ВЕСТНИК НОВЫХ МЕДИЦИНСКИХ ТЕХНОЛОГИЙ – 2007 – Т. ХIV, № 4 – С.16
Таблица 1
Экспериментальные группы мышей и параметры воздейст-
вующих магнитных полей
Группа мышей Параметры воздействующих магнитных полей
1 Контроль (интактные мыши)
2 ИБМП по компьютерной программе ust22.bas
с длительностью импульса t
ИМП
=
0,5 с и скважностью 3.
Величина магнитной индукции B
ИБМП
= 4 мТл.
3 ВМП с частотой f
ВР.П
= 6 Гц, вращение вправо,
величина магнитной индукции B
ВР.П
= 4 мТл,
в сочетании с ПеМП с частотой f
ВЕРТ
= 8 Гц,
величина магнитной индукции B
ВЕРТ
= 4 мТл.
4 ПеМП в режиме f
ВЕРТ
= 8 Гц, B
ВЕРТ
= 4 мТл
5 ВМП в режиме f
ВР.П
= 6 Гц, вращение вправо,
B
ВР.П
= 0,4 мТл, в сочетании с ПеМП в режиме
f
ВЕРТ
= 8 Гц, B
ВЕРТ
= 0,4 мТл.
Примечание: ВМП – вращающееся магнитное поле; ПеМП – переменное
магнитное поле; ИБМП – импульсное бегущее магнитное поле; t
ИМП
–
время длительности одного импульса; f
ВР.П
– частота вращающегося
магнитного поля; B
ВР.П
– магнитная индукция вращающегося магнитного
поля; f
ВЕРТ
– частота изменения вертикальной составляющей магнитного
поля; B
ВЕРТ
– магнитная индукция вертикальной составляющей магнитного
поля; B
ИБМП
– магнитная индукция импульсного бегущего магнитного поля
По окончании полной экспозиции у мышей эксперимен-
тальных групп, и одновременно у мышей контрольной группы
брали кровь для анализа содержания гемоглобина и креатинина.
Определение содержания креатинина в крови лаборатор-
ных животных проводилось при помощи набора реактивов
CREAT 100, выпускаемых фирмой PLIVA – Lachema a.s. Принцип
метода состоит в следующем. В щелочной среде пикриновая
кислота взаимодействует
с креатинином с образованием оранже-
во-красной окраски, которую измеряют фотометрически. Опре-
деление в сыворотке крови проводят после депротеинизирования.
Реактивы: – стандарт креатинина 442, 5 мкмоль/л; альбумин 0,16
г/флакон; депротеинизирующий раствор трихлоруксусная кисло-
та 1,22 моль/л; пикриновая кислота раствор 0,004 моль/л; натрий
гидроокись 0,19 моль/л. Расчет содержания креатинина в крови
каждой лабораторной мыши
производили по формуле, указанной
в инструкции по применению набора реактивов.
53125,5)/(
1
⋅=⋅=
оп
ст
оп
A
A
A
KлмкмольKr
(1)
A
ОП
– экстинкция опытной пробы; A
СТ
– экстинкция стан-
дартного раствора; K
1
– коэффициент разведения крови (K
1
=
177). Экстинкция стандартного раствора A
СТ
оказалась равной 32.
Определение содержания гемоглобина в крови лабора-
торных животных проводилось с помощью стандартного унифи-
цированного гемоглобинцианидного метода (1974) [10], а имен-
но: гемоглобин окисляют в метгемоглобин (гемиглобин) железо-
синеродистым калием (красная кровяная соль); образующийся с
ацетонциангидрином окрашенный цианметгемоглобин (гемигло-
бинцианид) определяют колориметрически. Используются реак-
тивы: трансформирующий раствор: ацетонциангидрин – 0,5 мг;
калий железосинеродистый – 0,2
г; натрия гидрокарбонат – 1 г;
дистиллированная вода – до 1 л. Раствор желтого цвета, прозрач-
ный; калибровочный раствор гемиглобинцианида – стандартный
раствор фирмы «Имуна» с концентрацией гемиглобинцианида
61,23 мг/100 мл, что соответствует концентрации гемоглобина в
крови 15,4 г/100 мл при разведении ее в 251 раз. Специальное
оборудование – фотоэлектроколориметр. Ход определения сле-
дующий. В пробирку с 5 мл трансформирующего
раствора до-
бавляют 0,02 мл крови (разведение в 251 раз). Содержимое про-
бирки тщательно перемешивают и оставляют стоять на 10 минут.
Измеряют на фотоэлектроколориметре при длине волны 500–560
нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя в 1 см
против холостой пробы (трансформирующий раствор). Измеряют
при тех же условиях стандартный раствор. Расчет содержания
гемоглобина в крови
каждой лабораторной мыши производили
по формуле:
оп
ст
оп
EKC
E
E
гHb ⋅=⋅⋅⋅= 0246,1001,0%)(
(2)
где E
ОП
– экстинкция опытной пробы; E
СТ
– экстинкция
стандартного раствора; С – концентрация гемиглобинцианида в
стандартном растворе, мг%; C = 61,23; К – коэффициент разведе-
ния крови (К=251); 0,001 – коэффициент для пересчета мг/100 мл
в г/100 мл. Экстинкция стандартного раствора оказалась равной
E
СТ
= 15. Экстинкцию опытной пробы E
ОП
определяли при помо-
щи фотоэлектроколориметра.
Методы математической обработки результатов экспе-
римента.
Для статистической проверки гипотезы о неравенстве
математических ожиданий содержания гемоглобина и креатини-
на в крови лабораторных мышей в экспериментальных и кон-
трольных группах использовался t-критерий Стьюдента. Стати-
стика критерия вычислялась по формуле
,
yx
эмп
yx
t
−
−
=
σ
(3)
где
yx,
– средние арифметические в экспериментальной и
контрольной группах;
σ
x–y
– стандартная ошибка разности сред-
них арифметических. Учитывая равенство величин первой и
второй выборки (n
1
=n
2
=15) стандартная ошибка разности средних
арифметических
σ
x–y
рассчитывалась по формуле:
) ()
()
,
1
22
nn
yyxx
ii
yx
⋅−
−+−
=
∑∑
−
σ
(4)
где n – величина выборки. Подсчет числа степеней свободы
k осуществлялся по формуле:
k=n
1
+ n
2
–2, (5)
Далее сравнивалось полученное эмпирическое значение t
эмп
с теоретическим значением t-распределения Стьюдента. Если t
эмп
< t
крит
, то нулевая гипотеза H
0
, состоящая в том, что разница
между генеральными параметрами сравниваемых групп равна
нулю, принималась. В этом случае считалось, что различия,
наблюдаемые между средними величинами опыта и контроля,
носят не систематический, а случайный характер. В противном
случае, если t
эмп
> t
крит
, нулевая гипотеза H
0
отвергалась, и счита-
лось, что различия, наблюдаемые между средними величинами
опыта и контроля, достоверны. Таким образом, выявлялся факт
изменчивости изучаемого явления при воздействии внешнего
фактора – магнитного поля. Для оценки связи признаков в работе
использовался регрессионно-корреляционный анализ. Были
рассчитаны линейные коэффициенты корреляции гемоглобина и
креатинина в каждой группе животных, а
также построены линии
парной регрессии пятого порядка для этих показателей.
Результаты исследования. В табл. 2 представлены резуль-
таты анализа содержания креатинина Kr
ij
в крови мышей кон-
трольной и экспериментальных групп, где i – номер группы
мышей, j – номер мыши в группе.
Таблица 2
Содержание креатинина в крови мышей контрольной и эксперимен-
тальных групп
j, номер
мыши
Kr
1j
(контроль),
мкмоль/л
Kr
2j
,
мкмоль/л
Kr
3j
,
мкмоль/л
Kr
4j
,
мкмоль/л
Kr
5j
,
мкмоль/л
1 63,3 38,7 38,7 33,2 38,7
2 65,3 77,4 22,1 38,7 22,1
3 52,1 38,7 33,2 38,7 33,2
4 68,7 44,3 22,1 27,7 22,1
5 49,8 27,7 33,2 33,2 33,2
6 60,8 33,2 44,3 27,7 38,7
7 53,4 38,7 38,7 44,3 34,5
8 61,2 71,9 99,6 33,2 23,7
9 65,7 27,7 38,7 49,8 28,9
10 55,3 38,7 116,2 38,7 31,5
11 43,2 38,7 38,7 38,7 25,6
12 65,4 27,7 66,4 38,7 32,4
13 53,6 49,8 60,8 44,3 36,4
14 54,4 33,2 44,3 60,8 33,2
15 66,8 44,3 49,8 44,3 25,6
В табл. 3 представлены итоги анализа содержания гемогло-
бина Hb
ij
в крови мышей контрольной и экспериментальных
групп, где i – номер группы мышей, j – номер мыши в группе.
Так как объемы экспериментальной и контрольной групп n
были равны 15, то для числа степеней свободы
2822
= n
и
5% уровня значимости (P=0,05) теоретическое значение t-
распределения Стьюдента оказалось равным t
крит
= 2,049. В табл.
4 приведены результаты статистического анализа содержания
гемоглобина в крови мышей экспериментальных групп по срав-
нению с контролем.