Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических
наук. Саннкт-Петербург, СПбГУ, 2013. – 143 с.
Специальность 03.02.05 – энтомология
Научный руководитель: доктор биологических наук Сергей Иванович Черныш
Целью настоящего исследования являлось изучение механизмов регуляции синтеза антимикробных пептидов в процессе иммунного ответа личинок мух-каллифорид. Оглавление.
Введение.
Обзор литературы.
Иммунная система насекомых.
Распознавание «чужого.
Элиминация «чужого.
Фагоцитоз.
Инкапсуляция и образование морул.
Коагуляция гемолимфы.
Цитотоксическая реакция.
Меланизация.
Антимикробные пептиды.
Антимикробные пептиды насекомых.
Структурное разнообразие антимикробных пептидов.
Цекропины.
Пептиды, содержащие дисульфидные связи.
Пептиды с регулярно повторяющимися аминокислотами.
Механизм действия антимикробных пептидов.
Жировое тело и его роль в синтезе антимикробных пептидов.
Другие источники антимикробных пептидов.
Индукция синтеза антимикробных пептидов.
Роль эпителия и гемоцитов в индукции синтеза антимикробных пептидов клетками жирового тела.
Роль эпителия в индукции синтеза пептидных антибиотиков.
Роль гемоцитов в индукции синтеза пептидных антибиотиков.
Синтез антимикробных пептидов у Calliphora vicina.
Взаимодействие иммунной и нейроэндокринной системы.
Структурная организация нейроэндокринной системы.
Основные гормоны насекомых.
Экдистероиды.
Ювенильный гормон.
Адипокинетический гормон.
Биогенные амины.
Иммуно-нейроэндокринные взаимодействия.
Влияние нейроэндокринной системы на иммунные процессы у Calliphora vicina .
Роль гормонов в регуляции иммунных процессов у насекомых.
Материал и методы.
Биологический материал.
Методы.
Микрохирургические вмешательства.
Инфицирование насекомых.
Наложение лигатур и термическое воздействие.
Сбор гемолимфы и отделение плазмы.
Отделение покровов.
Выделение жирового тела.
Определение жизнеспособности культивируемых клеток.
Методы концентрации и очистки веществ.
Избирательная денатурация под действием температуры.
Метод твердофазной экстракции.
Метод ультрафильтрации.
Хроматографическое фракционирование.
Масс-спектрометрия.
Анализ антимикробной активности материала.
Статистическая обработка экспериментальных данных.
Индукция синтеза антимикробных пептидов in vivo.
Эффект инфицирования.
Эффект стрессорного воздействия.
Эффект лигатурного стресса.
Эффект термического ожога.
Состав антимикробных пептидов, синтезируемых in vivo.
Заключение.
Синтез антимикробных пептидов клетками жирового тела in vitro
Разработка органной культуры жирового тела.
Выбор базового состава культуральной среды.
Выживаемость культивируемых клеток.
Индукция антимикробной активности in vitro.
Роль «фактора плазмы» в активации жирового тела.
Роль «фактора покровов» в активации жирового тела.
Роль гормонов в активации жирового тела.
Стерилизация культуры жирового тела.
Температура культуральной среды.
Перемешивание культуры.
Газообмен в культуре жирового тела.
Геометрические параметры культуральной ячейки.
Продолжительность цикла культивирования.
Количественные характеристики метода получения антимикробных пептидов in vitro.
Состав антимикробных пептидов, синтезируемых in vitro.
Заключение.
Поиск факторов активации жирового тела и изучение их свойств.
Термостабильность факторов активации жирового тела.
Термостабильность факторов активации, локализованных в плазме.
Термостабильность факторов активации, локализованных в покровах.
Молекулярная масса факторов активации жирового тела.
Хроматографические характеристики факторов активации жирового тела.
Видоспецифичность факторов активации жирового тела.
Заключение.
Обсуждение.
Травмогенная индукция синтеза антимикробных пептидов.
Нейрогенная индукция синтеза антимикробных пептидов.
Органная культура жирового тела в иммунологии и биофармакологии насекомых.
Органная культура жирового тела как инструмент для изучения механизмов
индукции антимикробной активности.
Органная культура жирового тела как перспективный источник белков
медицинского назначения.
Выводы.
Список употребляемых в работе сокращений.
Список литературы.
Специальность 03.02.05 – энтомология
Научный руководитель: доктор биологических наук Сергей Иванович Черныш
Целью настоящего исследования являлось изучение механизмов регуляции синтеза антимикробных пептидов в процессе иммунного ответа личинок мух-каллифорид. Оглавление.
Введение.
Обзор литературы.
Иммунная система насекомых.
Распознавание «чужого.
Элиминация «чужого.
Фагоцитоз.
Инкапсуляция и образование морул.
Коагуляция гемолимфы.
Цитотоксическая реакция.
Меланизация.
Антимикробные пептиды.
Антимикробные пептиды насекомых.
Структурное разнообразие антимикробных пептидов.
Цекропины.
Пептиды, содержащие дисульфидные связи.
Пептиды с регулярно повторяющимися аминокислотами.
Механизм действия антимикробных пептидов.
Жировое тело и его роль в синтезе антимикробных пептидов.
Другие источники антимикробных пептидов.
Индукция синтеза антимикробных пептидов.
Роль эпителия и гемоцитов в индукции синтеза антимикробных пептидов клетками жирового тела.
Роль эпителия в индукции синтеза пептидных антибиотиков.
Роль гемоцитов в индукции синтеза пептидных антибиотиков.
Синтез антимикробных пептидов у Calliphora vicina.
Взаимодействие иммунной и нейроэндокринной системы.
Структурная организация нейроэндокринной системы.
Основные гормоны насекомых.
Экдистероиды.
Ювенильный гормон.
Адипокинетический гормон.
Биогенные амины.
Иммуно-нейроэндокринные взаимодействия.
Влияние нейроэндокринной системы на иммунные процессы у Calliphora vicina .
Роль гормонов в регуляции иммунных процессов у насекомых.
Материал и методы.
Биологический материал.
Методы.
Микрохирургические вмешательства.
Инфицирование насекомых.
Наложение лигатур и термическое воздействие.
Сбор гемолимфы и отделение плазмы.
Отделение покровов.
Выделение жирового тела.
Определение жизнеспособности культивируемых клеток.
Методы концентрации и очистки веществ.
Избирательная денатурация под действием температуры.
Метод твердофазной экстракции.
Метод ультрафильтрации.
Хроматографическое фракционирование.
Масс-спектрометрия.
Анализ антимикробной активности материала.
Статистическая обработка экспериментальных данных.
Индукция синтеза антимикробных пептидов in vivo.
Эффект инфицирования.
Эффект стрессорного воздействия.
Эффект лигатурного стресса.
Эффект термического ожога.
Состав антимикробных пептидов, синтезируемых in vivo.
Заключение.
Синтез антимикробных пептидов клетками жирового тела in vitro
Разработка органной культуры жирового тела.
Выбор базового состава культуральной среды.
Выживаемость культивируемых клеток.
Индукция антимикробной активности in vitro.
Роль «фактора плазмы» в активации жирового тела.
Роль «фактора покровов» в активации жирового тела.
Роль гормонов в активации жирового тела.
Стерилизация культуры жирового тела.
Температура культуральной среды.
Перемешивание культуры.
Газообмен в культуре жирового тела.
Геометрические параметры культуральной ячейки.
Продолжительность цикла культивирования.
Количественные характеристики метода получения антимикробных пептидов in vitro.
Состав антимикробных пептидов, синтезируемых in vitro.
Заключение.
Поиск факторов активации жирового тела и изучение их свойств.
Термостабильность факторов активации жирового тела.
Термостабильность факторов активации, локализованных в плазме.
Термостабильность факторов активации, локализованных в покровах.
Молекулярная масса факторов активации жирового тела.
Хроматографические характеристики факторов активации жирового тела.
Видоспецифичность факторов активации жирового тела.
Заключение.
Обсуждение.
Травмогенная индукция синтеза антимикробных пептидов.
Нейрогенная индукция синтеза антимикробных пептидов.
Органная культура жирового тела в иммунологии и биофармакологии насекомых.
Органная культура жирового тела как инструмент для изучения механизмов
индукции антимикробной активности.
Органная культура жирового тела как перспективный источник белков
медицинского назначения.
Выводы.
Список употребляемых в работе сокращений.
Список литературы.