном, для выявления на-

следственных заболеваний, связанных с дефицитом фермента – наиболее

распространенной наследственной гемолитической анемии, обусловленной

дефицитом активности Г6ФДГ эритроцитов. Эта наследственная патология

встречается в определенных регионах и наиболее широко распространена

в странах Средиземноморья, Индии, Африки, Средней Азии. Дефицит

трудно выявить у гетерозигот женского пола и непосредственно вслед за

гемолитическим эпизодом у лиц с Г6ФДГ-анемией. Гетерозигот с любыми

вариантами дефицита Г6ФДГ часто трудно выявить другими методами, за

исключением анализа родословной. В последнее время для диагностики

вариантов Г6ФДГ вводится анализ ДНК.

В результате нарушений в строении молекулы фермента эритроциты

становятся непрочными и разрушаются в кровеносном русле. Клинически

дефицит Г6ФДГ может не проявляться вообще или проявляться гемолизом

(разрушением эритроцитов) различной интенсивности. В одних случаях

гемолиз появляется под влиянием некоторых пищевых продуктов или ле-

карственных препаратов (противомалярийные средства, сульфаниламиды,

нитрофураны, противотуберкулезные препараты и др.), в других случаях

хроницеский гемолиз наблюдается независимо от внешних факторов.

При массовых обследованиях используется качественный унифици-

рованный метод — проба Бернштейна, которая в норме отрицательна.

Норма – 3–11 % эритроцитов периферической крови содержат Г6ФДГ;

12,1 ± 2,09 МЕ/г Hb · 0,0645.

Изоцитратдегидрогеназа

Изоцитратдегидрогеназа (ИДГ; КФ 1.1.1.42) – фермент, имеющий

2 формы коферментной специфичности (НАД и НАДФ-зависимые) и ка-

тализирующий обратимое окисление изоцитрата до 2-оксоглутарата.

НАДФ-зависимая форма присутствует во всех тканях, но наибольшая ее

активность обнаружена в печени, скелетной мускулатуре, сердце. По-

вышение активности ИДГ является чувствительным показателем пора-

жения паренхимы печени. Определяемая в сыворотке активность обу-

словлена цитоплазматическим НАДФ-зависимым печеночным фермен-

том. Это может наблюдаться при вирусных и токсических гепатитах, об-

турационной желтухе, метастазах в печень и циррозе, гипоксии печени

вследствие гемодинамических причин, поражении печени при бактери-

альных инфекциях, атрезии желчных протоков у новорожденных детей,

инфекционном мононуклеозе. Также увеличение активности данного

фермента может регистрироваться при тяжелом инфаркте легкого, мие-

лолейкозе, мегалобластной анемии. Несмотря на то, что в миокарде со-

держится много активности ИДГ, при инфаркте миокарда не обнаружи-

вается ее повышения, и значения в сыворотке находятся в пределах нор-

мы; высвобождаемая активность митохондриальной ИДГ термолабильна

и быстро выводится.

Нормальные величины значений активности фермента в сыворотке

крови взрослых: 1,2–7,0 МЕ/л · 0,017 [0,02–0,12 мккат/л]; в крови из пупо-

вины: значения в 2 раза выше таковых для взрослых. Новорожденные: 4-

кратное повышение по сравнению со значениями для взрослых; 2 нед.:

снижение до верхних пределов значений для взрослых.

Каталаза

Каталаза (КФ 1.11.1.6; Н

:Н

– оксидоредуктаза) – фермент, ка-

тализирующий реакцию разложения пероксида водорода на воду и моле-

кулярный кислород: 2 Н

= О

+ 2Н

О. Каталаза представляет собой ге-

мопротеин, простетической группой которого является гем, содержащий

ион трехвалентного железа. Молекула каталазы состоит из четырех, по-

видимому, идентичных субъединиц с молекулярной массой 60 кДа и име-

ет, соответственно, четыре простетические группы. Феррипротопорфири-

новые группы гема прочно связаны с белковой частью фермента – апо-

ферментом и не отделяются от него при диализе. Оптимальная величина

рН для каталазы находится в интервале значений 6,0–8,0. Каталаза широко

распространена в тканях животных, в т.ч. человека, растений и в микроор-

ганизмах (однако фермент полностью отсутствует у некоторых анаэроб-

ных микроорганизмов). В клетках каталаза локализуется в специальных

органеллах — пероксисомах. Биологическая роль каталазы заключается в

деградации пероксида водорода, образующейся в клетках в результате

действия ряда флавопротеиновых оксидаз (ксантиноксидазы, глюкозоок-

сидазы, моноаминоксидазы и др.), и обеспечении эффективной защиты

клеточных структур от разрушения под действием пероксида водорода.

Уровень активности каталазы в норме: 22,6 ± 0,52 мкат/л (Мамонтова Н.С.;

Патент РФ RU2050005).

Генетически обусловленная недостаточность каталазы является од-

ной из причин так называемой акаталазии – наследственного заболевания,

клинически проявляющегося изъязвлением слизистой оболочки носа и ро-

товой полости, иногда резко выраженными атрофическими изменениями

альвеолярных перегородок и выпадением зубов. Активность каталазы в

эритроцитах остается постоянной при ряде заболеваний, однако при злока-

чественной и других макроцитарных анемиях увеличивается так называе-

мый каталазный индекс (отношение величины каталазной активности оп-

ределенного объема крови к количеству эритроцитов в этом объеме),

имеющий существенное диагностическое значение. При злокачественных

новообразованиях отмечается уменьшение активности каталазы в печени и

почках, причем существует зависимость между величиной опухоли, скоро-

стью ее роста и степенью уменьшения активности каталазы. Из некоторых

опухолей выделены вещества – токсогормоны, которые при введении экс-

периментальным животным вызывают у них снижение активности катала-

зы в печени.

Методы определения активности каталазы основаны на регистрации

образующегося в процессе реакции О

(манометрическим или полярогра-

фическим методами) или на измерении текущей (спектрофотометриче-

ским) или остаточной (перманганатометрическим, йодометрическим и

другими титриметрическими методами) концентрации пероксида водорода.

Креатинкиназа

Креатинкиназа или креатинфосфокиназа (КК; КФ 2.7.3.2.) катали-

зирует обратимую реакцию фосфорилирования креатинина с участием

АТР в результате чего образуются креатинфосфат и ADP. КК является ди-

мером состоящим из двух субъединиц, каждая с молекулярной массой

около 40 кДа. Субъединицы В (от brain – мозговая) и М (от muscle – мы-

шечная) закодированы в разных генах. Фермент существует в виде трех

изоферментов: КК-ВВ (КК-1) – мозговой, КК–МВ (КК-2) – сердечный и

КК-ММ (КК-3) – мышечный. КК-ВВ присутствует в значительных количе-

ствах в мозге, простате, желудке, легких, мочевом пузыре, уретре, плацен-

те, щитовидной железе. КК-МВ в основном находится в сердечной мышце

(25–46 % от общей активности КК кардиомиоцита) и в небольшом количе-

стве в скелетных мышцах (менее 5 % общей активности). КК-ММ присут-

ствует в основном в клетках скелетных и сердечной мыщц. Активность

КК-ММ в сыворотке составляет 94–96 % от общей активности КК, КК-МВ –

4–6 %, КК-ВВ – следы или активность не определяется.

Все три изофермента обнаружены в цитозоле клеток или связаны с

миофибриллами. Обнаружена и четвертая митохондриальная форма креа-

тинкиназы (КК-Mt), которая отличается от других форм иммунологически,

а также по электрофоретической подвижности. Она локализована между

внутренней и наружной митохондриальной мембранами, в сердце состав-

ляет до 15 % общей КК активности.

Активная КК может присутствовать в сыворотке в виде 2 макромо-

лекулярных комплексов: макро КК тип1 и тип 2. Тип 1 – это КК-ВВ, свя-

занная с IgG, или КК-ММ, связанная с IgA; тип 2 – это олигомеры КК-Mt.

Нормальная активность КК (общая) может варьировать в зависимо-

сти от метода: 10–195 МЕ/ л (Назаренко Г.И. и др., 2002).

Норма для изоферментов сыворотки крови: КК-ВВ – 0 %; КК-МВ –

0–3 %; КК-ММ – 97–100 %.

Общая КК повышается при многих заболеваниях: травмы, операции,

инфаркт миокарда, уменьшение кровоснабжения мышц, миопатии, дерма-

томиозит, мышечные дистрофии, миокардиты, отравления, сопровождаю-

щиеся комой, гипотериоз, инфекционные болезни (например, брюшной

тиф). Иногда небольшое увеличение отмечается при артритах, застойной

сердечной деятельности, тахикардии, эмболии легочной артерии.

Активность КК в сыворотке, как правило, имеет обратную зависи-

мость с тиреоидной функцией щитовидной железы. Около 60 % больных

гипотериозом имеют уровень КК выше нормы с превышением верхней

границы в среднем в 5 раз. Основной изофермент при этом КК-ММ, хотя у

13 % больных повышена и КК-МВ, что свидетельствует о вовлеченности в

патологический процесс не только скелетных, но и сердечной мышцы.

В то же время у больных с гипертиреозом имеется тенденция к низким зна-

чениям активности КК в сыворотке.

При инфаркте миокарда регистрируемое повышение активности КК

наблюдается уже в течение 3–6 ч после ангиозного приступа. Однако оп-

ределение активности ранее 8 ч дает положительные результаты в 31 %

случаев. Активность КК является достоверным тестом инфаркта миокарда,

начиная с 8–10 ч после начала болевого приступа. Максимальный уровень

ее достигается в течение 24 ч, и даже при обширном инфаркте активность

КК может возвратиться к норме в течение последующих 48 ч. Относитель-

ное повышение активности КК при инфаркте миокарда выше, чем других

ферментов. Наиболее информативно исследование активности КК в дина-

мике – каждые 4–6 ч в течение суток.

Хотя активность КК при инфаркте миокарда является очень чувстви-

тельным тестом, однако, на него нельзя полагаться при однократном опре-

делении и отсутствии других показателей, т. к. повышение может быть вы-

звано и рядом других причин, отмеченных выше, а также употреблением

алкоголя, интенсивной физической нагрузкой, состоянием щитовидной

железы, отравлением снотворными средствами, введением некоторых ле-

карственных препаратов (клофитрат, карбеноксалон). Резкое повышение

активности КК (более чем в 10 раз) возникает в 1–2-й день нарушения моз-

гового кровообращения, достигая максимума на 3-й день.

КК-ММ увеличивается в сыворотке при тех же состояниях, как и об-

щая КК.

КК-МВ значительно увеличивается при инфаркте миокарда, опреде-

ление изофермента имеет диагностическое значение, если общая актив-

ность фермента в сыворотке крови повышается более чем в 1,5 раза по

сравнению с верхней границей нормы. Помимо инфаркта миокарда КК-МВ

может незначительно возрастать при миокардитах, стенокардии, затяжной

аритмии, шоке, тяжелых отравлениях.

КК-ВВ в сыворотке крови незначительно повышается при некоторых

формах рака (легкого, кишечника, мочевого пузыря, предстательной желе-

зы), травме сердечной мышцы, заболеваниях соединительной ткани. При

родах КК-ВВ может увеличиваться в сыворотке до 6 раз (источником яв-

ляются матка и плацента). У новорожденных при родовой травме мозга ак-

тивность КК-ВВ в сыворотке повышена.

Макро КК тип 1 обнаруживается в сыворотке взрослых при заболе-

вании желудочно-кишечного тракта, аденоме, карциноме, повреждениях

сердечной и скелетной мышц и в состоянии с высокой вероятностью ле-

тального исхода. Иногда макро КК тип 1 встречается у женщин старше 50 лет.

Макро КК тип 2 обнаруживается в сыворотке взрослых с тяжелой

формой рака или болезни печени, а также у детей с поражением сердечной

мышцы. Появление КК-Mt – плохой прогностический признак, среди та-

ких больных высока смертность.

Существует три общепризнанных методических подхода для разде-

ления изоферментов КК: электрофорез, хроматографические и иммуноло-

гические методы.

Электрофоретическим методом (на агаре, агарозе или ацетате цел-

люлозы) можно разделить фракции КК. Визуализация электрофоретиче-

ских полос изоферментов проводится, как правило, с использованием

НАДФН флуоресценции в ультрафиолетовой области спектра (360 нм).

Поэтому эта процедура достаточно трудоемкая и требует оснащения им-

портной техникой.

Ионообменной или абсорбционной хроматографией разделяют изо-

ферменты КК на несколько фракций. Изоферменты КК как правило абсор-

бируются на геле, с которого затем элюируются буферами. Выпускаются

специальные коммерческие миниколонки: метод простой и быстрый, ос-

новная трудность – разделение фракций при большом повышении количе-

ства КК-ММ в патологических случаях.

Иммунологические методы основаны на измерении активности КК в

присутствии специфической антисыворотки, содержащей моноклональные

или поликлональные антитела против М или В субъединиц. Коммерческие

наборы, основанные на технике преципитации, позволяют выявлять КК-

МВ при существенном ее повышении с коэффициентом вариации 10–20 %,

тем не менее, эти тесты выполняются быстро, как правило, не требуют

специальной аппаратуры и могут использоваться индивидуально, что осо-

бенно удобно при экспресс-диагностике. Выпускаются коммерческие на-

боры для фотометрического определения КК-МВ, основанные на опреде-

лении активности КК при ингибировании М-субъединицы. Нормы для

процентного распределения активности изофермента КК-МВ в общей КК-

активности в этом случае существенно отличаются от электрофоретиче-

ского распределения.

Лактатдегидрогеназа

Лактатдегидрогеназа (ЛДГ; КФ 1.1.1.27) катализирует обратимое

восстановление пирувата до лактата, в качестве кофермента используется

НАДН. ЛДГ имеет молекулярную массу около 134 кДа, это тетрамер, со-

стоящий из двух субъединиц – М (muscle – мышечная) и Н (heart – сердеч-

ная). В сыворотке присутствуют 5 изоферментов, различающиеся составом

субъединиц. В порядке снижения их электорофоретической подвижности

(движения по направлению к аноду) их обозначают как ЛДГ-1 (Н

), ЛДГ –

2 (Н

М), ЛДГ –3 (Н

), ЛДГ-4 (Н

), ЛДГ-5 (М

). Избыток как пирувата,

так и лактата, используемых в качестве субстрата, подавляет активность

фермента, при этом эффект пирувата выше. Норма (варьирует в разных

методах): 240–480 МЕ/л (Назаренко Г.И. и др., 2002).

ЛДГ присутствует во всех клетках организма, это цитозольный фер-

мент. В печени, сердце, почках, скелетной мышце и эритроцитах актив-

ность ЛДГ более чем в 500 раз выше, чем в сыворотке, поэтому поврежде-

ние любого из этих органов сопровождается увеличением ЛДГ в сыворот-

ке. Повышение показателя имеет место при некрозе тканей, особенно при

остром повреждении сердца, повреждении эритроцитов, почек, скелетных

мышц, печени, легких и кожи. Значительное повышение сопровождает ге-

молитические анемии, связанные с дефицитом витамина В

и фолиевой

кислоты. Медленное повышение в течение 3–4 дней с последующим сни-

жением за 5–7 дней может свидетельствовать об инфаркте миокарда (не-

обходимо, однако, исключить инфаркт легкого, опухоль, мегабластную

анемию). Повышение уровня ЛДГ характерно для острой фазы инфекци-

онного гепатита, между тем при хронических заболеваниях печени актив-

ность фермента редко оказывается повышенной. Циррозы, обтурационные

желтухи, различные заболевания почек и скелетных мышц, застойная сер-

дечная недостаточность дают средние цифры активности. Незначительное

повышение активности фермента отмечается при любых повреждениях

клеток, сопровождающихся увеличением проницаемости мембран (ин-

фаркт миокарда и легкого), при лейкозах, лимфомах, хронических гепати-

тах. Таким образом, общая активность ЛДГ в сыворотке крови не является

специфическим тестом для определенной патологии. Поэтому необходимо

разделять изоферменты ЛДГ и, затем, оценивать вклад каждого в общую

активность, т.к. они органоспецифичны.

ЛДГ в моче может повышаться в 3–6 раз при хроническом гломеруло-

нефрите, системной красной волчанке с поражением почек, диабетическом

нефросклерозе, опухолях почек и мочевого пузыря. Однако определение ЛДГ

в моче не практикуется из-за ингибирующего действия на фермент кислой

среды, мочевины и некоторых короткоцепочечных пептидов мочи.

Нормальное соотношение изоферментов ЛДГ в сыворотке составля-

ет: ЛДГ1 – 15–30 %; ЛДГ2 – 22–50 %; ЛДГ3 – 15–30 %; ЛДГ4 – 0–15 %;

ЛДГ5 – 0–15 %. Количество изоферментов можно определить с помощью

электрофоретических, иммунологических, кинетических методов или пу-

тем хроматографии. Наиболее распространен метод электрофореза на геле

агарозы или на ацетатцеллюлозных пленках. Наибольшей разделяющей

способностью и чувствительностью обладает метод ионообменной хрома-

тографии, он используется в качестве референтного по отношению к элек-

трофорезу. Предложен также метод иммунопреципитации с использовани-

ем антител против всех изоферментов, содержащих М субъединицу

(ЛДГ2–ЛДГ5). В этом случае активность этих изоферментов не проявляет-

ся, остается активной только ЛДГ1. Результаты определения ЛДГ1 этим

методом тесно коррелируют с результатами электрофореза и хроматогра-

фии, а диагностическая специфичность метода для инфаркта миокарда со-

ставляет 94 %. Другим сравнительно новым метом выявления активности