Презентация - Щербо С.Н. Генодиагностика в современной лаборатории
Подождите немного. Документ загружается.
ПЦР В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ
1992 год - первая публикация Higuchi и
соавторов, в которой использован метод
ПЦР в реальном времени:
Higuchi, R., Dollinger, G., Walsh, P.S.,
Griffith, R., 1992.
Simultaneous amplification and detection of
specific DNA-sequences. Bio-Technology
10(4), 413–417
Применение ПЦР в реальном времени:
* +/- анализ
* Абсолютное количественное определение НК
* Относительное количественное определение
(экспрессия генов – функциональные изменения генома)
* Дискриминация аллелей
(полиморфизм – структурные изменения генома)
Интеркалирующие
красители
SYBR
®
Green I
Forward
Primer
3'
5'
5'
'
'
'
R
Q
Sequence Specific Probes:
Taqman probes
5’3’
5’
3’
5’3’
5’
3’
Excitation
Q
Q
Q
Excitation
Oligo 1: Fluorescein
Oligo 2: LC Red 640
Roche Hi-Probes
Excitation Emission
Transfer
Кинетические кривые ПЦР в реальном времени (real-time PCR)
Кинетическая кривая ПЦР в координатах "Уровень репортерной
флуоресценции — цикл амплификации" имеет сигмоидную форму.
В ней можно выделить три стадии:
Стадию инициации (когда ПЦР-продукты еще не детектируется
флуоресцентной меткой).
Экспоненциальную стадию (в которой наблюдается экспоненциальная
зависимость количества флуоресценции от цикла ПЦР).
Плато (стадию насыщения).
Сравнительный анализ чувствительности
различных методов в диагностике
инфекционных заболеваний
Проведенная недавно в нескольких
зарубежных исследовательских центрах
суммированная оценка чувствительности
различных методов диагностики показала,
что быстрые тесты имеют чувствительность
40-60%, иммуноферментный анализ (ИФА)
- 50-70%, прямая иммунофлуоресенция
(ПИФ) - 55-75%, культуральное
исследование - 60-80%, а ПЦР - 90 - 100% .
Лабораторная диагностика хламидиозов
Методы прямого
выявления возбудителя
• Культуральный метод
• Метод прямой иммуно-
флуоресценции
• ИФА
• Амплификационные
методы
Методы определения
специфических
антител
•Микроиммунофлуо-
ресценция
• ИФА
Диагностика