Оберемок В.В. Методические рекомендации к применению ПЦР-метода
Подождите немного. Документ загружается.
лигаза – фермент, участвующий в процессе репликации;
сшивает между собой участки ДНК, используя энергию
гидролиза АТФ
лизирующий раствор – раствор, используемый в этапе
выделения ДНК, для разрыва мембран в клетках
(цитоплазматической, ядерной и т. д.); при выделении ДНК
используется, например, раствор гуанидин тиоцианата
М
минеральное масло – масло, полученное химическим путем
(например, из нефти); не содержит молекул ДНК
маркер молекулярных весов ДНК-фрагментов – фрагменты
ДНК определенной длины
модификация – видоизменение
Мюллис Кэри – американский ученый, в 1993 году за
изобретение ПЦР был удостоен Нобелевской премии в области
химии
Н
нуклеотидтрифосфаты – элементарные строительные
единицы ДНК (например, тимидинтрифосфат), используемые
полимеразой в репликации
О
отжиг праймера – комплементарное образование
водородных связей праймера с определенным участком ДНК
отмывочный раствор – 75% раствор этанола, используемый
на стадии выделения ДНК для отмывки осадка, содержащего
ДНК, от других веществ
П
палиндромы – участки одноцепочечной ДНК, содержащие
одинаковую последовательность как от 5’ к 3’ концу, так и от
3’ к 5’ концу (например, 5’ATGCAAGAGAACGTA3’)
полимераза – фермент, участвующий в репликации,
синтезирует комплементарную копию одноцепочечной
молекулы ДНК
31
праймер – олигонуклеотид (10 – 30 п. н.), который,
отжигаясь на определенном участке, помогает ДНК-полимеразе
начать синтез комплементарной копии одноцепочечной
молекулы ДНК
ПЦР – полимеразная цепная реакция, в которой количество
двухцепочечного фрагмента (фрагментов) определенной длины
увеличивается по математической формуле: 2(2
n
-1
- n ) = F , где n-
количество циклов ПЦР, а F – количество фрагментов
Р
радиационное излучение - включает α (атомные ядра гелия)
и β частицы (быстрые электроны) и γ-лучи (длина волны около
0,01 Å), обладающие высокой энергией и высокой проникающей
способностью
рентгеновские лучи – вид электромагнитного излучения с
длиной волны 0,05–20 Å; обладают высокой энергией и высокой
проникающей способностью
репликация – процесс удвоения ДНК
ресуспендирование – переход осадка раствора во
взвешенное состояние
С
сайт нуклеотидный – участок ДНК с определенной
нуклеотидной последовательностью
секвенирование – определение нуклеотидной
последовательности ДНК (РНК)
сорбент – материал, обладающий сродством к
определенным химическим веществам; при выделении ДНК,
например, используются стеклянные бусы
стерилизация – обеззараживание, обеспложивание,
уничтожение микроорганизмов в разных объектах с помощью
физических и химических факторов
сульфат магния – MgSO
4
;
ионы магния необходимы для
работы ДНК-полимеразы
супернатант – надосадочная жидкость
Т
32
Т
aq
-полимераза – полимераза, выделенная из бактерий
Thermis aquaticus; устойчива к высоким температурам
теломеры – концевые участки хромосом
термостат – электрический прибор, устанавливающий и
фиксирующий температуру
топоизомераза – фермент, участвующий в процессе
репликации ДНК; раскручивает спирализованную цепь ДНК
трис-боратный буфер – буфер, содержащий борную,
кислоту, ЭДТА (этилендиаминтетрауксусная кислота), трис-
(оксиметил) - аминометан и бромистый этидий
У
ультрафиолетовые лучи – электромагнитное излучение с
длиной волны от 20 до 3750 Å); обладают высокой энергией
Ф
флуоресценция – свечение вещества при освещении его
светом
фрагмент Оказаки – см. праймер
Х
хромосома – компактное спирализованное состояние
комплекса ДНК и белков-гистонов
Э
электрофорез – процесс движения в электрическом поле
катионов к катоду, а анионов к аноду
элюция – экстракция, вымывание
эпителий – покровная ткань
Список рекомендуемой и цитируемой литературы
33
1. Кокаева З.Г., Коновалов Ф.А., Кузнецова О.И., Гостимский
С.А. Использование ДНК-маркеров в исследовании
полиморфизма геномов культурных растений. – М: Макс Пресс,
2006. – 60 с.
2. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Молекулярное
клонирование. – М.: Мир. – 1984.
3. Сулимова Г.Е., Удина И.Г., Зинченко В.В. Анализ
полиморфизма ДНК с использованием метода полимеразной
цепной реакции. – М: Макс Пресс, 2006. – 80 с.
4. Mullis K.B., Faloona F.A. Specific synthesis of DNA in vitro via a
polymerase-catalyzed chain reaction // Methods Enzymol. – 1987 –
V. 155. – P. 335–350.
5. Sambrook J., Fritisch E.F., Maniatis T. Molecular Cloning:
Laboratory Manual. – New York: Cold Spring Harbour Univ. Press.
– 1989.
Адреса рекомендуемых веб-сайтов
1. www.molbiol.ru
2. http://en.wikipedia.org/wiki/Ethidium
3. http://www.lytech.ru
4. http://www.pcr-rus.narod.ru
5. http://www.karymullis.com
6. http://almaz.com/nobel/chemistry/1993a.html
7. http://www.pcr.ru/bibliogr/how_pcr/how_pcr.htm
Автор выражает благодарность коллегам Кокаевой Зареме
Григорьевне и Компанийцеву Алексею Алексеевичу, которые
оказали содействие в составлении методического пособия.
По вопросам о ПЦР-методе можно обращаться на e-mail
автора: genepcr @ mail . ru
34
Методические рекомендации к применению ПЦР-метода
для студентов 5 курса дневной формы обучения
специальности 8. 070402
«биология»
образовательно-квалификационного уровня «магистр»
профессионального направления подготовки
0704 «биология»
и для студентов 3 курса дневной формы обучения
специальности 6.070300
«биохимия»
образовательно-квалификационного уровня «бакалавр»
профессионального направления подготовки
0703 «химия»
Составитель: Оберемок Владимир Владимирович
Редактор: Н. А. Василенко
Подписано к печати 04.12.06 Формат 60х84/16. Бумага тип. ОП
Объем – 1.5625 п. л. Заказ № Тираж – 50 экз. Бесплатно
95007, Симферополь, пр. Академика Вернадского, 4,
Таврический национальный университет
им. В.И. Вернадского
35