Презентация - Щербо С.Н. Генодиагностика в современной лаборатории
Подождите немного. Документ загружается.
ПЦР ДИАГНОСТИКА CHLAMYDIA TRACHOMATIS
В качестве мишени для создания праймеров
можно использовать нуклеотидные
последовательноти генов МОМР и 16S рРНК, а
также криптической плазмиды хламидий, причем
каждая из них обладает своими особенностями,
преимуществами и недостатками
Оптимальным представляется комплексный
подход к диагностике хламидиоза: с учетом
чувствительности и специфичности наиболее
целесообразно применять по крайней мере два
метода, например метода прямой
иммунофлуоресценции или ИФА, с ПЦР
(методические рекомендации ЦНИКВИ, 2003 г.)
Первое контрольное исследование методом ПЦР
рекомендовано проводить от 30 до 45 дней после
окончания лечения.
Mycoplasma hominis, Mycoplasma genitalium,
Ureaplasma urealyticum
Mycoplasma hominis часто встречается в соскобах
при бактериальном вагинозе.
14 серотипов U. urealyticum образуют два
биовара T960 (серотипы 2,4,5,7-13) и Parvo
(1,3,6 и 14), которые объединяют в себе штаммы
с одинаковыми признаками:
электрофоретической подвижностью клеточных
белков, размером генома (биовар Parvo 760
т.п.о. и биовар Т960 840-1140 т.п.о.), отличием в
гене 16S рРНК, спектром рестриктазных
фрагментов и рядом других.
Количественное измерение Ureaplasma
urealyticum методами конкурентной и
мультипраймерной ПЦР показало, что среднее
число клеток уреаплазм, приходящихся на одну
эпителиальную клетку цервикального канала
женщин варьируется от 0,05 до 10.
Вирусы папилломы человека.
На основании изучения биопсийных срезов генитальных
опухолей выделяют подгруппы ВПЧ низкой
(6,11,42,43,44), средней (31,33,35,51,52,58) и высокой
(16,18,45,56) степени онкогенного риска. Максимальным
канцерогенным потенциалом обладают 16, 18 и 45 типы.
Этапы инфицирования: первичная инфекция (ИППП);
персистенция вирусного генома в эписомальной форме с
продукцией вирусных частиц; поликлональная
интеграция вирусной ДНК в клеточный геном; индукция
мутаций в клеточной ДНК, вызывающей нестабильность
генома; селекция клона клеток с мутантной ДНК,
содержащей интегрированную вирусную ДНК и активное
размножение данного клона клеток и рост опухоли.
ДНК ВПЧ высокого онкогенного риска (Human
papillomavirus, high risk) типов 16, 18, 31, 33, 35, 45,
56 (ТУ 9398-441-56751480-02, НПФ «ГЕНТЕХ») и
низкого онкогенного риска (Human papillomavirus, low
risk) типов 6, 11, 42, 43, 44 методом ПЦР в соскобах
слизистой урогенитального тракта (ПанАм), (ТУ 9398-
442-56751480-02, НПФ «ГЕНТЕХ»)
Мультипраймерная ПЦР
Принцип метода:
Присутствие в реакционной смеси
нескольких пар праймеров:
- анализ разных генетических
локусов,
- анализ нескольких различных
инфекционных агентов, их видов,
типов.
Мультипраймерный набор для определения
ВПЧ типы 58, 16, 31, 18, 51
М 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19
58
16
31
18
51
МУЛЬТИПРАЙМЕРНЫЕ НАБОРЫ НПФ «ГЕНТЕХ»
www.gentech.com
2 ПАРЫ Хламидия трахоматис, 316 Микоплазма гениталиум, 281
Уреаплазма уреалитикум, 466 Микоплазма гоминис, 374
Трихомонас вагиналис, 320 ВПГ 1 и 2, 220
Гонококк, 591 ЦМВ, 340
Кандида альбиканс, 372 ВПЧ 18, 300
Гарднерелла вагиналис, 820 ВПЧ 16, 538
3 ПАРЫ ВПГ 1 и 2, 220 Хламидия трахоматис, 200
ЦМВ, 340 Микоплазма гоминис, 374
ЭБВ, 610 Уреаплазма уреалитикум, 466
4 ПАРЫ Хламидия трахоматис, 200
Микоплазма гениталиум, 281
Микоплазма гоминис, 374
Уреаплазма уреалитикум, 466
5 ПАР Стоматология Хламидия трахоматис, 200
Микоплазма гениталиум, 281
Микоплазма гоминис, 374
Уреаплазма уреалитикум, 466
Уреаплазма Т 960
Молекулярный анализ генома как информационная
технология.
ОСНОВНЫЕ ЭТАПЫ ПРОВЕДЕНИЯ
1. Выбор нуклеотидной последовательности зонда или
праймеров, предполагаемой специфичности и
чувствительности. Реализуется с помощью человеко-
машинных информационно-справочных систем.
2. Подбор характеристик набора для МАГ как унифици-
рованных элементов конструктора. Множественный НГА и
мультипраймерная ПЦР: группа родственных
микроорганизмов или вирусов (ВПГ,ЭБВ, ЦМВ или ВПЧ),
соотношение между конкурирующими микроорганизмами
(ЛактАм), нозология (неспецифические пневмонии,
оникомикозы), предрасположенность к заболеванию (ВПЧ
в.р.), возможному способу передачи (ИППП) и др.
3. Визуализация получаемых результатов. Реализуется с
помощью человеко-машинных компьютерных и
оптоэлектронных систем.
К л и н и ч е с к и е о б р а з ц ы
+ - 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
старт (-)
финиш (+)
К л и н и ч е с к и е о б р а з ц ы
+ - 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Диагностический набор «ЛактАм»
Из статистической обработки данных по
соотношению содержания Lactobacillus
spp. и G.vaginals с помощью ПЦР и
бактериологического метода следует, что
результаты полученные указанными
методами не имеют значимых различий.
Высокая диагностическая эффективность,
чувствительность и специфичность
мультипраймерной тест-системы
«ЛактАм» позволяют использовать еѐ в
скрининговых исследованиях состояния
микрофлоры генитального тракта у
небеременных женщин репродуктивного
периода.