Диссертация на соискание ученой степени кандидата
биологических наук. Специальность: 14.03.09 - клиническая
иммунология, аллергология. Институт биоорганической химии им.
академиков М.М. Шемякина. Москва. 2015. — 135 с. Научный
руководитель: кандидат биологических наук Коваленко Елена Ивановна.
Цель исследования – изучение возрастных
особенностей внутриклеточного уровня HSP70 и динамики
стресс-индуцированных изменений содержания HSP70, а также анализ
взаимосвязи этих изменений с продукцией АФК в нейтрофилах человека.
Содержание.
Список сокращений.
Введение. Обзор литературы.
Нейтрофилы, их характеристика.
Нейтрофильные гранулы.
Поверхностные маркеры нейтрофилов.
Функции нейтрофилов и их роль в системе иммунитета.
Фагоцитоз.
Дегрануляция.
Нейтрофильные внеклеточные ловушки.
Активные формы кислорода в нейтрофилах.
Пути образования и метаболиты АФК в нейтрофилах.
Роль нейтрофилов в патологических процессах.
Регуляция активности нейтрофилов.
Белки теплового шока.
Семейство белков теплового шока 70 кДа.
Внутриклеточные функции HSP.
Внеклеточные функции HSP.
HSP70 в нейтрофилах.
HSP70 и окислительный стресс.
Механизмы секреции HSP.
Причины и иммунологические аспекты процесса старения.
Основные теории развития старения.
Ассоциированные с возрастом изменения в нейтрофилах.
HSP70 при старении. Материалы и методы.
Реагенты.
Выделение нейтрофилов из периферической крови и подготовка образцов.
Проточная цитофлуориметрия.
Оценка жизнеспособности нейтрофилов.
Цитометрический анализ внутриклеточного уровня HSP.
Цитометрический анализ поверхностной экспрессии HSP70 и маркеров дегрануляции.
Цитометрическое измерение внутриклеточной.
продукции АФК.
Анализ внутриклеточного содержания HSP70 методом Вестерн- блоттинга.
Измерение продукции АФК с помощью люминол-зависимой хемилюминесценции.
Статистический анализ данных.
Измерение транскрипционной активности генов HSP70 с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (qRT-PCR).
Проведение qRT-PCR.
Статистическая обработка данных qRT-PCR.
Оценка внеклеточного уровня HSP70 с помощью ИФА. Результаты.
Внутриклеточное содержание HSP70 в интактных нейтрофилах в разных возрастных группах.
Динамика изменения уровня HSP70 в нейтрофилах под действием теплового шока.
Транскрипционная активность генов белков HSP70 в нейтрофилах под действием теплового шока.
Анализ динамики внутриклеточного уровня HSP70 в нейтрофилах под действием теплового шока.
Анализ экспрессии HSP70 в мононуклеарных клетках человека.
Анализ двухфазной динамики внутриклеточного уровня HSP70 в нейтрофилах под действием теплового шока.
Воздействие гипертермии на уровень HSP70 в нейтрофилах в разных возрастных группах.
Высвобождение HSP70 из нейтрофилов во внеклеточное пространство.
Анализ механизмов, регулирующих высвобождение HSP70 во внеклеточное пространство из нейтрофилов.
Спонтанная и индуцированная продукция АФК в разных возрастных группах.
Анализ взаимосвязи между продукцией АФК и содержанием HSP70 в нейтрофилах в разных возрастных группах. Обсуждение.
Выводы.
Список литературы.
Список сокращений.
Введение. Обзор литературы.
Нейтрофилы, их характеристика.
Нейтрофильные гранулы.
Поверхностные маркеры нейтрофилов.
Функции нейтрофилов и их роль в системе иммунитета.
Фагоцитоз.
Дегрануляция.
Нейтрофильные внеклеточные ловушки.
Активные формы кислорода в нейтрофилах.
Пути образования и метаболиты АФК в нейтрофилах.
Роль нейтрофилов в патологических процессах.
Регуляция активности нейтрофилов.
Белки теплового шока.
Семейство белков теплового шока 70 кДа.
Внутриклеточные функции HSP.
Внеклеточные функции HSP.
HSP70 в нейтрофилах.
HSP70 и окислительный стресс.
Механизмы секреции HSP.
Причины и иммунологические аспекты процесса старения.
Основные теории развития старения.
Ассоциированные с возрастом изменения в нейтрофилах.
HSP70 при старении. Материалы и методы.
Реагенты.
Выделение нейтрофилов из периферической крови и подготовка образцов.
Проточная цитофлуориметрия.
Оценка жизнеспособности нейтрофилов.
Цитометрический анализ внутриклеточного уровня HSP.
Цитометрический анализ поверхностной экспрессии HSP70 и маркеров дегрануляции.
Цитометрическое измерение внутриклеточной.
продукции АФК.
Анализ внутриклеточного содержания HSP70 методом Вестерн- блоттинга.
Измерение продукции АФК с помощью люминол-зависимой хемилюминесценции.
Статистический анализ данных.
Измерение транскрипционной активности генов HSP70 с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (qRT-PCR).
Проведение qRT-PCR.
Статистическая обработка данных qRT-PCR.
Оценка внеклеточного уровня HSP70 с помощью ИФА. Результаты.
Внутриклеточное содержание HSP70 в интактных нейтрофилах в разных возрастных группах.
Динамика изменения уровня HSP70 в нейтрофилах под действием теплового шока.
Транскрипционная активность генов белков HSP70 в нейтрофилах под действием теплового шока.
Анализ динамики внутриклеточного уровня HSP70 в нейтрофилах под действием теплового шока.
Анализ экспрессии HSP70 в мононуклеарных клетках человека.
Анализ двухфазной динамики внутриклеточного уровня HSP70 в нейтрофилах под действием теплового шока.
Воздействие гипертермии на уровень HSP70 в нейтрофилах в разных возрастных группах.
Высвобождение HSP70 из нейтрофилов во внеклеточное пространство.
Анализ механизмов, регулирующих высвобождение HSP70 во внеклеточное пространство из нейтрофилов.
Спонтанная и индуцированная продукция АФК в разных возрастных группах.
Анализ взаимосвязи между продукцией АФК и содержанием HSP70 в нейтрофилах в разных возрастных группах. Обсуждение.
Выводы.
Список литературы.