Климнюк С.І., Ситник І.О., Творко М.С., Широбоков В.П. Практична мікробіологія: Посібник

Подождите немного. Документ загружается.

Розділ 5. Екологія мікроорганізмів

Мікробіологічні дослідження харчових продуктів

Харчові продукти – сприятливе середовище не тільки для збереження, але й

для розмноження сапрофітних, патогенних і умовно-патогенних бактерій. Серед

багатьох продуктів є такі, що містять так звану специфічну мікрофлору (молочно-

кислі бактерії, молочнокислі стрептококи, болгарська паличка, біфідобактерії,

дріжджі, кефірний грибок та ін.). Вона знаходиться в молочнокислих продуктах,

різних напоях і надає їм приємних смакових якостей (простокваша, кефір, кумис,

йогурт, пиво, квас, безалкогольні напої). У процесі бактеріологічного аналізу ця

мікрофлора не досліджується.

Окрім того, в багатьох продуктах можуть міститись аеробні й анаеробні мікро-

організми, або їх спори, що потрапили з навколишнього середовища. Вони скла-

дають неспецифічну мікрофлору, яка псує продукти, робить їх непридатними для

вживання, а часом спричиняє тяжкі захворювання, харчові токсикоінфекції й токси-

кози. Саме ці мікроорганізми та їх токсини виявляють при проведенні бактеріоло-

гічного контролю м’яса й м’ясних продуктів, риби й рибних продуктів, молока й

молочних продуктів, різноманітних консервів, напоїв тощо.

Санітарно-бактеріологічні дослідження харчових продуктів проводять з ме-

тою визначення ступеня мікробного обсіменіння (ЗМЧ), виявлення бактерій гру-

пи кишкових паличок (індекс і титр БГКП), ентерококів, стафілококів, деяких

клостридій та протею. За епідемічними показаннями досліджують і наявність

патогенних мікроорганізмів (сальмонел черевного тифу, паратифів, гострого гаст-

роентериту, шигел, холерних вібріонів, мікобактерій, збудників бруцельозу, боту-

лізму, ентеровірусів та ін.).

Молоко й молочні продукти.Санітарно-бактеріологічний стан молока оці-

нюють за мікробним числом, індексом БГКП, наявністю стафілококів та ентеро-

коків. Для визначення ЗМЧ пастеризованого молока його розводять від 10

-1

до 10

-3

і по 1 см

кожного розведення вносять у стерильні чашки Петрі й заливають розп-

лавленим і охолодженим до 45 °С агаром. Посіви інкубують при 37 °С протягом

доби, підраховують кількість колоній, роблять поправку на розведення й визнача-

ють ЗМЧ. Воно не повинно перевищувати 7,5×10

Для визначення титру БГКП нерозведене пастеризоване молоко засівають у

6 пробірок із середовищем Кесслера або глюкозо-пептонним середовищем за схе-

мою: в три пробірки вносять по 1 см

молока, в інші три – по 0,1 см

(1 см

молока,

розведеного в 10 разів стерильною водою). Посіви інкубують протягом 24 год при

43 °С, після чого з проб, що забродили, роблять висів на агар Ендо. З колоній

темно-червоного кольору виготовляють мазки, ставлять пробу на оксидазу, пере-

сівають у глюкозо-пептонне середовище й інкубують при 43 °С протягом доби.

При оцінці результатів враховують наявність у мазках грамнегативних пали-

чок, що не продукують оксидази, викликають бродіння глюкози до кислоти й газу.

Титр БГКП не повинен перевищувати 3. Аналогічним способом досліджують вер-

шки, молочнокислі продукти, морозиво, креми, дитячі молочні суміші тощо.

Частина І. Загальна мікробіологія

Виявлення стафілококів і ентерококів проводять так само, як і в воді. Пато-

генні бактерії виділяють шляхом посіву молока на відповідні елективні та дифе-

ренціально-діагностичні середовища з наступним виділенням чистих культур та

їх ідентифікації.

М’ясо й м’ясні продукти.Перш за все мікроскопічно визначають інтен-

сивність поверхневого обсіменіння м’яса в мазках-відбитках. Препарати готують

із шматочків м’яса розміром 2×2,5 см, забарвлюють за Грамом і мікроскопують.

М’ясо вважають свіжим, якщо в мазках немає, або в полі зору виявляють не більше

10 паличкоподібних бактерій. При сумнівній свіжості знаходять десятки коків і

до 30 паличок. Якщо в полі зору велика кількість бактерій і переважають палич-

коподібні форми – м’ясо оцінюють як несвіже.

При дослідженні ковбас, м’ясного фаршу, кулінарних виробів (котлети, бит-

ки та ін.) визначають загальне мікробне число, присутність БГКП, сальмонел,

протеїв, анаеробних клостридій.

Зрізану поверхню ковбаси припікають розжареним на вогні скальпелем, плівку

протирають спиртом, обпалюють і знімають. Стерильним скальпелем вирізають

дві наважки по 1-2 г із поверхні та глибини батона. Кожну наважку окремо вміщу-

ють у стерильну фарфорову ступку й емульгують із стерильним піском, добавля-

ючи стерильний ізотонічний розчин хлориду натрію з таким розрахунком, щоб

отримати 10 % суспензію.

Для визначення ЗМЧ на дно стерильних чашок Петрі вносять по 0,1 см

сус-

пензії, заливають розплавленим і охолодженим до 45 °С МПА, інкубують протя-

гом 48 год при 37 °С. Підрахунок колоній і визначення кількості бактерій в 1 г

продукту проводять загальноприйнятим методом. За існуючими нормативами ЗМЧ

не повинно перевищувати 10

При дослідженні на виявлення БГКП 0,1 см

суспензії сіють на середовище

Ендо, ретельно розтираючи матеріал шпателем по всій поверхні агару, і вирощу-

ють 18-20 год при 37 °С. Підрахунок колоній, ідентифікацію бактерій та визна-

чення індексу БГКП проводять так само, як вище описано. При відсутності росту

колоній на середовищі Ендо відмічають, що при прямому посіві 0,01 г продукту

коліформні бактерії не виявлені.

Бактерії роду Proteus виділяють за методом Шукевича. Для виявлення сальмо-

нел, анаеробних клостридій та інших патогенних мікроорганізмів суспензію сіють

на відповідні елективні середовища, виділяють чисті культури та ідентифікують

їх за допомогою методик, що застосовуються для вивчення цих мікроорганізмів.

Риба і рибні продукти. М’ясо риб і рибні продукти контамінуються багать-

ма видами мікробів, що потрапляють із води, луски, кишок, різних предметів,

палуб та устаткування риболовецьких кораблів, а також із рук персоналу, який

обробляє та готує рибну продукцію. З епідеміологічної точки зору найнебезпеч-

нішими бактеріями є палички ботулізму, які зустрічаються в кишечнику риб, особ-

ливо осетрових, а також холерні й парагемолітичні вібріони та віруси гепатиту А.

Розділ 5. Екологія мікроорганізмів

Санітарно-бактеріологічні дослідження рибопродуктів проводять, як прави-

ло, при виникненні харчових токсикоінфекцій. Вони спрямовані на виявлення

патогенних та умовно-патогенних мікроорганізмів або їх токсинів.

Методики забору проб, проведення аналізу, виділення чистих культур аероб-

них і анаеробних бактерій та їх ідентифікація подібні до тих, які застосовуються

при дослідженні м’яса й м’ясних продуктів.

Консервовані продукти.Мікробіологічному контролю підлягають м’ясні,

рибні, овочеві та фруктові консерви. Їх досліджують на наявність БГКП, сальмо-

нел, стафілококів, аеробних і анаеробних спороносних мікробів. Найбільш небез-

печними є консерви домашнього виробництва, особливо виготовлені з грибів, які

часто є причиною виникнення ботулізму.

Безпосередньо перед проведенням аналізу для перевірки герметичності бан-

ки занурюють на 3-5 хв у нагріту воду (85 °С). Повітря всередині банок нагрівається,

розширяється і в разі негерметичності виходить назовні у вигляді бульбашок. При

порушенні герметичності консерви мікробіологічному дослідженню не підлягають.

Досліджувану банку миють гарячою водою з милом, витирають насухо, об-

тирають спиртом і верхню кришку обпалюють. Спеціальним пробійником проби-

вають кришку й скляною трубкою набирають матеріал для посіву. Для виділення

аеробних бактерій беруть не менше 1 г вмісту, а для анаеробних – 3-5 г.

Аеробні мікроорганізми виявляють шляхом посіву у 2 пробірки з 1 % цукро-

вим бульйоном, інкубують при 37 °С протягом 5-6 діб. При появі ознак росту ви-

готовляють мазки, пересівають на МПА, середовище Ендо та скошений агар (за

Шукевичем). Ідентифікацію чистих культур БГКП, сальмонел, протею проводять

так само, як і при дослідженні м’яса та м’ясних продуктів.

Для виявлення анаеробних бактерій досліджуваний матеріал сіють у дві про-

бірки з середовищем Кітта-Тароцці, одну з яких прогрівають 20 хв при 80 °С.

Після інкубації в термостаті культури мікроскопують і при виявленні в мазках

грампозитивних паличок зі спорами виділяють чисті культури за методом Вейн-

берга або Цейслера. При відсутності росту посіви витримують у термостаті про-

тягом 10 діб.

При дослідженні на наявність ботулінічного токсину проби консервів фільтру-

ють і з фільтратом ставлять реакцію нейтралізації токсину типовими антиботулі-

новими сироватками А, В, С, D, Е, F, G в біологічній пробі на білих мишах.

Ботулотоксин можна виявити й за допомогою фагоцитарного показника. У

пробірку вносять 1 об’єм 3 % розчину лимоннокислого натрію, 2 об’єми крові

кролика, 1 об’єм досліджуваного матеріалу, 1 об’єм добової культури стафілокока

209 Р, що містить 2 млрд мікробних тіл в 1 см

за оптичним стандартом. Інкубують

20 хв при 37 °С, після чого готують мазки, фіксують їх метиловим спиртом і за-

барвлюють азур-еозином. У мазку підраховують 50 лейкоцитів і число фагоцито-

ваних ними стафілококів, ділять кількість поглинених коків на 50 і вираховують

фагоцитарний показник. При наявності ботулінічного токсину фагоцитарний по-

казник зменшується в порівнянні з контролем, а антиботулінова сироватка певного

Частина І. Загальна мікробіологія

типу нейтралізує пригнічення фагоцитарного індексу. За типом протиботулінової

сироватки визначають тип токсину.

Дослідження мікрофлори людини

Організм людини населяють понад 500 видів бактерій, біля 50 видів вірусів і

понад 20 видів найпростіших. Загальна кількість мікроорганізмів досягає 10

що в 10 разів більше, ніж всіх клітин макроорганізму.

Нормальна мікрофлора людського тіла поділяється на дві групи:

1) постійна (резидентна), специфічна для даного біотопу (автохтонна);

2) тимчасова, занесена з інших біотопів хазяїна (алохтонна), або з оточуючо-

го середовища (заносна).

В різних ділянках тіла вона неоднакова, оскільки кожний біотоп характери-

зується своєрідними умовами для існування мікроорганізмів. Найбільше епідемі-

ологічне значення мають представники мікробних угруповань шкіри, верхніх ди-

хальних шляхів, шлунково-кишкового тракту, сечо-статевих органів. Методи дос-

лідження мікрофлори різних біотопів значною мірою відрізняються між собою.

Дослідження мікрофлори людини проводять при діагностиці ендогенних інфекцій,

дисбактеріозів, бактеріоносійства, у космонавтів, членів екіпажів підводних човнів

та полярних експедицій для уникнення бактерійної несумісності.

Мікрофлора шкіри. Найбільш характерними мікробами шкіри є коринебак-

терії (Corynebacterium bovis, C.lipophylicum, C.minutissimum, C.pseudodiphthe-

riticum, C.xerosis); пропіонібактерії (Propionibacterium acnes, P.avidum, P.freuden-

reichii, P.granulatum); стафілококи (Staphylococcus epidermidis, S.saprophyticus,

S.capitis, S.cohnii); мікрококи (Micrococcus kristinae, M.luteus, M.varians); сарцини

(Sarcina maxima, S.ventriculi); актиноміцети (Actimomyces bolis, A. israelii); гриби

(Pityrosporum ovale, P.orbiculare). У окремих осіб зустрічаються дріжджоподібні

гриби Candida, Staphylococcus aureus, різні види стрептококів, анаеробні клост-

ридії. З епідеміологічної точки зору важливими біотопами є шкіра обличчя, пах-

винних ямок, промежини, молочних залоз породіль, місця операційних розрізів.

Матеріал для дослідження із здорової чи патологічно зміненої шкіри найчас-

тіше беруть стерильним ватним тампоном (див. змиви з рук). Він дає змогу прове-

сти лише якісний аналіз мікрофлори, що вегетує на поверхні шкіри.

Для більш точного дослідження мікрофлори шкіри використовують метод

змивів-зскрібок Вільямсона і Клігмана в модифікації С.І. Ситника. За допомогою

цього методу можна визначити абсолютне число мікроорганізмів на досліджу-

ваній ділянці шкіри. Для цього на поверхню шкіри прикладають і щільно притис-

кають стандартний стерильний скляний циліндр із шліфованими краями, площа

перерізу якого становить точно 1 см

, а висота 5 см. У нього вносять 1 см

0,1 %

розчину тритону Х-100 в 0,075 М фосфатному буфері рН 7,9. Потім в циліндр

опускають стерильний стальний робочий елемент масою 18 г, який має на торці

дрібні насічки, які роблять зскрібок епітелію і мікрофлори. Робочий елемент обер-

тають руками без натиску протягом 1 хв. Змивну рідину відсмоктують стериль-

Розділ 5. Екологія мікроорганізмів

ною пастерівською піпеткою в пробірку. В циліндр, ще притиснутий до шкіри,

повторно вносять 1 см

розчину тритону і процедуру змиву повторюють. Обидві

змивні рідини змішують і з суміші готують десятикратні розведення (10

-0

, 10

-1

-2

, 10

-3

) в 0,05 % розчині тритону для попередження реагрегації бактерій. По

0,1 см

нерозведеної, а також розведених проб засівають на селективні живильні

середовища (кров’яний агар; ЖСА, фуразолідоно-твіновий агар, середовища Гарро,

Ендо, Сабуро, кров’яний агар ВВL для анаеробів (до стандартного середовища

ВВL додають 5 % дефібринованої крові барана). Посіви інкубують при 37 °С про-

тягом 48-96 год. Підраховують кількість колоній, що виросли, користуючись лу-

пою або приладом ПСБ. Результати виражають числом КУО на 1 см

шкіри за

формулою:

число КУО = 20 × m × n,

де 20 – постійний коефіцієнт при посіві 0,1 см

проби,

m – число колоній, що виросли,

n – розведення (в 10, 100, 1000 разів).

У відповіді для лікаря вказують загальне мікробне обсіменіння досліджува-

ної ділянки: високе – понад 10

, середнє – 10

-10

, низьке – менше 10

КУО/см

;

види виділених мікроорганізмів; стан мікробіоценозу (еубіоз, дисбактеріоз).

Мікрофлора дихальних шляхів. Серед резидентної мікрофлори дихальних

шляхів найчастіше знаходять зеленячі, гемолітичні й негемолітичні стрептококи,

коринебактерії, нейсерії, стафілококи, мікрококи, пептострептококи, бактероїди.

Значно рідше виявляють актиноміцети, мікоплазми, трепонеми, ентеробактерії й

гриби роду Candida. Основна маса мікрофлори припадає на долю Streptococcus viri-

dans (понад 90 % всіх мікроорганізмів). Біля 10 % людей є носіями Staphylococcus

aureus, а серед медпрацівників хірургічних і акушерсько-гінекологічних стаціонарів

цей вид виділяють у 40-90 % обстежених осіб. Слизова оболонка трахеї, бронхів,

бронхіол і альвеол здорової людини, як правило, не містить мікроорганізмів.

Матеріал для дослідження повинен брати спеціаліст, оскільки правильний

забір має вирішальне значення для виявлення епідеміологічно значущих мікро-

організмів.

Слиз (секрет) із носа беруть натще або через 2 год після вживання їжі й до

початку лікування стерильними ватними тампонами, виготовленими краще з не-

гігроскопічної вати. Для кожного носового ходу використовують окремий там-

пон. Матеріал із носоглотки беруть спеціальним задньоглотковим тампоном, який

вводять через зів або носовий отвір у носоглотку. Матеріал із ротоглотки забира-

ють одним тампоном. Спочатку обтирають ним правий мигдалик, потім дужку

піднебіння, язичок, ліву дужку й лівий мигдалик. Важливо слідкувати, щоб там-

пон не торкався слизової щік і язика. В разі виявлення чітко локалізованого пато-

логічного осередку матеріал із нього необхідно взяти окремим тампоном. Зеле-

нячі стрептококи частіше виявляють у слині, яку беруть з-під язикової ямки.

При ураженні нижніх дихальних шляхів і легень досліджують харкотиння.

Останнім часом широко використовують більш точні аспіраційні методи при брон-

хоскопії та пункції трахеї. При бронхоскопії вводять у бронхи 5 см

0,85 % розчину

Частина І. Загальна мікробіологія

хлориду натрію, який потім відсмоктують в кількості 2-3 см

. При використанні

вказаних методів проводять як якісне, так і кількісне визначення мікрофлори.

Взятий матеріал сіють на кров’яний, сироватковий, жовтково-сольовий та

шоколадний агар, середовища Ендо й Сабуро.

Виявлення мікроорганізмів, які не є представниками нормальної мікрофло-

ри, або збільшення кількості будь-якого виду автофлори на фоні хвороби, свідчить

про їх етіологічну роль при даному захворюванні.

Мікрофлора порожнини рота. Мікрофлора ротової порожнини – дуже склад-

ний мікробіоценоз, в якому тісно співіснують аероби й анаероби, грампозитивні й

грамнегативні бактерії, гриби, віруси та найпростіші. Найбільш характерними пред-

ставниками є ротові стрептококи (Streptococcus salivarius, S.mitis, S.mutans, S.sanguis,

S.viridans); анаеробні пептострептококи (Peptostreptococcus anaerobius, P.productus,

P.parvulus, P.lanceolatus, P.micros); стафілококи (Staphylococcus epidermidis, S.sapro-

phyticus, S.hominis, S.hyicus); мікрококи (Micrococcus luteus, M.varians); бактероїди

(Bacteroides fragilis, B.melaninogenicus, B.gingivalis); спірохети (Treponema denticola,

T.macrodentium, T.orale, T.vincentii, Borrelia); нейсерії (Neisseria flava, N.sicca); леп-

тотрихії (Leptotrichia buccalis); вейлонели (Veilonella parvula); лактобацили (Lactoba-

cillus casei, L.acidophilus); фузобактерії (Fusobacterium nucleatum, F.periodenticum,

F.plauti); превотели (Prevotella disiens); кампілобактерії (Сampylobacter sputorum);

гриби родів Actinomyces, Candida; мікоплазми (Mycoplasma orale, M.salivarium).

До випадкових, але досить небезпечних представників ротової мікрофлори

слід віднести Streptococcus pyogenes, S.viridans, S.pneumoniae, Corynebacterium

diphtheriae, Staphylococcus aureus, віруси герпесу, епідемічного паротиту, ВІЛ-

інфекції та ін.

Бактеріологічні дослідження вмісту ротової порожнини проводять з метою

вивчення етіології патологічних процесів слизової, ясен, зубів, діагностики ряду

специфічних захворювань (сифіліс, туберкульоз, ангіна Симановського-Плаута-

Венсана, ВІЛ-інфекція), при виготовленні нових матеріалів для протезів та плом-

бування зубів. Його треба проводити до початку лікування хіміопрепаратами, до

вживання їжі й не раніше, ніж через 4-5 год після місцевого лікування.

Матеріалом для дослідження є полоскальний змив, зубний наліт, біоптати

слизової щік і язика, вміст каріозних зубів і гангренозних пульп. Найчастіше його

беруть ватним тампоном, яким обтирають слизову щік, ясен, язика, мигдалики. У

разі виявлення ясенних карманів чи виразок мазок треба брати ще одним тампо-

ном або платиновою петлею, а при ушкодженні зубних каналів – стоматологічним

зондом, обгорнутим стерильною ватою або окремими ватними чи паперовими

гнотиками. Слину забирають з-під язика. У зв’язку із зростаючим поширенням

СНІДу взяття матеріалів для бактеріологічного чи вірусологічного дослідження

треба проводити з максимальною обережністю, щоб виключити зараження інших

пацієнтів.

При бактеріоскопії мазки забарвлюють за методом Грама або Романовсько-

го-Гімзи. Спірохети виявляють у нативних препаратах за допомогою темного поля,

фазово-контрастного чи аноптрального мікроскопів.

Розділ 5. Екологія мікроорганізмів

Бактеріологічне дослідження проводять шляхом посіву матеріалу на елек-

тивні та диференціальні середовища для аеробних і анаеробних мікроорганізмів

із врахуванням біологічних особливостей вище вказаних родів і видів бактерій,

грибів і найпростіших. Виділені культури ідентифікують за їх морфологічними,

культуральними, ферментативними та антигенними властивостями.

Висновок про роль того чи іншого збудника у виникненні карієсу, гінгівіту,

пульпіту, парадонтозу та інших патологічних процесів роблять не лише на основі

визначення виду, а й щільності його популяції. Частіше всього вказані захворю-

вання викликає не один вид, а різноманітні асоціації мікроорганізмів.

Мікрофлора шлунково-кишкового тракту. Стравохід у здорових людей не

містить мікроорганізмів, або їх дуже мало (Candida albicans, Actinomyces israelii).

У шлунку прижились дріжджі (C.albicans, C.tropicalis); сарцини (S.ventriculi); кам-

пілобактерії (Сampylobacter fetus, C.pylori); рідко виявляють лактобацили, стафі-

ло- і стрептококи. У тонкому кишечнику знаходять ентерококи (Enterococcus

faecalis, E.faecium, E.durans); біфідобактерії (Bifidobacterium bifidum, B.infantis,

B.longum); лактобацили; E.coli.

Найбільш численна й різноманітна мікрофлора товстого кишечника. Основ-

ну її масу складають анаеробні мікроорганізми: Bifidobacterium spp., Bacteroides

spp. На долю цих двох родів припадає 96-99 % всіх мікробів, що населяють товсті

кишки. Тут вегетує значна кількість Escherichia spp., Enterococcus spp., Lactobacillus

spp. Залишкову мікрофлору товстого кишечника складають численні види родів

Clostridium, Staphylococcus, Proteus, Candida, Enterobacter, Pseudomonas, Veillonella,

Peptococcus, Peptostreptococcus, Actinomyces та ін. Всього описано понад 260 видів

бактерій. У окремих людей у кишечнику знаходять ентеровіруси, які при пору-

шенні опірності організму можуть викликати різноманітні захворювання. В ряді

випадків у випорожненнях можна виявити різні види найпростіших.

Стійкі порушення нормальних мікробіоценозів називають дисбактеріозами.

При цьому відбуваються зміни самого складу автофлори та кількісного співвідно-

шення окремих її представників: значне зменшення видів нормальної мікрофло-

ри аж до повного їх зникнення, або появи у великій кількості тих, які в нормі

рідко зустрічаються. Це, в основному, стафілококи, грамнегативні палички, дріж-

джоподібні гриби Candida та клостридії.

Необхідність досліджувати дисбактеріоз кишечника виникає при довготри-

валих проносах, при яких не виділяють патогенних ентеробактерій, після перене-

сення кишечних інфекцій із довгим періодом реконвалесценції, тривалої антибіо-

тикотерапії, злоякісних пухлинах, перед операціями на органах черевної порож-

нини, у недоношених новонароджених та при захворюваннях, що важко піддаються

лікуванню (ентероколіти, виразкові коліти, холецистити тощо).

Матеріал із шлунка й тонкої кишки беруть за допомогою спеціальних зондів

або капсул, які відкриваються у певному відділі кишечного тракту й закривають-

ся після взяття проби. Останнім часом для цієї мети широко використовують гас-

трофіброскопи та гастродуоденоскопи, які дозволяють брати на аналіз не лише

вміст шлунка чи кишечника, а й біоптати їх слизової оболонки для дослідження

Частина І. Загальна мікробіологія

мукозних бактерій. Матеріал із сигмоподібної та прямої кишок беруть тампоном,

трубкою Цімана, колонофіброскопом чи ректороманоскопом.

При діагностиці дисбактеріозу кишечника досліджують кал. Його вносять у

заздалегідь зважені флакончики в кількості 0,5-1,0 г без консерванта й доставля-

ють до лабораторії не пізніше 2 год після забору. Визначену наважку випорож-

нень розводять спеціальним буферним розчином від 10

-1

до 10

-12

Із розведень 10

-3

-10

-6

по 0,1 см

сіють на середовища ЖСА (для виявлення

стафілококів), кров’яний агар (для ентерококів і виявлення гемолітичних форм),

Сабуро (для грибів), Вільсона-Блера (для клостридій).

Із розведень 10

-5

-10

-8

по 0,1 см

сіють на середовище Ендо (для ентеробак-

терій), МРС-2 і МРС-4 (для лактобактерій), а з розведень 10

-7

-10

по 1,0 см

засі-

вають на середовище Блаурока, яке розливають високим стовпчиком (для біфідо-

бактерій), та спеціальні середовища для бактероїдів.

Для виявлення патогенних ентеробактерій нативний рідкий кал, або з розве-

день 10

-1

, бактеріологічною петлею сіють на середовища Ендо, Плоскирєва та

вісмут-сульфіт агар. По 1-2 см

із розведення 10

-1

сіють на середовища збагачення

(Мюллера, селенітовий чи магнієвий бульйон). Склад і методика виготовлення

всіх живильних середовищ приводиться в інструкції для діагностики дисбак-

теріозів.

Посіви для вирощування факультативно-анаеробних бактерій інкубують при

37 °С протягом 24-48 год, біфідобактерій – 48 год, анаеробів – 4-5 діб в анаероста-

тах, грибів – 96 год при 28-30 °С.

Після ідентифікації виділених культур проводять розрахунки кількості мікро-

організмів тієї чи іншої групи на 1 г випорожнень. Діагностику дисбактеріозу

проводять за відхиленням показників кількісного вмісту бактерій різних таксоно-

мічних груп від нормальних величин, які представлені в таблиці 10.

Мікрофлора сечостатевих органів. Паренхіма нирок, ниркові мисочки, се-

човоди, сечовий міхур, сеча, порожнина матки й маткові труби у здорових людей

вільні від мікробів. У зовнішній частині уретри і статевих органів чоловіків і жінок

зустрічаються Mycobacterium smegmatis, у невеликій кількості стафілококи, стреп-

тококи, пептококи, пептострептококи, коринебактерії, бактероїди, фузобактерії,

гриби родів Candida, Torulopsis, Geotrichum.

У піхві здорових жінок переважають молочнокислі бактерії (палички Додер-

лайна), дифтероїди та грамнегативні Comma variabile. Значно рідше виявляють

стрепто-, стафіло-, пептококи та клостридії. У 15-20 % вагітних жінок зустрічається

Streptococcus agalactiae, дуже небезпечний для новонароджених. Присутність грам-

негативних бактерій є наслідком фекальної контамінації.

Порцію першої ранкової сечі (3-5 см

) беруть у стерильний посуд, починаю-

чи з середини сечовипускання, і не пізніше як через 1 год проводять посів для

кількісного визначення мікрофлори або каліброваною платиновою петлею (діа-

метр 2 мм) на агар в чашці Петрі, або в склянку ємністю 30 см

, на стінках якої є

живильне середовище площею 12,5 см

. Середовище обливають мірною кількістю

сечі, потім її виливають (метод Нейчева). Після інкубації посівів підраховують

Розділ 5. Екологія мікроорганізмів

Таблиця 10

Показники нормоценозу товстого кишечника людини

Примітка.* – зустрічаються у окремих здорових осіб;

** – зустрічаються рідко у дітей після 3 місяців.

Кількість бактерій в 1 г випорожнень

Мікроорганізми

дорослих дітей

Bifidobacterium spp.

Bacteroides spp.

Lactobacillus spp.

Streptococcus lactis

Clostridium spp.

Escherichia:

ті, що ферментують лактозу

лактозодефектні

ті, що не ферментують лактозу

гемолітичні

Proteus spp.

Klebsiella spp.

Інші умовно-патогенні ентеробактерії

Другі грамнегативні бактерії

Staphylococcus aureus

Інші стафілококи:

(S.epidermidis, S.saprophyticus та ін.)

Enterococcus spp.

Candida spp.

Плісняві гриби

Патогенні ентеробактерії

– 10

8**

– 10

–

– 10

3**

– 10

число колоній і визначають кількість бактерій в 1 см

сечі. Критичний (небезпеч-

ний) рівень бактеріурії – 10

і більше.

Матеріал для дослідження мікрофлори піхви і визначення ступеня чистоти

вагінального вмісту беруть ложечкою Фолькмана, шпателем, або жолобоподіб-

ним зондом із заднього склепіння піхви й наносять тонким шаром на предметне

скло. Мазок фіксують 10 хв у суміші Никифорова, забарвлюють за методом Грама

й досліджують під імерсійною системою.

У вагітних жінок визначають чотири ступені чистоти вагінального секрету:

перший – поодинокі клітини злущеного епітелію, багато паличок Додерлай-

на, немає лейкоцитів;

другий – клітини епітелію, палички Додерлайна і Comma variabile, пооди-

нокі лейкоцити;

третій – дуже рідко палички Додерлайна або Сomma variabile, багато лейко-

цитів, наявна кокова флора;

четвертий – відсутні палички Додерлайна і Comma variabile, дуже багато лей-

коцитів, наявна гноєрідна мікрофлора (рис. 29).

Перший і другий ступінь чистоти зустрічається у здорових жінок і вважаєть-

ся нормою; третій і четвертий – характеризує патологічний стан статевих органів

і потребує санації перед пологами.

100

Частина І. Загальна мікробіологія

Рис. 29. Чотири ступені чистоти вагінального секрету.

перша друга третя четверта

Мікрофлора очей і вух. У 47 % здорових людей слизова оболонка очей не

містить мікроорганізмів. У решти на кон’юнктиві знаходять Staphylococcus

epidermidis, S.aureus (5 %), Corynebacterium xerosis, C.hoffmani, нейсерії, стрепто-

коки, гемофільні бактерії, мікоплазми, деякі види вірусів. У окремих випадках

автофлора очей (як і проникнення бактерій ззовні) може викликати кон’юктивіти,

блефарити тощо.

Шкіра зовнішнього слухового проходу заселена стафілококами (S.epidermidis,

S.auricularis) та дифтероїдами (C.xerosis). Рідше тут зустрічаються псевдомонади

й ентеробактерії. Середнє і внутрішнє вухо стерильні. Періодично до них можуть

проникати мікроорганізми з носоглотки, але вони швидко гинуть. За певних умов

при масивному проникненні бактерій в середнє вухо виникає отит.

Матеріал для мікробіологічного дослідження беруть із кон’юнктиви або вуш-

ного проходу стерильним тампоном чи маленьким ватним (марлевим) гнотиком;

із слізного мішка – піпеткою, а з середнього вуха – пункцією. Виготовляють мазки

й роблять посіви на оптимальні живильні середовища. Виділення чистих культур

та їх ідентифікацію проводять загальноприйнятими методами.

Розділ 6

ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНА ІНФЕКЦІЯ. ВИКОРИСТАННЯ

ТВАРИН В ЛАБОРАТОРНИХ ДОСЛІДЖЕННЯХ

Досить часто в мікробіологічних, вірусологічних та імунологічних лабора-

торіях використовують біологічний метод дослідження на різноманітних видах

тварин. Його застосовують для експериментального відтворення інфекційних зах-

ворювань, окремих його симптомів або для вирішення спеціальних задач:

1. Встановлення етіологічного діагнозу інфекційної хвороби, особливо в тих

випадках, коли збудник не можна або важко виявити іншим способом (пневмоко-

ки, туляремійні бактерії, віруси сказу, енцефалітів тощо).