Песнякевич А.Г. Курс лекций. Основы иммунологии

Подождите немного. Документ загружается.

Иллюстрация 59

ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ (ИФА)

на примере Enzyme linked immunosorbent assay

(ELISA)

Принцип постановки А)

В)

Фотография микромеры, в которой осуществлялся анализ

А)

Антиген

1. Внесение раствора, содержащего ан-

тиген, в ячейки микрокамеры (сорб-

ция антигена).

2. Отмывание от неадсорбированного

антигена.

3. Добавление антител, специфичных к

антигену.

4. Отмывание от не связавшихся с ан-

тигеном антител.

5. Добавление лиганда, способного свя-

зываться с антителами вещества, к

которому ковалентно присоединен

фермент.

6. Отмывание от не связавшегося

с ан-

тителами лиганда.

7. Добавление хромогена – вещества,

изменяющего окраску под действи-

ем входящего в состав лиганда фер-

мента.

8. Измерение интенсивности окраски с

помощью спектрофотометра.

Лиганд

Способная

связываться

с антителом

часть

лиганда

Фермент,

способный

изменять

окраску

хромогена

Хромоген

Окрашенное

вещество

Поверхность ячеейки

микрокамеры

Антитело

Разведения суспензии антител

Контроли

П Н

В каждом ряду

конкретный,

анализируемый

на присутствие

антигена образец

В)

200

201

Иллюстрация 60

ИММУНОБЛОТИНГ

Гель после

эле

кт

рофореза

Образцы, содержа-

ие антигены

+++ +++

Разделенные

петиды

Фильтр

Перенос пептидов на

нитроцеллюлозный

фильтр

Перенос фильтра в раствор, со-

держащий антитела, комплмен-

тарные искомому антигену.

Отмывание от несвязавшихся

антител.

Внесение меченого

лиганда,

способного связываться только

с антителами.

Отмывание от несвязавшегося

лиганда

Перенос фильтра на

фотопластинку и экс-

понирование (аутора-

диография)

Проявление фото-

лас

тинки

Выявление по-

лос, соответст-

вующих искомо-

му

антигену

При использовании флуоресцентно-меченого лиганда визуали-

зация искомых полос возможна по свечению при облучении

ильт

а светом оп

еделенной длины волны

При использовании лиганда, несущего катализирующий обра-

зование окрашенного вещества фермент, фильтр обрабатыва-

ется

раствором хромогена. После отмывания от раствора хро-

могена места локализации искомого антигена остаются окра-

шенными

Гель