Абрамова Л.И., Орлова И.Н. Цитологическая и цитоэмбриологическая техника

Подождите немного. Документ загружается.

ЭЛЕКТРОННОМИКРОСКОПИЧЕСКИХ НАБЛЮДЕНИЙ

В настоящее время наиболее распространенным методом

сохранения ткани для исследования ее в электронном микроскопе

является метод двойной фиксации, т.е. фиксации в глутаральдегиде

с последующей дофиксацией в четырехокиси осмия. Этот метод

сочетает в себе преимущества обоих фиксаторов. При фиксации в

глутаральдегиде сохраняется структура органелл цитоплазмы и

наболее полно сохраняются химические компоненты, чем при

фиксации только четырехокисью осмия. Дополнительная фиксация

ткани в четырехокиси осмия стабилизирует некоторые нейтральные

липиды и большую часть фосфолипидов.

Перед фиксацией с помощью светооптического микроскопа

определяют фазу развития пыльников. Для этого из каждого бутона

вынимают пыльник или часть его и окрашивают в ацетокармине.

Установив фазу развития в одном из одновозрастных пыльников,

остальные фиксируют 2,5%-ным свежеприготовленным раствором

глутаральдегида на 0,1 М фосфатном буфере (рН 7,1-7,3) при

комнатной температуре в течение 1,5-3 ч или оставляют в

холодильнике при 4 градусах С на ночь (16 ч). Зафиксированный

материал промывают охлажденным до 4 градусов С 0,1 М фосфатным

буфером (рН 7,1-7,3) не менее трех раз, держа по часу в каждой

смене или оставляют в 3-й смене на ночь при 4 градусах С. Затем

пыльники дофиксируют 2%-ным раствором четырехокиси осмия,

приготовленном на том же буфере, что и фиксатор при 4 градусах С

от 4 до 16 ч. После дофиксации материал промывают охлажденным

0,1 М фосфатным буфером или помещают сразу в 30%-ный этанол при

4 градусах С на 10 мин. Обезвоживание проводят сначала в

спиртах возрастающей концентрации, затем в смеси спирта с

ацетоном и в абсолютном ацетоне в следующем порядке: 50-

градусный спирт - 15 мин; 70-градусный спирт - 15 мин; 85-

градусный спирт - 15 мин; 96-градусный спирт - 15 мин; 100-

градусный спирт - 30 мин; смесь абсолютного спирта и абсолютного

ацетона (3:1) - 30 мин; 1:1 - 30 мин; 1:3 - 30 мин; абсолютный

ацетон первый раз - 1 ч, второй раз - 1 ч.

До 96-градусного спирта обезвоживание проводят при 4

градусах С в холодильнике, далее вся обработка проходит при

комнатной температуре.

Если в процессе фиксации материал требует дополнительного

контрастирования, то его окрашивают 2%-ным раствором

уранилацетата в 70-градусном спирте в течение 3-16 ч при 4

градусах С.

Обезвоженный материал помещают в смесь абсолютного ацетона

и эпоксидных смол (эпона или аралтида); три части абсолютного

ацетона и одна часть эпона или аралдита на ночь (16 ч) в

термостат при 37 градусах С. Затем добавляют одну часть смолы и

оставляют при той же температуре на 6 ч. После этого на ночь

оставляют пузырьки с материалом без пробок, затем снова

добавляют одну часть смолы и оставляют в термостате при 37

градусах С на 4 ч, или при комнатной температуре на ночь.

Далее материал заливают в свежую смолу (эпон или аралдит) в

желатиновые капсулы или в ячейки из-под таблеток. Пропитка и

полимеризация проводится в термостате при температуре 37

градусов С - сутки, затем при 60 градусах С - еще сутки.

Эпон для заливки готовят по прописи Уикли [1].

Рекомендуемая литература

1. Уикли Б. Электронная микроскопия для начинающих. М., 1975.

8. ВЫЯВЛЕНИЕ СПОРОПОЛЛЕНИНОВЫХ ОБОЛОЧЕК

ТАПЕТАЛЬНЫХ КЛЕТОК ПЫЛЬНИКОВ РАСТЕНИЙ

На ранней одноядерной стадии пыльцевых зерен первичная

клеточная

оболочка тапетальной ткани пыльника лизируется. Одновременно с

исчезновением первичной клеточной оболочки на ее месте

образуется спорополлениновая оболочка, которая устойчива к

механическим и химическим воздействиям. Это свойство вновь

образованной оболочки тапетальных клеток позволяет использовать

метод ацетолиза для изучения ее строения.

Пыльники исследуемых растений помещают в

концентрированную серную

кислоту на 3-5 сут. и более при комнатной температуре. В

результате ацетолиза растворяются все ткани пыльников, кроме

кутикулы, спорополлениноподобных оболочек тапетальных клеток и

экзины пыльцевых зерен. Ацетолизированные пыльники переносят с

помощью пипетки в дистиллированную воду и тщательно промывают в

нескольких ее сменах.

Для изучения поверхностной структуры

спорополлениноподобных оболочек

ацетолизированные пыльники освобождают от кутикулы и экзины

пыльцевых зерен. Процедура проводится под бинокулярным

микроскопом МБС-1 в чашках Петри с дистиллированной водой с

помощью тонких препаровальных игл. Кусочки

спорополлениноподобной оболочки наносят на сетки, используемые

для наблюдения в электронном микроскопе. Из-за высокой

электронной плотности компонентов спорополлениновой оболочки

материал можно не контрастировать.

Для получения поперечных срезов спорополлениноподобной

оболочки

ацетолизированные и тщательно промытые дистиллированной водой

пыльники обрабатывают двумя способами.

Первый способ: ацетолизированные пыльники контрастируют

2%-ным водным раствором четырехокиси осмия в течение 2 ч и

более. Затем

обезвоживают в 96-градусном спирте и абсолютном ацетоне от

нескольких

минут до одного часа и заливают в эпоксидные смолы. Залитый

материал оставляют в термостате при 37 градусах на сутки, затем

при 60 градусах на сутки. Так как пыльники контрастируют осмием,

то полученные срезы дополнительно не окрашивают.

Второй способ: ацетолизированные пыльники обезвоживают и

заливают в

эпоксидные смолы как описано выше. Полученные срезы

контрастируют 2%-ным раствором уранилацетата на 70-градусном

спирте и цитратом свинца по 3 мин в каждом.

Установлено, что при описанном выше способе фиксации и

дальнейшей

заливке пыльников в смолы, некоторые части

спорополлениноподобных

оболочек разрушаются. Опытным путем было установлено, что если

свежие

или фиксированные по Карнуа пыльники поместить в фиксатор

Левитского

(три части 10%-ного формалина от продажного и семь частей 1%-ной

хромовой кислоты), а затем подвергать ацетолизу в

концентрированной серной кислоте, то можно получить наибольшую

сохранность оболочки тапетальной клетки.

Окрашивание срезов. Эффективным способом усиления контраста

является

последовательное окрашивание ультратонких срезов уранилацетатом

цитратом свинца. Срезы помещают в 2%-ный уранилацетат на 20-

градусном

спирте на 1-2 мин, затем промывают в дистиллированной воде и

помещают

в раствор цитрата свинца на 3 мин.

Приготовление цитрата свинца. Для приготовления 10 мл

контрастирующего раствора нужно взять 0,04 г цитрата свинца

(Pb

) x 2H

O) и растворить его в 10 мл кипяченой

дистиллированной воде (дистиллированную воду вскипятить и быстро

охладить, не открывая крышку сосуда). В раствор добавляют 0,1 мл

свежеприготовленного 10 н. едкого натра.

9. МИКРОСКОПИЧЕСКИЕ ИЗМЕРЕНИЯ

Для проведения измерений и подсчета необходимы: объект-микрометр,

окуляр-микрометр и препаратоводитель на столике микроскопа.

Объект-микрометр представляет собой металлическую или стеклянную

пластинку в форме предметного стекла (рис.4а).

На этой пластинке обозначен круг, в центре которого имеется шкала. Величина

всей шкалы составляет 1 мм. Она разделена на 100 частей (рис.4б). Интервалы

между делениями обычно равны 0,01 мм, т.е. 10 микрометрам (сокращенное

обозначение мкм) - это цена одного деления объект-микрометра. Эта величина

всегда обозначена в виде маркировки на объект-микрометре. Объект-микрометр

нужен для определения цены деления окуляр-микрометра, для определения

масштаба изображения на микрофотографиях и рисунках и для определения

увеличения микроскопов со сложными оптическими системами.

Окуляр-микрометр представляет собой тонкую круглую стеклянную

(отдельную или вмонтированную в окуляр) пластинку, с нанесенной на ней

линейной шкалой (рис.4в). Длина всей шкалы может равняться 5 мм. Она

Рис. 4. Принадлежности к микроскопу для измерений и подсчета

микрообъектов. а – объект-микрометр; б – шкала объект-микрометра; в –

линейный окуляр-микрометрсо шкалой 10 мм, равзделенной на 100 частей;

г – сетчатый окуляр-микрометр, аеличина стороны квадрата равна 10 мм и

разделена на 20 частей

разделена на 50 частей, по 0,1 мм каждая, или же на 200 частей - по 0,05 мм

каждая. Бывает шкала

окуляр-микрометра длиной в 10 мм. Она разделена на 100 частей, по 0,1 мм

каждая. Окуляр-микрометр вставляется между линзами окуляра. Такой окуляр-

микрометр служит для линейных измерений.

Для измерений плоскостей и для подсчета числа клеток в определенной

площади используется сетчатый окуляр-микрометр. В нем на стеклянной

пластинке нанесен квадрат. Длина сторон квадрата 10 мм. Каждая сторона

квадрата разделена на 20 частей. В результате пересечения горизонтальных и

вертикальных линий образуется сеточка, с интервалами между делениями 0,5 мм

(рис.4г).

Для измерения больших объектов и для повышения точности измерений

используется винтовой окуляр-микрометр. Отсчетный механизм его состоит из

шкалы (от 0 до 8 мм) с интервалами между делениями в 1 мм, нанесенной на

неподвижной стеклянной пластинке, и сетки в виде двух рисок с перекрестием,

нанесенной на подвижной стеклянной пластинке, а также микрометренного винта

с отсчетным барабаном. Обе пластинки расположены в фокальной плоскости

окуляра. Подвижная пластинка с рисками и перекрестием связана с

микрометренным винтом так, что при его вращении перекрестие и риски

перемещаются в поле зрения окуляра относительно неподвижной шкалы. Шаг

винта равен 1 мм. Таким образом, при повороте барабана винта на один полный

оборот, риски и перекрестие в поле зрения окуляра переместятся на одно деление

шкалы. Следовательно, неподвижная шкала в поле зрения служит для отсчета

полных оборотов барабана винта, т.е. для отсчета полных миллиметров, на

которые перемещается перекрестие и риски окуляр-микрометра. Барабан винта

разделен на 100 частей. При шаге винта в 1 мм поворот барабана на одно

деление соответствует перемещению перекрестия и рисок на 0,01 мм. Таким

образом, шкала барабана служит для отсчета сотых долей

миллиметра.

Полный отсчет по шкалам окуляр-микрометра складывается из отсчета по

неподвижной шкале и отсчета в поле зрения определяется положением

перекрестия и рисок, т.е. подсчитывается, на сколько полных делений шкалы они

переместились, считая от нулевого деления шкалы. При отсчете по барабану

микрометренного винта, определяют, какое деление шкалы барабана приходится

против индекса, расположенного на подвижной части винта. Пределы измерения

винтовым окуляр-микрометром - от 0 до 8 мм.

9.1. Линейное измерение объектов. Величина объектов измеряется

единицами длины микрометрами (мкм), которые раньше назывались микронами.

Изображение объектов под микроскопом измеряется окуляр-микрометром в

делениях его шкалы. Поворотом окуляра, в который вложен окуляр-микрометр, и

перемещением препаратоводителя на столике микроскопа, совмещают шкалу

окуляр-микрометра с измеряемым объектом по направлению измерения.

Определяют сколько делений окуляр-микрометра приходится на длину (ширину)

объекта. При работе с винтовым окуляр-микрометром, наблюдая в окуляр и

вращая барабан по часовой стрелке, подводят центр перекрестия до совмещения

с краем измеряемого объекта и делают первый отсчет по шкалам окуляр-

микрометра по положению рисок.

По шкале в поле зрения отсчитывают полные мм, а по шкале барабана - сотые

доли мм. Таким образом подводят перекрестие до совмещения его центра с

изображением второго края измеряемого объекта и делают второй отсчет по

шкалам микрометра. Вычисляют разность отсчетов, которая является величиной

изображения объекта.

Например, первый отсчет по окуляр-микрометру равен 3,52 мм; второй отсчет

равен 3,64 мм. Величина изображения объекта = 3,64 мм - 3,52 мм = 0,12 мм (120

мкм).

Для выяисления абсолютной величины объекта нужно определить цену

деления окуляр-микрометра. Для этого на предметный столик микроскопа, вместо

препарата помещают объект-микрометр, находит его шкалу и совмещают ее со

шкалой окуляр-микрометра. Определяют сколько делений окуляр-микрометра

приходится на какое-то определенное, возможно большее, число делений объект-

микрометра.

Высчитывают цену деления окуляр-микрометра:

L = (N x s)/ n , где

L - Цена деления окуляр-микрометра

N - Число делений объект-микрометра

S - Цена одного деления объект-микрометра (см. маркировку)

n - Число делений окуляр-микрометра, совпадающих с числом делений

объект-микрометра

Пример: 40 делений окуляр-микрометра точно совпадают с 9

делениями объект-микрометра (см. рис.8). Цена деления объект-микрометра

равна 0,01 мм (10 мкм). Расчитаем цену одного деления окуляр-микрометра:

L = (9 х 0,01 мм)/40 = 0,00225 мм ≈ 2 мкм.

Таким образом, цена деления окуляр-микрометра при данной комбинации

окуляра и объектива равна двум мкм. Цена деления окуляр-микрометра зависит

от комбинации окуляра и объектива, а также от длины тубуса микроскопа.

Поэтому она определяется для каждого сочетания окуляра и объектива,

применяемого для измерения, и записывается. При работе на одном микроскопе

можно один раз определить цену деления окуляр-микрометра при различных

комбинациях окуляров и объектвов и использовать полученные величины при

последующих измерениях. При работе с объективами, у которых имеется

коррекционное устройство на толщину покровного стекла, все сравнительные

измерения проводят при одинаковом его значении.

Абсолютную величину объекта вычисляют, умножая величину изображения

объекта, определенную в делениях окуляр-микрометра на цену деления окуляр-

микрометра. В нашем примере: абсолютная величина объекта = 120 мкм х 2

мкм= 240 мкм.

9.2. Определение увеличения (масштаба) изображения на

микрофотографиях и рисунках. Для определения увеличения микрофотографий

фотографируют шкалу объект-микрометра при тех же комбинациях окуляра,

объектива и увеличения фотонасадки, если их несколько, как у МФН-II, при

которых проводилась съемка объекта. Негативы с указанием значения окуляра и

объектива хранить в фототеке. При печати микроснимков при этом же увеличении

фотоувеличителя печатают и фотографию шкалы объект-микрометра. На

фотоотпечатке линейкой измеряют величину нескольких делений шкалы объект-

микрометра или всю шкалу. Полученное число делят на абсолютную величину

этого отрезка шкалы объект-микрометра (число делений объект-микрометра,

умноженное на абсолютную величину одного деления объект-микрометра;

абсолютную величину одного деления объект-микрометра определяют по

маркировке на пластинке объект-микрометра). Это число и есть кратность

увеличения изображения на микрофотографии. Для определения увеличения

рисунка, проецируют на этот рисунок рисовальным аппаратом шкалу объект-

микрометра (при той же оптике, при которой выполнялся рисунок) и зарисовывают

часть шкалы объект-микрометра. Затем производят те же измерения и подсчеты,

что и при определении увеличения на микрофотографиях.

Например, изображение семи делений объект-микрометра на рисунке или

микрофотографии равны 18 мм. Абсолютная величина одного деления объект-

микрометра (по маркировке на нем) равна 0,01 мм. Абсолютная величина семи

делений объект-микрометра = 7 х 0,01 = 0,07 мм (70 мкм).

Увеличение изображения = 18 мм (18000 мкм)/ 0,07 мм (70 мкм) = 257

Можно на рисунках для печати изобразить небольшой отрезок шкалы объект-

микрометра, с указанием абсолютной величины этого отрезка в мкм.

9.3. Определение абсолютной величины объекта по его рисунку . При

проецировании шкалы объект-микрометра на рисунок можно по изображению

объекта на рисунке вычислить абсолютную величину объекта без измерения его

окуляр-микрометром. Величина объекта на рисунке и величина отрезка шкалы

объект-микрометра на рисунке измеряется линейкой.

S = (B x K) / b , где

S - Абсолютная величина объекта; B - абсолютная величина отрезка шкалы

(нескольких делений) объект-микрометра ; K - величина объекта на рисунке;

b - величина отрезка шкалы объект-микрометра (нескольких делений) на рисунке.

Пример: Величина изображения объекта на рисунке равна 62 мм.

Произвольный отрезок спроецированной шкалы объект-микрометра на рисунке

равен 22 мм и включает в себя 10 делений объект-микрометра. Абсолютная

величина этого отрезка шкалы объект-микрометра равна числу делений в нем,

умноженному на абсолютную величину одного деления (по маркировке на

пластинке объект-микрометра), т.е. 10 х 0,01 мм = 0,1 мм.

Абсолютная величина объекта = (0,1 мм х 62 мм) / 22 мм = 0,282 мм = 282

мкм.

Все подсчеты проводятся в одних единицах измерения в мм, а конечный

результат можно перевести в мкм (1 мм = 1000 мкм).

9.4. Определение "линейного увеличения" объектов. Кроме абсолютной

величины объектов, в цитологических исследованиях используется показатель

"линейное увеличение" т.е. отношение величины изображенного на рисунке

объекта к абсолютной величине объекта. Способы определения величины объекта

на рисунке и абсолютной величины объекта описаны выше.

Если взять данные из предыдущего примера, где величина

изображения объекта на рисунке равна 22 мм, а абсолютная его

величина равна 0,282 мм, то

линейное увеличение объекта = 22 мм / 0,282 мм = 78.

9.5. Измерение длины с помощью крестообразного столика

(препаратоводителя) микроскопа [1]. Линейной мерой объекта в двух

измерениях служит продольное и поперечное смещение столика относительно

делений шкалы нониуса. При этом возможны точные змерения от 0,1 мм и

приблизительные - до 0,05 мм. Для этого применяют окуляры с перекрестием или

с указателем. Препаратоводитель смещают до совпадения точки измеряемого

объекта, принятой за начало отсчета, с перекрестием и отмечают показания

измерительной шкалы. Затем продольным или поперечным движением

препаратоводителя достигают конечной точки отсчета и вновь отмечают

показания. Разность показаний является линейной мерой исследуемого объекта.

9.6. Измерение длины с помощью счетной камеры [1]. В качестве

вспомогательного приспособления для измерения длины можно применять камеру

для подсчета элементов крови. Дно отсчетной камеры разделено на квадраты

различной длины. Длина сторон наименьшего квадрата равна 0,05 мм,

"Группового квадрата" - 0,2 мм и большого квадрата - 1 мм. Измеряемый объект

помещают в счетную камеру и определяют его длину путем сравнения его с

длиной сторон квадратов счетной камеры.

9.7. Пересчет количества структурных элементов (устьиц, волосков и др.)

на единицу площади (1 кв.мм) органа, ткани. Сначала необходимо вычислить

площадь поля зрения микроскопа (при той же комбинации объектива и окуляров,

при которой будет проводиться подсчет) по формуле S = πr

где: S - площадь

поля зрения микроскопа, r - радиус поля зрения микроскопа, π ≈ 0,1416.

Диаметр поля зрения микроскопа (d) измеряется объект-микрометром,

значение диаметра делится на 2 и получается значение радиуса для прведенной

выше формулы. Зная цену деления объект-микрометра (см. маркировку на

пластинке объект-микрометра), легко вычислить диаметр поля зрения микроскопа.

Затем подсчитывают количество изучаемых структурных элементов в поле зрения

микроскопа (при условии, что изучаемая ткань или орган занимают все поле

зрения микроскопа):

A = W x (1 мм

/ S) , где

A - Количество изучаемых структурных элементов на единицу площади в 1 мм

W - Количество их в поле зрения микроскопа

S - Площадь поля зрения микроскопа (мм

)

Отношение (1 мм

/ S) является постоянным коэффициентом для данной

оптики, на который можно умножить подсчитанное количество структурных

элементов в поле зрения, не составляя каждый раз уравнения.

Пример: d = 420 мкм = 0,42 мм; r = 210 мкм = 0,21 мм;

= 0,0441 кв.мм; S = 3,1416 х 0,0441 = 0,138 мм

В поле зрения подсчитано 52 устьица. 52 устьица приходится на площадь 0,138

мм

. Х устьиц приходится на площадь 1 кв.мм:

Х = 52 х (1:0,138) = 52 х 7,25 = 373 устьица.

Таким образом, на площадь листа в 1 кв.мм приходится 373 устьица. 7,25 -

постоянный коэффициент для данной оптики.

9.8. Измерение толщины объекта. При измерении толщины пользуются

микрометрическим винтом микроскопа. Сначала наводят на резкость верхнюю

поверхность измеряемого объекта, а затем нижнюю. Отмечают разность в обоих

положениях микровинта по делениям, которые на нем имеются. Эти деления

обычно соответствуют микрометрам. При применении иммерсинных объективов

эта величина равна толщине объекта; при объективах сухих систем ее надо

умножить на 1,5, т.е. на соотношение между показателями преломления стекла и

воздуха.

9.9. Методы нахождения определенных участков препарата.

1. Для того, чтобы вновь быстро найти нужное место на препарате проще всего

его маркировать: не вынимая препарата со столика микроскопа и не выключая

освещения, поставить на покровном стекле точку тушью слева от нужного места, а

затем вынуть препарат и перенести эту точку на нижнюю сторону препарата (на

предметное стекло), так как при работе с иммерсией на верхней стороне

препарата эта точка может быть смыта.

2. При наличии на столике микроскопа препаратоводителя со шкалами, можно

отметить и записать расположение нужного места на препарате по показаниям

вертикальной и горизонтальной шкалы. Этот способ пригоден при повторных

просмотрах препаратов только на этом же микроскопе.

9.10. Рекомендуемая литература

1. Аппельт Г. Введение в методы микроскопического исследования.

М., 1959, 425 с.

2. Wagenführ R. Anatomie des Holzes. Laipsig. 1966, 377 c

10. РЕЦЕПТЫ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ФОТОРАСТВОРОВ

Проявитель Д-76 для пленки Изопанхром [1]

1. Метол (C

x H

).....……….............……....…………... 2

2. Сульфит натрия кристаллический (Na

x 7H

O)….............

200 г

3. Гидрохинон (C

(OH)

).....…........………………………................

5 г

4. Бура (Na

x 10H

O).........................….………………………...

2 г

5. Вода дистиллированная………………………..............................

до 1 л

Время проявления 18-20 мин.

Проявитель N 3 для позитивных пленок [3]

1. Метол ………………………………………..................……………….. 2 г

2. Сульфит натрия кристаллический ……………………........…….... 40 г

3. Гидрохинон ………………...........................………………………….. 6

4. Сода безводная (Na

).......…..................………………………..

26 г

5. Бромистый калий (KBr)............................…………………………

….. 4,5 г

6. Вода дистиллированная.......................………………………….......

до 1 л

Время проявления 2 мин.

Проявитель А-100 (Orvo-100) для пленки Микрат [1]

1. Метол................…………………………………………………………... 1 г

2. Сульфит натрия кристаллический..................……………………….

26 г

3. Гидрохинон............................…………………….……………………...

3 г

4. Сода безводная.........……………..............………………………….... 26

5. Бромистый калий ……...........................…………………………….....

1 г

6. Вода дистиллированная..........................………………………

…......до 1 л

Время проявления 6, 7, 8 мин.

Проявитель А-103 для фотобумаг [3]

1. Метол …………………………………………...............…………………. 3,5 г

2. Сульфит натрия кристаллический ………………………...............…. 90

3. Гидрохинон ……………….........................……………………………....11,5

4. Сода безводная ……………......................…………………………..... 66

5. Бромистый калий ……..............................……………………………….

1,2 г

6. Вода дистиллированная...........................…………………………

…....до 1 л

Проявитель метол-гидрохиноновый для фотопластинок

(для электронно-микроскопических работ)

1. Метол ……………………………….....................………………………….. 2 г

2. Сульфит натрия кристаллический ……………………

…....................... 52 г

3. Гидрохинон ………………...........................………………………………..

8 г

4. Сода безводная ………………..……………………….............................

30 г

5. Бромистый калий ………..........................………………………………....

1 г

6. Вода дистиллированная........................…………………………

…........до 1 л

Время проявления 3 мин.

Закрепитель для пленок и фотобумаг [2]