Практическое руководство по биологической безопасности в лабораторных условиях. Третье издание

Подождите немного. Документ загружается.

• 92 •

ПРАКТИЧЕСКОЕ РУКОВОДСТВО ПО БИОЛОГИЧЕСКОЙ

БЕЗОПАСНОСТИ В ЛАБОРАТОРНЫХ УСЛОВИЯХ

Меры предосторожности при работе с автоклавами.

Соблюдение следующих правил может свести к минимуму опасности, возникающие

при работе с емкостями, находящимися под давлением.

1. Ответственность за использование и регулярное обслуживание следует возло-

жить на подготовленных сотрудников.

2. Программа профилактики должна включать регулярную инспекцию квалифици-

рованным персоналом камеры, герметичности дверец и всех измерительных и

контрольных устройств.

3. Пар должен быть насыщенным и не содержать химических веществ (например,

ингибиторов коррозии), которые могут контаминировать стерилизуемые пред-

меты.

4. Все материалы, подлежащие автоклавированию, должны быть помещены в кон-

тейнеры, обеспечивающие беспрепятственное удаление воздуха и хорошую

проводимость тепла; камера должна быть загружена неплотно, чтобы дать пару

равномерный доступ ко всем загруженным предметам.

5. Если автоклав не оборудован внутренними предохранительными запорами, пре-

пятствующими открыванию двери при повышенном давлении, то в этом случае

необходимо предусмотреть возможность открытия дверки только после закры-

тия основного клапана подачи пара и снижения температура до 80 °C.

6. При автоклавировании жидкостей устройство выпуска пара следует установить

на медленный режим, так как жидкости при их выгрузке могут выкипать из-за

перегрева.

7. При открывании автоклава оператор должен надеть подходящие перчатки и за-

щитные козырьки, даже если температура упала ниже 80 °C.

8. В ходе обычной проверки эффективности автоклава индикаторы биологической

стабильности и термопары должны помещаться в центр каждой загрузки. Для

определения правильных циклов функционирования настоятельно рекоменду-

ется проводить регулярный контроль «наихудших случаев» загрузки с исполь-

зованием термопар и регистрирующих устройств.

9. Дренажный экранирующий фильтр камеры (в случае наличия) следует ежеднев-

но снимать и чистить.

10. Следует обращать особое внимание на то, чтобы выпускной клапан пара не был

закрыт бумагой или другими материалами.

Сжигание

Сжигание является полезным методом уничтожения останков животных, а также

анатомических и других отходов с предварительной деконтаминацией или без нее

(cм. главу 3). Сжигание является альтернативой автоклавированию только в том слу-

чае, если мусоросжигатель находится под контролем лаборатории.

Правильное сжигание предполагает необходимость эффективных средств кон-

троля температуры и камеры вторичного сжигания. Многие мусоросжигатели, осо-

бенно имеющие только одну камеру сжигания, не подходят для работы с инфек-

ционными материалами, останками животных и предметами из пластмассы. Такие

материалы уничтожаются не полностью, в результате чего с исходящим потоком

может происходить загрязнение атмосферы микроорганизмами, токсичными хими-

ческими веществами и дымом. Тем не менее, существует много конструкций камер

сжигания. В идеале, температура в первичной камере должна быть не менее 800 °C,

а во вторичной камере – не менее 1000 °C.

Материалы для сжигания, даже если они прошли предварительную деконтами-

нацию, должны переноситься в мусоросжигатель в мешках, желательно в пласти-

• 93 •

ковых. Сотрудники, работающие с мусоросжигателем, должны быть надлежащим

образом проинструктированы относительно загрузки и контроля температуры. Сле-

дует также отметить, что эффективное функционирование мусоросжигателя в зна-

чительной степени зависит от правильного сочетания сжигаемых материалов.

В настоящее время многие обеспокоены тем, что существующие и проектиру-

емые мусоросжигатели могут оказывать отрицательное воздействие на окружаю-

щую среду, поэтому сейчас проводится работа по улучшению экологических харак-

теристик мусоросжигателей и повышению их эффективности с точки зрения затрат

энергии.

Удаление отходов

Удаление лабораторных и медицинских отходов регулируется различными регио-

нальными, национальными и международными нормами, поэтому до разработки и

осуществления программы по обработке, транспортировке и удалению биологичес-

ки опасных отходов, следует ознакомиться с самыми последними изданиями доку-

ментов по этому вопросу. Как правило, с золой, образующейся в мусоросжигателе

после сжигания отходов, можно обращаться как с обычными бытовыми отходами

и вывозить силами местных служб. Автоклавированные отходы можно сжигать во

внешних мусоросжигателях или вывозить на мусорные свалки (см. главу 3).

Дополнительную информацию см. в источниках (13) и (29-39).

14. ДЕЗИНФЕКЦИЯ И СТЕРИЛИЗАЦИЯ

• 94 •

15. Основы перевозки

инфекционных материалов

Перевозка инфекционных и потенциально инфекционных материалов строго регла-

ментирована национальными и международными нормативными положениями. В

этих положениях изложен порядок правильного использования упаковочного мате-

риала, а также другие требования к погрузочно-разгрузочным операциям.

Лабораторный персонал должен обращаться с инфекционными материалами в

соответствии с применимыми транспортными нормами. Соответствие этим прави-

лам обеспечит:

1. Снижение вероятности нарушения упаковки и утечки и, как следствие

2. Уменьшение воздействия возможных инфекций

3. Повышение эффективности поставок упакованных материалов.

Международные правила перевозки

Правила перевозки инфекционных материалов (любым видом транспорта) основа-

ны на принятых Организацией Объединенных Наций Типовых правилах перевозки

опасных грузов (40). Содержащиеся в них рекомендации разработаны Комитетом

экспертов Организации Объединенных Наций по перевозке опасных грузов (КЭ-

ПОГ). Для придания этим правилам обязательного характера компетентные ор-

ганы должны включить их в национальное законодательство и международные

правила, регулирующие перевозки отдельными видами транспорта (например,

Технические инструкции по безопасной перевозке опасных грузов воздушным

транспортом (41) Международной организации гражданской авиации (ИКАО) и

Европейское соглашение о международной дорожной перевозке опасных грузов

(ДОПОГ) (42)).

Международная ассоциация воздушного транспорта (ИАТА) ежегодно издает

Руководящие принципы по отгрузке инфекционных веществ (43). Эти принципы

должны соответствовать Техническим инструкциям ИКАО в качестве минималь-

ного стандарта, но могут налагать дополнительные ограничения. Соблюдение

принципов ИАТА является обязательным, если отгрузка осуществляется членами

ИАТА.

Поскольку Типовые правила перевозки опасных грузов носят динамичный харак-

тер в том плане, что один раз в два года в них вносятся поправки, для ознакомления

с применимыми правилами следует обращаться к самому последнему изданию тек-

стов этих правил на национальном и международном уровнях.

Участие ВОЗ в работе КЭПОГ сводится к выполнению консультативных функций.

Крупные изменения в правилах перевозки инфекционных веществ были внесены в

13-е издание (2003 г.) Типовых правил ООН (40). Справочную информацию, касающу-

юся принятых поправок, можно получить в ВОЗ (44).

Международные типовые правилах не имеют целью подменить какие бы то ни

было местные или национальные требования. Однако в тех случаях, когда наци-

ональные требования отсутствуют, следует применять международные типовые

правила.

• 95 •

Важно отметить, что международные перевозки инфекционных веществ также

подчиняются национальным правилам, касающимся импорта/экспорта.

Базовый принцип тройной упаковки

Система тройной упаковки, которая применяется для транспортировки инфекцион-

ных и потенциально инфекционных материалов, проиллюстрирована на рисунке 11.

Эта система упаковки состоит из трех слоев: первичный контейнер, вторичная упа-

ковка и внешняя упаковка.

Первичный контейнер, в котором находится образец, должен быть герметичным

и иметь маркировку, указывающую на его содержимое. Он должен быть завернут

в достаточное количество абсорбирующего материала, способного поглотить всю

жидкость в случае повреждения контейнера или утечки.

Вторичная водонепроницаемая упаковка используется для защиты первичного

контейнера (контейнеров). Несколько обернутых первичных контейнеров могут

быть помещены в одну вторичную упаковку. Некоторые нормативные тексты содер-

жат положения, регламентирующие ограничение объема и/или веса упакованных

инфекционных материалов.

Третий слой служит для защиты вторичной упаковки от физического поврежде-

ния во время перевозки. В соответствии с самыми последними правилами должны

также представляться бланки данных об образце, письма и другая информация, по-

зволяющая идентифицировать или описать образец или установить личность пере-

возчика и получателя.

Типовые правила ООН предписывают использование двух различных систем

тройных упаковок. Базовая система тройной упаковки применяется к транспор-

тировке разнообразных инфекционных материалов; однако микроорганизмы

высокого риска должны перевозиться в соответствии с более строгими требо-

ваниями. Для получения более подробной информации об использовании раз-

личных упаковок в зависимости от вида перевозимых материалов рекомендуется

обратиться к тексту применяемых национальных и/или международных типовых

правил.

Процедура обработки пролившегося материала

В случае разлития инфекционного или потенциально инфекционного материала

следует применять следующую процедуру чистки.

1. Надеть перчатки и защитную одежду, включая, в случае необходимости, защит-

ные приспособления для лица и глаз.

2. Накрыть пролившийся материал тканевым или бумажным полотенцем, чтобы

предотвратить его дальнейшее распространение.

3. Вылить соответствующее дезинфицирующее средство через полотенце на про-

лившийся материал и прилегающую зону (как правило, для этой цели достаточ-

но 5-процентного раствора гипохлорита натрия, но в случае разлития на борту

самолетов следует применять четвертичные аммониевые дезинфицирующие

средства).

4. Применять дезинфицирующее средство следует концентрическими кругами,

начиная с внешней зоны пролившегося материала и постепенно продвигаясь к

центру.

5. По истечении надлежащего периода времени (например, 30 минут), удалите

весь материал. При наличии разбившегося стекла или других острых предметов

для их сбора используйте совок для мусора или кусок картона и затем положите

их в прочный контейнер для последующего уничтожения.

15. ОСНОВЫ ПЕРЕВОЗКИ ИНФЕКЦИОННЫХ МАТЕРИАЛОВ

• 96 •

ПРАКТИЧЕСКОЕ РУКОВОДСТВО ПО БИОЛОГИЧЕСКОЙ

БЕЗОПАСНОСТИ В ЛАБОРАТОРНЫХ УСЛОВИЯХ

Упаковка и маркировка инфекционных материалов категории А

Упаковка и маркировка инфекционных материалов категории B

Рисунок 11. Примеры систем тройной упаковки

(графическая информация была любезно предоставлена

ИATA, Монреаль, Канада).

первичный контейнер

(пробирка с материалом

для исследований)

вторичная упаковка

(водонепроницаемая)

крышка

абсорбирующий материал

данные об образцах

(включая перечень содержимого)

внешняя упаковка

знак «Не кантовать»

(не обязателен в слу-

чае, если объем пер-

вичного контейнера не

превышает 50 мл)

маркировка

спецификации ООН

водонепроницаемая

крышка

абсорбирующий

упаковочный

материал

вторичная

упаковка

(герметичная на

спучай протечек

и просеивания)

первичный контейнер

(герметичный на случай

протечек и просеивания)

указания: «Кому» /

«От кого»

подставка-держатель

(из пенопласта, губки)

перечень содержимого

(данные об образцах)

твердая внешняя упаковка

надлежащее транспортное

наименование

упаковочная маркировка

6. Очистите и продезинфицируйте участок разлития (в случае необходимости,

повторите этапы 2-5).

7. Положите контаминированные материалы в водонепроницаемый, стойкий к

проколам контейнер для последующего удаления.

8. После успешной дезинфекции проинформируйте соответствующий орган о

том, что участок был деконтаминирован.

15. ОСНОВЫ ПЕРЕВОЗКИ ИНФЕКЦИОННЫХ МАТЕРИАЛОВ

• 97 •

ЧАСТЬ V

Введение в

биотехнологию

16. Биологическая

безопасность и технология

рекомбинантной ДНК

Технология рекомбинантной ДНК заключается в соединении генетического матери-

ала, полученного из различных источников, и создании таким образом генетически

модифицированных организмов (ГМО), возможно, никогда ранее не существовавших

в природе. На первых этапах работы молекулярные биологи выражали опасения по

поводу того, что такие организмы могут обладать непредсказуемыми и нежелатель-

ными свойствами, которые могут представлять биологическую опасность за стенами

лабораторий. Эти опасения легли в основу научной конференции, состоявшейся в

1975 г. в Асиломаре, шт. Калифорния, США (45). На этой встрече были обсуждены

вопросы безопасности и предложены первые руководящие принципы в области тех-

нологии рекомбинантной ДНК. Дальнейшие научные исследования на протяжении

более чем 25 лет показали, что при проведении надлежащей оценки риска и приня-

тии соответствующих защитных мер генная инженерия может быть безопасной.

Технология рекомбинантной ДНК или генная инженерия была впервые исполь-

зована для клонирования сегментов ДНК в бактериальных организмах в целях по-

вышенной экспрессии специфических генных продуктов, необходимых для даль-

нейших исследований. Молекулы рекомбинантной ДНК были также использованы

для создания ГМО, таких как трансгенных и «нокаутных» (с выключенными генами)

животных, а также трансгенных растений.

Технология рекомбинантной ДНК уже оказала огромное влияние на биологию и

медицину и, возможно, окажет еще большее воздействие теперь, когда синтези-

рована нуклеотидная последовательность полного человеческого генома. Десятки

тысяч генов не известного до сих пор предназначения будут изучены на основа-

нии использования технологии рекомбинантной ДНК. Генная терапия может стать

общепринятой при лечении определенных заболеваний и вполне вероятно, что с

использованием технологий генной инженерии будут созданы новые векторы для

переноса генов. В современном сельском хозяйстве может также значительно воз-

расти роль трансгенных растений, выведенных на основании технологии рекомби-

нантной ДНК.

Эксперименты в области создания и использования ГМО должны проводиться

после проведения оценки риска с точки зрения биологической безопасности. Пато-

генные свойства таких организмов и любые потенциальные опасности, связанные с

ними, могут быть не известны и не описаны должным образом. В этой связи необхо-

димо оценить особенности организма-донора, свойства последовательностей ДНК,

предназначенных для переноса, особенности организма-реципиента и свойства

окружающей среды. Эти данные должны содействовать определению уровня био-

логической безопасности, требуемого для безопасного обращения с создаваемым

ГМО, и установлению необходимых систем биологической и физической изоляции.

Соображения биологической безопасности

для биологических систем экспрессии

Биологические системы экспрессии состоят из векторов и клеток-хозяев. В целях

эффективности и безопасности в процессе их использования они должны соот-

• 101 •