Песнякевич А.Г. Курс лекций. Основы иммунологии
Подождите немного. Документ загружается.
Ил
в хромосоме 22
)
λ
генов – 6; С
λ
генов – 6, пр х ассоции-
рован со своим J
λ
геном
(complementarity determing
тав V-сегмента, одна –
по специфичности
в λ -цепей, как минимум: 200 x 6 = 1200
) аминокислотные остатки с 1 по 95 кодируются V-сегментом, с 96 по 106 –
J-сегментом, со 107 по 212 – С-геном
люстрация 38
ОБРАЗОВАНИЕ ЛЕГКИХ ЦЕПЕЙ ЛЯМБДА
ДНК заро-
дышевой
линии
Объе
д
инение сегментов V и J
Д
НК В-клетки
Т
р
анск
р
ип
ц
ия
Пе скрипт рвичный тран
Сплайсинг
З
р
елая мРНК
ц
епи λ
Трансляция
Легкая
ц
епь
λ
Порядковые но-
мера аминокис-
лотных остатков
1 расположены) гены легких цепей типа лямбда
2 V
λ
генов около200; J ичем каждый из ни
) две определяющих комплементарность области3
region, сокр. CDR) вариабельного домена входят в сос
J-сегмента, отсюда возможное количество различающихся
в отношении эпитопов антигено
4
180
Иллюстрация 39
ОБРАЗОВАНИЕ ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ ЭКЗОНОВ, КОДИРУЮЩИХ
ВАР В
) – у мышей (распо
) – у человека (расположены )
ИАБЕЛЬНЫЙ ДОМЕН ТЯЖЕЛЫХ ЦЕПЕЙ ИММУНОГЛОБУЛИНО
Иллюстрация 40
ГЕНЫ КОНСТАНТНЫХ ДОМЕНОВ ТЯЖЕЛЫХ ЦЕПЕЙ
ИММУНОГЛОБУЛИНОВ
(А л е) ожены в 12-й хромосом
(В в 14-й хромосоме
5’
5’
3’
3’
черными точками обозначены сигналы переключения
ДНК заро-
дышевой
линии
Экзоны константной
области
Объе
д
инение сегментов V
,
D и J
ДНК
В-клетки
Функциональный экзон
181
Иллюстрация 41
СИНТЕЗ ТЯЖЕЛЫХ ЦЕПЕЙ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ
ДНК
В-клетки
Транскрипция
Первичный
транскрипт
Сплайсинг
Зрелая
мРНК
Т
р
ансля
ц
ия Т
р
ансля
ц
ия
Ц
епь
µ
Ц
епь δ
182
Иллюстрация 42
ОБРА МЫ
ИММУНОГЛОБУЛИНОВ
аденилиров ия
М трансмембранную часть
Экзон
ЗОВАНИЕ СЕКРЕТИРУЕМОЙ ИЛИ МЕМБРАННОЙ ФОР
ДНК
В-клетки
Первичный
транскрипт
*
Процессированн мРНК ая
стоп-сигналы с сайтами поли
1 и М2 – два экзона, кодирующих
Белок
Секретируемая форма Мемранная форма
ан
М1 удаляется при сплайсинге
183
Иллюстрация 43
РАСПОЛОЖ АРНОСТЬ
ОБЛАСТЕЙ (CDRs) В ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЯХ ВАРИАБЕЛЬНЫХ
ДОМЕНОВ
ИММУНОГЛОБУЛИНОВ
ЕНИЕ ОПРЕДЕЛЯЮЩИХ КОМПЛЕМЕНТ
Легкая цепь Тяжелая цепь
Вариабельность
0 25 50 75 100
Номер аминокислотного
остатка
0 25 50 75 100
Номер аминокислотного
остатка
Легкая
цепь
Тяжелая
цепь
Эпитоп
184
Ил
ПРИЕМЫ УЛУЧШ ЬНЫХ АНТИТЕЛ
Смешивание
(например, Shigella при получении антисыворотки для E.coli)
Осаждение внесенных центрифугированием
Смешивание сыворотки с суспензией клеток другого близкородственного микроор-
ганизма (например, Salmonella)
Осаждение ованием
И так далее, но не более 3–4 раз, поскольку с каждым этапом происходит уменьше-
2. Выделение антит м аффинной
хроматографии
люстрация 44
ЕНИЯ КАЧЕСТВА ПОЛИКЛОНАЛ
1. Истощение сывороток
(
Применяется для получения антисывороток, используемых при выявлении ко
ных микроорганизмов)
сыворотки с суспензией клеток близкородственного микроорганизма
нкрет-
микроорганизмов
внесенных микроорганизмов центрифугир
ние объема сыворотки
ел нужной специфичности посредство
Нанесение суспензии поликло-
нальных антител на колонку,
заполненную частицами с сор-
бированным антигеном. Про-
мывание
для удаления несвя-
нтител завшихся а
Антитела нужной спе-
цифичности остаются
на колонке, связываясь
с сорбированным
ан-
тигеном
1
Пропускание ч
колонку раствора
котором происхо
дит распад
ком-
плексов антиген–
антитело
ерез
, в
-
Удаление антител
ненужной специфич-
ности
Суспензия антител
нужной специфич-
ности
2
185
Ил
СХЕМ ТЕЛ
люстрация 45
А ПОЛУЧЕНИЯ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИ
Антиген
Антигенные
детерминанты
Селезенка
В-лимфоциты из се-
лезенки иммунизи-
рованного животно-
го
ГАТ-чувствительные
миеломные клетки
Слияние
Высев на среду, содержащую
гипоксантин, аминоптерин и
тимидин (ГАТ-среда)
Проверка полученных клонов на
продукцию искомых антител и
последующая расчистка клонов,
продуцирующих таковые
(прово-
дится
несколько раз)
Анализ гибридом на продукцию
антител только одного изотипа и
одной специфичности
Размножение отобранного
клона и получение антител
либо в культуре либо путем введения в
клеток перитонеальную полость
Сыворотка,
содержащая ан ела к
данному ан ну
тит
тиге
186
Иллюстрация 46
КОЛИЧЕСТВЕН Н–АНТИТЕЛО
НЫЕ ОТНОШЕНИЯ АНТИГЕ
ПРИ АГГЛЮТИНАЦИИ И ПРЕЦИПИТАЦИИ
Антиген 4 2 1 16
Антитело 8 4
Соотношение 1 : 2 1,5 : 1 4 : 1
Избыток антигена Оптимальное Избыток антител
соотношение
Небольшие агрегаты Большие агрегаты Небольшие агрегаты
Минимум осадка Максимум осадка Минимум осадка
Антиген 4- валентный, т. е. способен реагировать с 4-мя антителами
Антитело имеет 2 антигенсвязывающих уч тка
Не разведен
1 : 41 : 2 1 : 8 1 : 16 1 : 32
Одинаковое количество во всех пробирках
Изб
антигена
ыток Оптимальное
соотношение
Избыток
антитела
Антиген
Антитело
ас
8
187
Иллюстрация 47
ДВОЙНАЯ ИММУНОДИФФУЗИЯ
66
AgAb
А. В исследуемом образце присутствует один антиген
В. В ис на, способных
следуемом образце присутствует два антиге
ителамивзаимодействовать с данными ант
C. Использована одна антисыворотка и два образца, анализи-
руемых на присутствие данного антигена
Ab Ag
В лунке антигены
1 и 3
В лунке антиген 1
В лунке антитела,
специфичные
к антигену 1
В лунке антиген 1
В лунке антигены
2 и 4
В лунке смесь антител,
специфичных к
антигенам 1, 2 и 4
соответственно
В лунке антиген 1
В лунке антигены 1 и 2
1. В отдельные твор, содер спензию антител.
2. Оставля бесп их компонентов.
3. Через положенное время фиксируют образование осадка в геле между лунками.
При необходимости гель отмывают от не вошедших в комплексы белков и
окрашивают красителем, щимся с белками (наприм
В лунке смесь антител,
ифичных к антигенам 1спец и 2
соответственно
ер, Кумасси синим) связываю
жащий антиген и су
ечивающих диффузию обо
лунки вносят рас
ют систему в условиях, о
188
Иллюстрация 48
ПР Я
ОСТАЯ РАДИАЛЬНАЯ ИММУНОДИФФУЗИ
Гель, соде
р
жащий антитела
Кольца преципитата
(
кольца)
2
Концентрация антигена
С
Х
Е
М
А
К
А
Л
И
Б
Р
О
В
О
Ч
Н
Ы
Й
Г
Р
А
Ф
И
К
П
Р
Е
Ц
И
П
И
Т
А
Т
В
Г
Е
Л
Е
Диаметр
189