Учебное пособие. — РГПУ им А.И. Герцена, 2011. — 138 с.
Материал, представленный в данном учебном пособии, позволит
обеспечить студентам биологических специальностей педагогических
ВУЗов знакомство с современными методами технологии создания и
применения рекомбинантных ДНК для фундаментальных и прикладных
целей, а также поможет понять основные молекулярные принципы,на
которых базируется биотехнология.
Объем и глубина излагаемого в пособии материала определяется учебными курсами по биотехнологии, которые с 2005 года автор пособия читает студентам факультета биологии РГПУ им А.И. Герцена. Введение
Ферменты – инструменты генетической инженерии
Эндонуклеазы рестрикции
Номенклатура
Ферментативная активность компонентов системы рестрикции-модификации
Липкие концы
Тупые концы
Классификация эндонуклеаз рестрикции
Эндонуклеазы рестрикции типа II
Физическое картирование ДНК по участкам узнавания эндонуклеаз рестрикции
Фосфомоноэстеразы
Полинуклеотидкиназа
Лигазы
Полимеразы
ДНК-полимераза
Обратная транскриптаза
Терминальная трансфераза, поли-А - полимераза
Способы объединения фрагментов ДНК
Лигирование по одноименным "липким" концам
Лигирование по одноименным "липким" концам с обработкой щелочной фосфатазой
Лигирование по "тупым" концам
Лигирование фрагментов с разноименными липкими, или липким и тупым концами
Генетические векторы для клонирования ДНК
Вставки ДНК
Векторы для клонирования ДНК
Плазмидные векторы
Плазмидный вектор pBR322
Введение рекомбинантной ДНК в клетки бактерий и отбор трансформантов
Другие плазмидные векторы
Векторы на основе бактериофага λ
Гибридные векторы
Векторные системы для клонирования очень крупных фрагментов ДНК
BAC-система
YAC-векторы
Вспомогательные методы технологии рекомбинантной ДНК
Химический синтез ДНК
Секвенирование ДНК
Молекулярная гибридизация
Гибридизация нуклеиновых кислот в растворе
Гибридизация нуклеиновых кислот на твердых подложках
Гибридизация на чипах
Полимеразная цепная реакция
Метод ПЦР
ПЦР в реальном времени
Обратная транскрипция, сопряженная с полимеразной цепной реакцией (ОТ-ПЦР)
Направленный мутагенез
Библиотеки генов
Создание геномных библиотек.
Скрининг с помощью ДНК-ДНК-гибридизации.
Иммунологический скрининг.
Скрининг по активности белка
Клонирование структурных генов эукариот.
Системы экспрессии чужеродных генов
Экспрессия генов в клетках прокариот в составе плазмид
Экспрессия генов, интегрированных в хромосомную ДНК прокариот
Экспрессия рекомбинантных генов в эукариотических системах
Экспрессирующие векторы для работы с клетками млекопитающих (ЭВМ)
Химерные белки
Репортерные гены
Другие области применения химерных белков
Повышение эффективности секреции
Словарь терминов
Список используемой литературы
Объем и глубина излагаемого в пособии материала определяется учебными курсами по биотехнологии, которые с 2005 года автор пособия читает студентам факультета биологии РГПУ им А.И. Герцена. Введение
Ферменты – инструменты генетической инженерии
Эндонуклеазы рестрикции
Номенклатура
Ферментативная активность компонентов системы рестрикции-модификации
Липкие концы
Тупые концы
Классификация эндонуклеаз рестрикции
Эндонуклеазы рестрикции типа II
Физическое картирование ДНК по участкам узнавания эндонуклеаз рестрикции
Фосфомоноэстеразы
Полинуклеотидкиназа
Лигазы
Полимеразы
ДНК-полимераза
Обратная транскриптаза
Терминальная трансфераза, поли-А - полимераза
Способы объединения фрагментов ДНК
Лигирование по одноименным "липким" концам
Лигирование по одноименным "липким" концам с обработкой щелочной фосфатазой
Лигирование по "тупым" концам
Лигирование фрагментов с разноименными липкими, или липким и тупым концами
Генетические векторы для клонирования ДНК
Вставки ДНК
Векторы для клонирования ДНК
Плазмидные векторы
Плазмидный вектор pBR322
Введение рекомбинантной ДНК в клетки бактерий и отбор трансформантов
Другие плазмидные векторы
Векторы на основе бактериофага λ
Гибридные векторы
Векторные системы для клонирования очень крупных фрагментов ДНК
BAC-система
YAC-векторы
Вспомогательные методы технологии рекомбинантной ДНК
Химический синтез ДНК
Секвенирование ДНК
Молекулярная гибридизация
Гибридизация нуклеиновых кислот в растворе
Гибридизация нуклеиновых кислот на твердых подложках
Гибридизация на чипах
Полимеразная цепная реакция
Метод ПЦР
ПЦР в реальном времени
Обратная транскрипция, сопряженная с полимеразной цепной реакцией (ОТ-ПЦР)
Направленный мутагенез
Библиотеки генов
Создание геномных библиотек.
Скрининг с помощью ДНК-ДНК-гибридизации.
Иммунологический скрининг.
Скрининг по активности белка
Клонирование структурных генов эукариот.
Системы экспрессии чужеродных генов
Экспрессия генов в клетках прокариот в составе плазмид
Экспрессия генов, интегрированных в хромосомную ДНК прокариот
Экспрессия рекомбинантных генов в эукариотических системах
Экспрессирующие векторы для работы с клетками млекопитающих (ЭВМ)
Химерные белки
Репортерные гены
Другие области применения химерных белков
Повышение эффективности секреции
Словарь терминов
Список используемой литературы