Попова Т.Н., Рахманова Т.И., Попов С.С. Медицинская энзимология

Подождите немного. Документ загружается.

определять и в других жидкостях организма: моче, соке поджелудочной

железы, ликворе, слезной жидкости, где изменение их активности также

имеет существенное клинико-диагностическое значение.

Гипоферментемия встречается относительно редко и касается в ос-

новном секреторных ферментов. В подавляющем большинстве случаев она

связана с генетически детерминированными нарушениями синтеза опреде-

ленных энзимов, реже – с ингибированием, усиленной деградацией или

экскрецией.

Дисферментемия обусловлена в основном появлением в крови орга-

носпецифических ферментов.

Гиперферментемия свидетельствует о некрозе или лизисе клеток,

либо о нарушении проницаемости клеточных мембран из-за дефицита ки-

слорода, истощения глюкозы, действия лекарств и других ксенобиотиков,

токсинов, бактерий, вирусов и др. Развитию гиперферментемии способст-

вует клеточная пролиферация, усиление синтеза энзимов клетками, повы-

шение концентрации активаторов в кровяном русле.

Основной трудностью использования определения активности фер-

ментов в диагностических целях является отсутствие специфичности по-

вышения ферментативной активности для повреждения определенной тка-

ни или органа. Поскольку многие ферменты присутствуют в разных тканях

и органах, то повышение их активности в сыворотке может быть связано с

повреждением любого из этих органов. Задача дифференциальной диагно-

стики может быть решена одним из следующих способов:

– Определение более чем одного фермента. Разные ткани содержат

ферменты в разных количествах. Так, АлАТ и АсАТ содержатся в гепато-

цитах и кардиомиоцитах, но АлАТ существенно больше в печени, а АсАТ

в сердце. Поэтому при повреждении печени относительно больше повы-

шается АлАТ, а при повреждении сердца – АсАТ.

– Определение спектра изоферментов. Данный подход основан на

том, что отдельные изоформы характерны для разных тканей.

– Определение активности ферментов в динамике. Скорость изме-

нения активности фермента в сыворотке определяется разницей между

скоростью его появления в сыворотке и скоростью удаления из системы

циркуляции. При инфаркте органа и некрозе поврежденных клеток в сыво-

ротке крови происходит повышение активности внутриклеточных фермен-

тов, специфичных для данной ткани, затем после выхода всего фермента

активность его снижается. Важным является определение динамики изме-

нения фермента и определение его активности в период повышения в сы-

воротке, т. к. слишком раннее взятие пробы для анализа может предшест-

вовать подъему активности, слишком позднее – также не позволит полу-

чить необходимую информацию.

Не всегда активность фермента в сыворотке отражает тяжесть забо-

левания. Так, острое повреждение клеток при вирусном гепатите может

сопровождаться очень высоким подъемом активности ферментов, которая

будет падать по мере выздоровления. В то же время при циррозе печень

может быть значительно сильнее вовлечена в патологический процесс, но

скорость повреждения клеток ниже и активность ферментов в сыворотке

будет повышена незначительно или даже находиться в пределах референт-

ных значений. Этот пример еще раз подчеркивает, что любые результаты

по исследованию активности ферментов в сыворотке должны быть обяза-

тельно сопоставлены с другими лабораторными анализами и с клиниче-

ской картиной заболевания.

Перед тем как указывать на возможность патологического про-

цесса, необходимо исключить возможность неспецифического повы-

шения активности ферментов в сыворотке. Так, относительно невысо-

кое повышение в плазме активности трансаминаз характерно для мно-

гих неспецифических патологических процессов. Тяжелая физическая

работа, массивные внутримышечные инъекции могут привести к по-

вышению активности КК в сыворотке. Некоторые лекарственные сред-

ства, в частности фенитоин, фенобарбитал могут индуцировать синтез

микросомального фермента ГГТ и вызвать его повышение в сыворотке

без всякого заболевания. Активность ферментов в сыворотке может

меняться в результате агрегации с образованием макромолекул, напри-

мер, при образовании комплексов с иммуноглобулинами, в которые

вступают ЛДГ, ЩФ и КК.

ОБЩИЕ ПРАВИЛА РАБОТЫ С ФЕРМЕНТАМИ

И НЕКОТОРЫЕ ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Ферменты, как все белки, являются относительно неустойчивыми

веществами. Они легко подвергаются денатурации и инактивации. При-

ступая к работе, надо внимательно изучить и осознанно выполнять прила-

гаемую к наборам инструкцию. Работая с ферментами (будь то фермента-

тивные наборы для определения субстратов или активности ферментов или

контрольные материалы, содержащие ферменты), следует соблюдать про-

стые правила, вытекающие из общих для всех ферментов свойств.

1. Нельзя сильно встряхивать растворы ферментов и допускать обра-

зование пены при их перемешивании, т. к. ферменты при этом могут инак-

тивироваться в результате воздействия на них кислорода воздуха.

2. Растворенные, лиофильно высушенные реагенты, контрольные

материалы и контрольные сыворотки, содержащие ферменты, перед ис-

пользованием необходимо выдержать при комнатной температуре в тече-

ние времени, указанного в инструкции, чтобы фермент пришел в конфор-

мационно активное состояние. Необходимо строго соблюдать условия

ферментативной реакции, указанные в инструкции: время и температуру

инкубации, соотношение реагент/сыворотка.

3. Время начала и окончания ферментативной реакции следует фик-

сировать по секундомеру, причем в случае определения активности фер-

ментов и кинетических методов определения аналитов для каждой отдель-

ной пробы, а не для серии целиком, иначе результаты анализа будут не-

верны. Началом реакции считается момент добавления сыворотки (или

стартера) в реакционную смесь, а также окрашивающего реагента, если ре-

акция двухстадийная. Для кинетических методов, когда анализ в несколь-

ких пробах проводят последовательно, время начала реакции и равные

промежутки времени между фотометрированиями следует точно фиксиро-

вать по секундомеру для каждой отдельной пробы. Так как определение,

как правило, проводят в нескольких пробах, сыворотку в реакционную

смесь в параллельных пробах следует вносить через четко фиксированные

по секундомеру промежутки времени, например через 30 с или 1 мин. На-

чалом реакции считается внесение сыворотки в первую пробу из серии. По

истечении времени реакции следует с таким же интервалом останавливать

реакцию в параллельных пробах, т. е. вносить реагент, например щелочь, с

интервалом 30 с или 1 мин, соответственно. Таким образом, время реакции

будет фиксировано для каждой отдельной пробы. Исключением из этого

правила может быть только метод Райтмана–Френкеля. Так как время фер-

ментативной реакции в этом методе – 1 ч, то допущенное отклонение во вре-

мени между параллельно определяемыми пробами при серийном запуске и

остановке реакции будет относительно небольшим и внесет незначительную

ошибку в конечный результат по сравнению с ошибкой самого метода.

4. Перед началом ферментативной реакции температуру рабочего

реагента необходимо довести до значения, указанного в инструкции, и

обеспечить его поддержание в течение всего времени анализа с точностью

±0,1°С. В случае ферментативных методов анализа аналитов желательно, а

при определении активности ферментов обязательно использовать водя-

ную баню (водяной термостат). Так как теплопроводность воды значи-

тельно выше теплопроводности воздуха, водяной термостат быстрей и на-

дежней обеспечивает установку и поддержание заданной температуры ре-

акционной смеси. Например, чтобы довести температуру 1 мл реакцион-

ной смеси до 37 °С, в суховоздушном термостате ее необходимо выдер-

жать 10 мин, а в водяной бане – 5 мин. Если время анализа выдерживают

для каждой отдельной пробы, а не для серии целиком, технически с водя-

ной баней работать удобней.

5. Ни в коем случае нельзя изменять соотношение рабочий реа-

гент/сыворотка. Его уменьшение в целях экономии может привести к су-

жению линейной области определения в случае определения активности

фермента и к неполному превращению аналита в случае ферментативных

методов анализа, т.е. к получению заниженных результатов. При увеличе-

нии соотношения рабочий реагент/сыворотка снижается чувствительность

метода.

6. Также нельзя разбавлять рабочий реагент в целях экономии, т. к.

при этом условия реакции (концентрация буфера, активаторов и т. д.) от-

клонятся от оптимальных, что приведет к занижению результатов анализа

как в случае определения активности ферментов, так и в случае определе-

ния аналитов ферментативными методами.

7. Если концентрация фермента или другого аналита в биологиче-

ской жидкости превышает верхнюю границу линейности набора, то ис-

следуемую пробу необходимо разбавить строго в соответствии с реко-

мендациями, изложенными в инструкции к набору (чем разбавлять и во

сколько раз). Несоблюдение указаний может привести к серьезным

ошибкам, т. к. в сыворотке присутствует огромное количество соеди-

нений, тем или иным образом влияющих на аналит и результат его оп-

ределения (особенно это касается ферментов). Для получения точных и

воспроизводимых результатов пробу вообще лучше не разбавлять, тем

более что активность некоторых ферментов, например АлАТ и АсАТ,

непропорционально уменьшается при разбавлении. Однако не всегда

линейная область определения набора позволяет охватить весь диапа-

зон физиологических концентраций аналита. Надо стремиться разбав-

лять пробу минимально, желательно, в 2–3 раза (особенно при опреде-

лении активности ферментов) и не больше, чем указано в инструкции.

Разумеется, для разведения нельзя использовать маленькие аликвоты

(10–20 мкл); чтобы уменьшить ошибку разведения, лучше взять хотя

бы 100 мкл пробы.

8. Фотометрирование следует проводить в указанном в инструкции

диапазоне длин волн, отклонение может существенно снизить чувстви-

тельность метода. В случае расчета концентрации аналита или активности

фермента по коэффициенту экстинкции длина волны должна точно соот-

ветствовать указанной в инструкции. Так как коэффициент экстинкции –

это оптическая плотность раствора вещества с концентрацией 1 мкМ в кю-

вете с толщиной поглощающего свет слоя 1 см при данной длине волны, то

для другой длины волны значение его будет иным и может значительно

отличаться.

9. Длина оптического пути кюветы для фотометрирования должна

соответствовать указанной в инструкции. Использование кюветы с мень-

шей длиной оптического пути снизит чувствительность метода.

10. При построении калибровочных кривых необходимо делать не

менее 4–5 параллельных определений холостой пробы и каждого стан-

дартного образца указанной в инструкции концентрации. Строить калиб-

ровочную кривую следует для каждой серии набора, а также при смене

фотометрического оборудования.

11. Калибровочную пробу, используемую для расчета концентрации

аналита или активности фермента, необходимо ставить для каждой серии

анализов в четырех параллелях.

12. Следует тщательно мыть посуду, пипетки, наконечники и много-

кратно ополаскивать их дистиллированной водой. Для мытья можно ис-

пользовать только моющие средства, не содержащие биодобавки, т. к. в их

состав входят протеазы, которые даже в следовых количествах могут раз-

рушить ферменты в реакционной смеси. Особенно тщательно следует от-

мывать перекись водорода, используемую для обеззараживания пробирок

и наконечников. Н

является одним из продуктов сопряженных фермен-

тативных реакций при определении глюкозы, холестерина, триглицеридов

и т.д. Поэтому наличие экзогенного пероксида водорода завысит результа-

ты анализа.

13. Необходимо следить за качеством дистиллированной воды, ис-

пользуемой в процессе анализа. Избыток некоторых ионов, входящих в ее

состав, может ингибировать ферменты.

14. При работе с ферментативными наборами так же, как и при рабо-

те с другими наборами реагентов, желательно, а при отборе проб малых

объемов (30–10 мкл) обязательно следует пользоваться проверенными ав-

томатическими микродозаторами. Наконечники к ним лучше повторно не

использовать, особенно те, которыми проводили отбор сыворотки и затем

обеззараживали пероксидом водорода, по указанным выше причинам. При

отборе калибратора использовать только новые наконечники.

15. Для получения достоверных результатов очень важен преанали-

тический этап. По литературным источникам доля ошибок доаналитиче-

ского этапа в общем числе лабораторных ошибок составляет не менее

50 %. На долю аналитического этапа приходится не более 20 % ошибок,

при этом значительная часть их связана с отсутствием стандартов на вы-

полнение операций доаналитического этапа. На долабораторном этапе

большое значение имеет процедура взятия крови у пациента, транспорти-

ровка в лабораторию, пробоподготовка и хранение пробы до анализа. Не-

умелое взятие крови может привести к ложным результатам. В качестве

примера можно привести следующие факторы доаналитического этапа, ко-

торые могут существенно повлиять на результаты определения активности

ферментов. Так, продолжительный веностаз может привести к гипоксии и

увеличению проницаемости мембран клеток крови, что скажется на актив-

ности ряда ферментов. Другой негативный фактор – гемолиз; при длитель-

ном стоянии крови появляющиеся активные радикалы кислорода и дефи-

цит субстратов приводят к порозности мембран эритроцитов. Гемолиз, ос-

вобождение ферментов из лейкоцитов и тромбоцитов могут привнести за-

метные изменения в активность ЛДГ, АсАТ, АлАТ, кислой фосфатазы в

сыворотке. ЛДГ и кислая фосфатаза присутствуют в высоких концентра-

циях в тромбоцитах, поэтому активность этих ферментов в сыворотке вы-

ше, чем в плазме. При свертывании крови в сыворотке появляются фер-

менты из тромбоцитов, в частности кислая фосфатаза, поэтому при работе

с сывороткой рекомендуется как можно быстрее отделить ее от сгустка.

Механические повреждения клеток крови (например, вследствие выпуска-

ния крови из шприца в пробирку с силой или интенсивного встряхивания

при перемешивании) также могут сказаться на результатах определения

активности ферментов. Хранение сыворотки также неблагоприятно сказы-

вается на результатах определения активности многих ферментов (они за-

нижаются), поэтому следует измерять активность ферментов в сыворотке в

день взятия крови у пациента. Длительное хранение крови приводит к ак-

тивации протеолиза, потери четвертичной структуры вследствие негатив-

ного влияния на SH-группы, что сказывается на активности ферментов.

16. Следует строго соблюдать условия хранения ферментативных

наборов и их компонентов, указанные в инструкции, т. к. ферменты – тер-

молабильные катализаторы. Хранение их при более высокой температуре,

например в комнате вместо холодильника, может привести к быстрой

инактивации ферментов. Амилаза, липаза, лейцинаминопептидаза (ЛАП),

ГГТ, холинэстераза, кислая фосфатаза устойчивы при хранении, стабиль-

ность других ферментов варьирует. Многие ферменты можно хранить в

замороженном состоянии и в виде лиофилизатов без потери активности,

однако некоторые ферменты чувствительны к процедуре замораживания,

их можно замораживать только после добавления стабилизаторов, сохра-

няющих их структуру. Это связано с тем, что вода при кристаллизации вы-

зывает необратимые изменения в водородных связях белка. Например,

уреаза при замораживании частично или полностью инактивируются. Осо-

бенно чувствительны к процедуре замораживания ферменты, состоящие из

нескольких субъединиц. Не допускается при хранении несколько раз замо-

раживать и размораживать пробы.

17. Следует регулярно проверять правильность и воспроизводимость

результатов анализа по контрольным сывороткам, аттестованным соответ-

ствующими методами. В случае определения активности ферментов учи-

тывать, каким рекомендациям соответствует используемый метод.

Многие из перечисленных выше правил применимы и просты в вы-

полнении. В то же время их соблюдение гарантирует высокую точность и

воспроизводимость результатов.

СПОСОБЫ ВЫРАЖЕНИЯ АКТИВНОСТИ ФЕРМЕНТОВ

Каталитическая активность фермента – это способность фермента

превращать большое количество молекул субстрата, в то время как сам он

к концу реакции остается неизменным. Ферменты различаются по своей

каталитической способности. Например, 1 моль трипсина осуществляет

102 цикла в секунду, глюкозоксидаза – 17 × 103 циклов в секунду и т. д.

Это называется «числом оборотов фермента». Число оборотов варьирует

от 1 до 106 в зависимости от природы фермента. Каталитическую актив-

ность ферментов выражают в единицах активности.

Международная единица активности (МE) – это количество фер-

мента, которое катализирует превращение 1 мкмоля субстрата в 1 минуту в

оптимальных условиях.

Единица активности в системе СИ (катал) – соответствует количе-

ству фермента, которое катализирует превращение 1 моля субстрата в

1 секунду в оптимальных условиях.

Соотношение между единицами активности:

1 МE = 16,67 нанокатал;

1 катал = 6 ´ 107 МE.

В медицине активность ферментов выражают чаще всего в единицах

активности на 1 л биологической жидкости.

Удельная активность фермента – это активность, выраженная в

единицах активности на 1 мг (или 1 г) белка или 1 мг (1 г) препарата фер-

мента. Используется в биохимической практике.

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ

ОТДЕЛЬНЫХ ФЕРМЕНТОВ

Алкогольдегидрогеназа

Алкогольдегидрогеназа (АДГ; КФ 1.1.1.1.) печеночный цитоплазма-

тический фермент, класса оксидоредуктаз. АДГ является цинксодержащем

ферментом и преимущественно располагается в центролобулярном регио-

не печени. Алкогольдегидрогеназа способна нейтрализировать небольшие

дозы алкоголя. Содержится в организме южных народов, но почти отсут-

ствует у северных, в том числе у украинцев, русских. Фермент катализи-

руюет в присутствии НАД окисление спиртов и ацеталей до альдегидов и

кетонов.

Идентифицированы изоферменты АДГ, специфичные для печени,

слизистой желудка и почек. В больших количествах фермент находится

лишь в печени, но небольшие его количества содержат почки. Следы фер-

мента также обнаруживаются в сердечной и скелетной мускулатуре чело-

века. В сыворотке крови здорового человека отсутствует. Активность АДГ

ответственна за метаболическое превращение метанола и этиленгликоля в

токсические соединения. Этот эффект тормозится введением этанола.

Изоферментный спектр алкогольдегидрогеназы печени отражает патоло-

гические изменения в организме, что используется для диагностических

целей. АДГ – семейство тесно связанных ферментов с выраженным поли-

морфизмом, что может влиять на скорость выведения этанола. Резкое по-

вышение содержания фермента наблюдается при острых гепатитах (при

этом его показатели приходят к норме раньше, чем показатели

трансаминаз). При обтурационной желтухе, циррозах печени, инфаркте

миокарда, мышечной дистрофии Эрба обычно не наблюдается повышения

активности фермента в крови. Цианиды, йодоацетат тормозят действие эн-

зима. Является специфическим для клеток печени. Появление его в

сыворотке крови свидетельствует о повреждении клеток печени. Служит

критерием выраженности гепатоцеллюлярного некроза и внутрипеченоч-

ного холестаза. АДГ рассматривается как высокочувствительный маркер

аноксии печени с поражением центров долек. Изоформы алкогольдегидро-

геназы имеют большое значение в дифференциальной диагностике заболе-

ваний печени. Так, АДГ

повышается при вирусных гепатитах, АДГ

–

при

алкогольных гепатитах, активности АДГ

так же, как и АДГ

, чаще увели-

чиваються при циррозе печени. Референтные пределы: <2,8 МЕ/л · 0,017

[<0,05 мккат/л].

Альдолаза

Альдолаза (фруктозобисфосфат-(фруктозодифосфат)-альдолаза; КФ

4.1.2.13) – фермент, относящийся к лиазам, катализирующий превращение

фруктозо-1,6-дифосфата (бисфосфата) в дигидроксиацетонфосфат и глице-

ральдегид-3-фосфат в процессе гликолиза. Фермент играет важнейшую

роль в энергетическом обмене. Молекулярная масса фермента 147–180 кДа,

состоит из двух полипептидных цепей. Альдолаза присутствует во всех

тканях организма. Генетически обусловленная неполноценность альдолазы

является причиной наследственной непереносимости фруктозы.

В норме в сыворотке крови активность альдолазы составляет от 0,0038

до 0,02 (в среднем 0,012) мкмоль фруктозо-1,6-дифосфата, превращенного

ферментом, содержащимся в 1 мл сыворотки крови, за 1 мин при 37 °С.

Активность альдолазы в крови служит дополнительным диагно-

стическим признаком ряда заболеваний. В ткани злокачественных опу-

холей фермент в несколько раз активнее, чем в неизмененных тканях, в

эритроцитах активность фермента в 100 раз выше, чем в сыворотке кро-

ви, гемолиз существенно искажает результаты анализа. При ряде заболе-

ваний (прогрессирующая мышечная дистрофия, инфаркт миокарда, ак-

тивный ревматизм, рак, поражения печени и др.) активность альдолазы в

крови повышается, причем тем значительнее, чем тяжелее протекает бо-

лезнь.

В качестве унифицированного метода определения альдолазы

принят метод Товарницкого–Валуйской, основанный на том, что про-

дукты расщепления фруктозо-1,6-фосфата альдолазой при реакции с

2,4-динитрофенилгидразином образуют гидразоны, окрашенные в ще-

лочной среде. Интенсивность окраски пропорциональна активности

фермента.

Альфа-амилаза

Альфа-амилаза (1,4-a-D-глюкан глюканогидролаза; КФ 3.2.1.1) от-

носится к группе гидролаз, катализирующих гидролиз полисахаридов, со-

держащих a-D-глюкозу до простых моно- и дисахаридов (мальтоза, глю-

коза). Атакуются связи между 1 и 4 атомами углерода, связи в полисахари-

дах между a-1,6-связями не атакуются ферментом. Существует второй тип

амилазы – b-амилаза (выделена из растений и бактерий); она способна

расщеплять только терминальные связи на концах углеводов. Высокая ак-

тивность фермента обнаруживается в печени, скелетных мышцах, в мик-

роворсинках энтероцитов, слезной жидкости, секрете молочных желез. Ак-

тивность амилазы найдена также в различных опухолях. Наиболее богаты

амилазой поджелудочная и слюнные железы. Амилаза секретируется в

кровь главным образом из этих органов. Плазма крови человека содержит

альфа-амилазы двух изозимных типов: панкреатическую (Р-тип), выраба-

тываемую поджелудочной железой, и слюнную (S-тип), продуцируемую

слюнными железами. В физиологических условиях амилаза сыворотки

крови состоит на 40 % из панкреатической амилазы и на 60 % из слюнной

амилазы. На электрофореграммах каждый из этих изоферментов выявляет-

ся в виде двух основных фракций. Изоферменты слюнных желез имеют

более низкую изоэлектрическую точку (ИЭТ) и при электрофорезе мигри-

руют быстрее. Определение содержания каждого изофермента амилазы воз-

можно произвести с помощью иммунологических методов. При этом исполь-

зуют моноклональные антитела к изоферментам слюнных желез, которые из-

бирательно ингибируют активность слюнной амилазы. Активность, измерен-

ная после ингибирования, соответствует активности панкреатического изо-

фермента. Вычитая из общей активности амилазы активность панкреатиче-

ской амилазы, можно получить значение активности изофермента слюны.

Оба изофермента амилазы имеют молекулярную массу около 45 кДа,

поэтому фильтруются в почках и экскретируются с мочой. Тем не менее, в

составе мочи больший удельный вес приходится на панкреатический изо-

фермент.

Уровень активности альфа-амилазы в норме: в сыворотке 25–220 МЕ/л;

в моче 10–490 МЕ/л (Назаренко Г.И. и др., 2002).

Определение активности альфа-амилазы имеет большое значение в

диагностике заболеваний поджелудочной железы. Повышение активности

альфа-амилазы в сыворотке крови в 2 и более раз должно расцениваться

как симптом поражения поджелудочной железы. Небольшая гиперамила-

земия дает основание заподозрить патологию поджелудочной железы, но

иногда наблюдается при заболеваниях других органов. С мочой выделяет-

ся в основном Р-амилаза, что является одной из причин большей информа-

тивности о функциональном состоянии поджелудочной железы уроамила-

зы, чем амилазы сыворотки крови. Полагают, что 65 % амилазной актив-

ности мочи обусловлено панкреатической амилазой. Этим объясняется то

обстоятельство, что при остром панкреатите именно ее содержание увели-

чивается в сыворотке (до 89 %) и особенно в моче (до 92 %) без изменения

показателей амилазы слюнных желез. При остром панкреатите активность

амилазы крови и мочи увеличивается в 10–30 раз. Гиперамилаземия насту-

пает в начале заболевания (уже через 4–6 ч), достигает максимума через

12–24 ч, затем быстро снижается и приходит к норме на 2–6-й день. Уро-

вень повышения сывороточной амилазы не коррелирует с тяжестью пан-

креатита.

Гиперамилазурия у 75 % больных с острым и обострением хрониче-

ского панкреатита регистрируется в период до 8 ч от начала заболевания, у

50 % больных – через 8–12 ч, у 25 % – через 12–18 ч, у 66,6 % – через 18–

24 ч, у 75 – через 24–36 ч, у 100 % – через 36–48 ч и у 62,5 % – через 48–

72 ч. Диагностическая чувствительность определения амилазы в сыворотке

крови для острого панкреатита составляет 95 %, специфичность – 88 %.

Острые панкреатиты могут протекать без повышения активности

амилазы (в частности, при панкреонекрозе). В первые сутки от начала за-

болевания нормальный уровень амилолитической активности мочи выяв-

ляется у 25 % больных абортивным панкреатитом, у 20 % – жировым и у

10 % – геморрагическим. Более точную информацию получают при иссле-

довании активности амилазы в суточном объеме мочи. Важное, а в ряде

случаев и решающее значение для распознавания рецидивирующей формы

острого панкреатита имеет повторное повышение активности амилазы

крови и мочи во время повторяющихся рецидивов болевого синдрома.

Данный признак имеет исключительно большое значение для распознава-

ния легких форм рецидивирующего острого панкреатита. Поэтому следует

еще раз подчеркнуть необходимость повторных исследований активности

альфа-амилазы мочи на протяжении первых двух суток заболевания.

При различных формах острого панкреатита динамика повышения аль-

фа-амилазы в крови и моче носит различный характер. Так, для абортивного

(отечного) панкреатита характерна кратковременная амилаземия в 1-е–3-и сут-

ки заболевания; для жирового панкреонекроза – высокая и длительная амила-

земия, а для геморрагического панкреонекроза – кратковременная гиперами-

лаземия на 3-и сутки заболевания. Патогенетически гиперамилаземия развива-

ется в результате блокады отечной интерстициальной тканью выводных про-

токов поджелудочной железы и наиболее характерна для жирового панкрео-

некроза. При геморрагическом панкреонекрозе отмечают резкое повышение

активности альфа-амилазы в крови с последующим быстрым ее снижением,

что отражает прогрессирование некроза в поджелудочной железе.

Выявление гиперамилаземии и гиперамилазурии является важным,

но не специфическим для острого панкреатита; кроме того, повышение ак-

тивности фермента может быть кратковременным. Для повышения ин-

формативности полученных результатов исследования полезно определе-

ние активности амилазы крови и мочи сочетать с параллельным определе-

нием концентрации креатинина в моче и сыворотке крови. На основании

этих данных рассчитывают индекс амилазо-креатининового клиренса по

формуле

АМ · К

С · 100 / (К

М · АС),