Песнякевич А.Г. Курс лекций. Основы иммунологии

Подождите немного. Документ загружается.

Ил

A) – обычный, B) – встречный, C) – ракетный

люстрация 49

ИММУНОЭЛЕКТРОФОРЕЗ

Гель рН 8,0

1. Разделение антигенов (о рез) бычный фо

2. Изготовление желобка и внесение антител

Желобок

3. Дифф

уз и преципитацияия

Гель

со

жа

ий антитела

Линии

на схемах

в гелях

преципитата:

190

Иллюстрация 50

РЕАКЦИИ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ

Реакция прямой

гемагглютинации (РГА)

Антигены

ит

итов

Реакция непрямой

гемагглютинации (РНГА)

Любой антиген, который

можно адсорбировать на

эритроцитах

Разведения анализируемых сывороток Контроли

2 4 8 16 32 64 128 256 512 1024 П Н

Антитела

нам э

к антиге-

ит

итов

Антитела

рованно

к адсорби-

му антигену

Неполные антитела

Антииммуноглобулин

Эритроцит

Агглютинация эритроцитов

за счет антииммуноглобулина

Реакция Кумбса

191

Иллюстрация 51

ИНГИБИРОВАНИЕ ГЕМАГГЛЮТИНАЦИИ

гормонов А. Определение

192

Антитела, специфичные

по отношению к гормону

Эритроциты с

сорбированным на

их поверхности

гормоном

Агглютинация

Молекулы

гормона

Отсутствие

В. Тест на выявление антител против

(грипп, эпидемиче

ит

оциты

Гема

вирус

гглютинирующий

Агглютинация

Антитела, специфичные к

ви

ру

Отсутствие агглютинации

гемагглютинирующих вирусов

ский паротит)

агглютинаци

Иллюстрация 52

РЕАКЦИЯ СВЯЗЫВАНИЯ КОМПЛЕМЕНТА (РСК)

истем

е рез объединен и II

оложи т

С а I

Система II

Возможны ультаты после ия систем I

П тельный результа (в сыворотке присутствуют антитела к данному ан-

тигену)

Отрицательный результат

Антитела

против

антигена

Нелизированнные

эритроциты

оседают на

дно, жидкость бесцветна

Сыворотка,

анализируемая на

присутствие

антител к данному

антиген

Антиген (например, Tre-

ponema pallidum)

Комплемент

Эритроциты

барана

Кроличьи антитела

против бараньих

ит

оцитов

(в сыворотке отсутствуют антитела к данному

антигену)

Эритроциты лизируются, жид-

кость окрашивается в красный

цвет («лаковая кровь»)

193

Иллюстрация 53

(применяется для типирования каней на гистосовместимость)

ЕАКЦИЯ ЦИТОТОКСИЧНОСТИ

Отрицательный результат теста – антитела

т. е. ткани совместимы

отсутствуют,

Лейкоцит

Краситель

трипановый

ий син

Комплемент

Краситель

не проникает

в клетку

Положительный результат теста – имеются а е.

ткани

несовместимы

нтитела, т.

Комплемент

мембрану

делает

для красителя проницаемой

Антитело

Трипановый синий

оникает в клетки

194

ллюстрация 54

МЕТОД ЛОКАЛЬНОГО ГЕМОЛИЗА (МЕТОД «БЛЯШЕК»)

Увеличенное фот

бражение од

ографическое изо-

ной бляшки

Клетки из селез

иммунизированного

конкретным анти-

геном животного

енки

Смесь клеток вн в

таком количестве, чтобы

образовался равномерно

окрашенный в красный цвет слой

осится в гель

Лизис эритроцитов, рас

ных вокруг клетки, продуцирую-

ще нализируемому

ену

Отсутствие лизиса в ,

продуцирующей антитела иной

специфичности

положен-

й антитела к а

антиг

округ клетки

В-лимфоцит,

продуцирующий

антитела нужной

специфичности

Инкубирование, нанесение раствора

комплемента на пове

хность геля

Эритроциты с

сорбированным на

их поверхности

этим же антигеном

195

Иллюстрация 55

ВАРИАНТЫ БЛЯШЕК»)

МЕТОДА ЛОКАЛЬНОГО ГЕМОЛИЗА (МЕТОДА «

Непрямой метод ( о одуцирующих

иммуноглобулин конкретного класса

исп льзуется для выявления клеток, пр

)

Комплемент

В-л

имму

по от

имфо

ногло

ношен

цит, продуцирующий

булины, специфичные

ию к конкретному

нтиген

Эритроцит с сорбиро-

ванным на поверхно-

сти этим же антигеном

Антите

цифичные по

отношению

ла, спе-

му

типу Н-цепей

конкретно

Лизированный

эритроцит

В-лимфоцит,

цирующий Iпроду gM,

специф

к ко

ичные по отношению

нкретному антигену

Продукция IgM

Эритроцит, на по-

верхности которого

сорбирован этот же

антиген

Комплемент

Прямой метод (используется

продуцирующих IgM против

для выявления клеток,

конкретного антигена)

Способный

к продукции

иммуноглобулина

В-лим

ит

Комплемент

Обратный метод (используется д ыявления клеток,

спосо овать и ) бных продуцир

ля

мм

уноглобулины

Сорбированные заранее на эритроцитах

антитела, специфичные по отношению к

антигенным детерминантам, общим для

всех имм

ноглоб

линов

196

Иллюстрация 56

ИММУНОФЛЮОРЕСЦЕНЦИЯ

НЕПРЯМАЯ

НЕПРЯМАЯ С

ПРИМЕНЕНИЕМ

ПЛЕМЕНТА

ПРЯМАЯ

КОМ

Флюоресцентно-

меченое

антитело

Срез ткани, ана-

лизируемой на

наличие искомого

антигена

Отмыв

аботка суспен х

антител, комплементарных

С3-белку из системы

комплемента

ание.

Обр зией мечены

Отмывание,

микроскопирование

Отмывание.

мечеными ан-

телами против

ел выбранного ви-

Обработка

ти

антит

да животных

Отмывание.

Обработка раствором, со-

держащим белки системы

комплемента. Комплемент,

активируясь по -

скому пути, обр -

плексы в местах прикрепле-

ния антител

классиче

азует ком

Отмывание, мик

рование

роскопи-

Отмывание, микроскопиро-

вание

Немече ело из организма животного

конк да ретного ви

ное антит

197

Иллюстрация 57

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ Ф ЕЧЕНЫХ АНТИТЕЛ

ДЛЯ СОРТИРОВКИ КЛЕТОК С ПОМОЩЬЮ FACS

(FLUORESCENCE ACTIVATED

ЛЮОРЕСЦЕНТНО-М

CELL SORTER)

Анализируемая

смесь клеток

Буферный

раствор

Лазер

Вибрирующая

камера

Преломляющие

свет призмы

Регистратор

красной

флюоресценции

Регистратор зеленой

флюоресценции

Регистратор лазер-

ного пучка (позво-

ляет определить

размеры клеток)

Сепаратор, позволяю-

щий разделить клетки в

зави

Регистратор

отраженного

гранулярными

клетками

лазерного света

симости от их

актеристик хар

Емкости для клеток с

конкретными харак-

теристиками

Удаление клеток, не соот-

ветствующих характери-

стикам

198

Иллюстрация 58

РАДИОИММУНОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ (РИА)

A) – Radioallergosorbent test (RAST)

B) - Radioimmunosorbent test (RIST)

Твердая фаза

)

(целлюлозный диск

1.Сорбировать антиген (аллерген)

на твердой фазе (например, на

Антиген

целлюлозном диске)

2. Блокировать диск в отношении

неспецифического связывания

антител

3. Добавить сыворотку, проверяе-

мую на присутствие IgE, компле-

ментарного данному антигену

IgE

4. Отмыть диск от несвязавшихся

антител

5. Добавить лиганд (антиIgE-

антитела, меченые радиоактив-

ным изотопом)

6.Отмыть диск от несвязавшегося

лиганда

Мечены

7. Измерить радиоактивность

дис-

ка

антиIgE

Твердая фаза

Меченый IgE в коли-

честве, соответствую-

щем 80 % максмаль-

ного насыщения твер-

дой

фазы

АнтиIgE

Немеченый IgE,

присутствующий

в тестируемой

сыворотке

Количество

импуль

минуту

сов

Количество

минут

импуль

сов

Количество меченого IgE

80%

Калибровочная кривая, построенная с ова-использ

нием известных концентраций меченогоIgE

Количество IgE в тес

тируемой сыворотк

199