Сенчук В.В., Мохорева С.И. Биохимия. Лабораторный практикум

Подождите немного. Документ загружается.

Эмульгирование жиров

Реактивы: 1) жир; 2) вода дист.; 3) белок, 5% р-р; 4) КОН, 1% р-р; 5) сода, 2% р-р; 6) мыло, 2% р-

р 7) желчь.

Принцип метода: В виду плохой растворимости в воде липиды образуют эмульсии с бифильными

молекулами - белками, детергентами, желчью.

Ход работы: В 6 пробирок помещают по 3 капли исследуемого раствора и по 2-3 мл дистил. воды.

Необходимо следить, чтобы количество воды и жира везде было приблизительно одинаковым.

Добавляют в первую пробирку несколько капель раствора белка, во вторую - несколько капель

раствора КОН, в третью - несколько капель раствора соды, в четвертую - несколько капель раствора

мыла, в пятую - желчи, в шестую - не добавляют ничего (она будет служить контролем). Помещают на

короткое время все шесть пробирок в горячую водяную баню для расплавления жира, если жир

жидкий, то нагревание в бане излишне. Взбалтывают содержимое всех пробирок. ставят их по порядку

в штатив и наблюдают образование в первых пяти пробирках относительно устойчивой эмульсии, а в

шестой - расслоение неустойчивой эмульсии на жир и воду.

Гидролиз жира (омыление)

Реактивы: 1) растительное масло; 2) КОН, 40% р-р.

Ход работы: В пробирку наливают около 2 мл растительного масла и добавляют равный объем

40% р-ра едкого калия. Пробирку закрывают пробкой, в которую вставлена стеклянная трубочка

(холодильник), помещают в кипящую водяную баню и держат там до образования однородного

раствора мыла. Результат опыта и уравнение реакции записывают.

В пробирку наливают примерно 8-10 мл воды и взбалтывают. Полученный раствор используют

для определения составных частей жира.

Открытие в гидролизате составных частей жира

А. Открытие жирных кислот

Реактивы: 1) гидролизат; 2) конц. H

Ход работы: В пробирку наливают часть полученного в четвертом опыте гидролизата и

добавляют несколько капель концентрированной серной кислоты. Пробирку опускают в кипящую

водяную баню до образования на поверхности жидкости жирного слоя.

Б. Открытие глицерина.

Реактивы: 1) гидролизат; 2) NaOH, 10% р-р.

Ход работы: В пробирку наливают примерно 2 мл гидролизата, добавляют 8-10 капель 10 % р-ра

едкого натра и несколько капель 2% р-ра сернокислой меди. Появляется слабо-синее окрашивание,

вследствие образования глицерата меди.

Результаты обеих реакций записывают.

Открытие ненасыщенных жирных кислот в жире

Реактивы: 1) бромная вода; 2) растительное масло.

Ход работы: В 2 пробирки наливают по 1 мл бромной воды. В первую пробирку добавляют

несколько капель растительного масла и тщательно встряхивают; наблюдают обесцвечивание

бромной воды. Вторая пробирка служит контролем.

Результаты опыта и уравнение реакции записывают.

Получение нерастворимых солей высших жирных кислот

Реактивы: 1) р-р мыла; 2) CaCl

, 10% р-р.

Ход работы: В пробирку наливают 1-2 мл раствора мыла ( можно использовать гидролизат,

полученный в 4 опыте ) и прибавляют несколько капель 10 % р-ра хлористого кальция. Тщательно

перемешивают и наблюдают появление осадка нерастворимого кальциевого мыла.

Результат опыта и уравнение реакции записывают.

Определение йодного числа

Реактивы: 1) жиры; 2) спирт этиловый; 3) йод, 0,1 н р-р в спирте; 4) гипосульфит, 0,1н р-р; 5)

крахмал, 0,5% р-р.

Принцип метода: Ненасыщенность жира зависит от присутствия в его составе непредельных

жирных кислот. Ненасыщенные соединения легко присоединяют по 2 атома галогена по месту каждой

двойной связи. Обычно степень ненасыщенности определяется йодным числом. Йодное число

измеряется количеством йода, которое присоединяется к 100 г жира. Йодное число позволяет судить о

степени ненасыщенности жира, о склонности его к "высыханию", прогорканию и др.

Ход работы: Отвешивают в коническую колбочку на 50 мл 0,1 г жира и вносят 10 мл хлороформа

(проба). В другую пустую колбочку добавляют 10 мл хлороформа (контроль). В обе колбы приливают

точно по 25 мл 0,1н. спиртового раствора йода. Закрывают пробкой, тщательно перемешивают и

оставляют в темном месте на 90 минут. Не вошедший в реакцию йод титруют 0,1н раствором

гипосульфита сначала до слабо-желтой окраски, а затем в присутствии крахмала до обесцвечивания

раствора, потом таким же образом титруют контроль.

Расчет: 1 мл 0,1 н раствора гипосульфита эквивалентен 1 мл 0,1 н раствора йода или 0,0127 г

йода. Зная, сколько мл 0,1 н раствора гипосульфита пошло на титрование контроля и опыта,

вычисляют йодное число:

(А - В) × f × 0,0127× 100

Х = ---------------------------------

где:

А - количество 0,1 н р-ра гипосульфита, затраченное на титрование контроля;

В - количество 0,1 н р-ра гипосульфита, затраченное на титрование пробы;

f - коэффициент поправки на 0,1н р-р гипосульфита;

с - навеска жира в граммах.

Определение числа омыления жира

Реактивы: 1) жир; 2) КОН, 0,5 н. спиртовой р-р; 3) HCl, 0,5 н р-р; 4) фенолфталеин, 0,1 % р-р.

Принцип метода: Числом омыления называется количество мг КОН, необходимого для

нейтрализации всех свободных и связанных жирных кислот, содержащихся в 1 г жира.

Ход работы: В колбочку на 50 мл вносят 0,5 г жира, прибавляют 15 мл 0,5н спиртового раствора

КОН и кипятят на водяной бане 50 минут с обратным холодильником, время от времени взбалтывая

содержимое колбы.

Окончание омыления определяется по образованию однородной прозрачной жидкости.

Одновременно ставят контроль, но вместо жира прибавляют 0,5 мл воды. По окончании омыления

жидкость охлаждают до комнатной температуры, добавляют 20 мл дистиллированной воды и титруют

0,5 н раствором HCl по фенолфталеину.

Расчет: 1 мл 0,5 н раствора КОН соответствует 25 мг КОН. Количество КОН, которое пошло на

нейтрализацию всех жирных кислот 1 г жира, равно:

( В - А) × f × 28,5

С = -----------------------------

где:

В - количество 0,5 н р-ра HCl, затраченное на титрование контроля;

А - количество 0,5 н р-ра HCl, затраченное на титрование пробы;

а - количество жира в граммах;

f - коэффициент поправки на 0,5 н р-р HCl.

Определение кислотного числа

Реактивы: 1) жир; 2) смесь спирта с эфиром; 3) КОН, 0,1 н р-р; 4) фенолфталеин. 0,1 % р-р.

Принцип метода: Кислотным числом называется число мг КОН, необходимого для нейтрализации

всех свободных жирных кислот в 1 г жира.

Ход работы: Отвешивают на весах 1 г жира, помещают в колбу на 50 мл, добавляют 10 мл

нейтральной смеси спирта с эфиром и 3-4 капли фенолфталеина. Раствор масла в смеси спирта с

эфиром титруют из обычной бюретки КОН до нежно-розового цвета.

Расчет: Количество КОН в мг, которое пошло на титрование свободных жирных кислот в 1 г

жира, равняется:

А × f × 5,6

С = -------------------

где:

А - количество 0,1н р-ра КОН. затраченное на титрование пробы;

f - коэффициент поправки на 0,1н р-р КОН;

5,6 - количество мг КОН, содержащееся в 1 мл 0,1 н р-ра КОН;

а - количество жира в граммах.

Определение эфирного числа жира

Эфирным числом называется количество КОН, необходимое для нейтрализации жирных кислот,

которые образуются при омылении 1 г жира.

Это число определяют как разницу между числом омыления данного жира и его кислотным

числом.

5.2. СТЕРОЛЫ, СТЕРИДЫ

В основе структуры стероидов лежит циклопентанпергидрофенантрен (четыре конденсированных

кольца). Наиболее распространенный и биологически важный стерин животных тканей – циклический

спирт холестерин. Он входит в состав плазматических мембран, а также мембран митохондрий и в

состав эндоплазматического ретикулума, но в значительно меньшем количестве. Холестерин также

содержится в крови и желчи. В растениях обнаружены другие стерины (фитостерины) и стероидные

гликозиды (сапонины). К стеридам относятся также такие биологически активные вещества, как

гормоны надпочечников (кортизол, кортикостерон, альдостерон), половые гормоны (андрогены и

эстрогены), желчные кислоты, витамин D.

Под влиянием концентрированной серной кислоты и уксусного ангидрида холестерин

превращается в углеводороды с суммарной формулой C

и С

(бихолестадиены), которые с

серной кислотой образуют диеновые кислоты: с двумя молекулами серной кислоты - продукт

красного цвета (реакция Сальковского), с одной молекулой серной кислоты - продукт зеленого цвета

(реакция Либермана-Бурхарда).

Реакция Сальковского

Реактивы: 1) холестерин, 1% р-р в хлороформе; 2) уксусный ангидрид; 3) серная кислота, конц.

Принцип метода: метод основан на дегидратации молекулы холестерина под действием

концентрированной серной кислоты с образованием холестерилена, имеющего красную окраску.

- H

холестерин холестерилен

Ход работы: В сухую пробирку наливают 10 капель 1% хлороформного р-ра холестерина и

добавляют равный объем концентрированной серной кислоты (осторожно по стенке пробирки). При

легком встряхивании на границе 2-х слоев жидкости образуется оранжевое кольцо, которое при

стоянии переходит в красное. Нижний слой серной кислоты приобретает зеленую флуоресценцию.

Реакция Либермана - Бурхарда

Реактивы: 1) холестерин, 1% р-р в хлороформе; 2) уксусный ангидрид; 3) серная кислота, конц.

Ход работы: В сухую пробирку наливают 10 капель 1% хлороформного р-ра холестерина,

добавляют 3-5 капель уксусного ангидрида и 1-2 капли концентрированной серной кислоты.

Содержимое пробирки осторожно встряхивают и помещают в баню при температуре 40

С на 1-2

минуты или оставляют при комнатной температуре на 5-10 минут. В присутствии холестерина вначале

появляется красное окрашивание, которое затем переходит в фиолетовое, синее и зеленое. При

незначительном содержании холестерина в растворе сразу появляется зеленое окрашивание.

Количественное определение холестерина

Реактивы: 1) реактив Либермана-Бурхарда; 2) стандартный раствор холестерина, 100мг/100мл

хлороформа.

Принцип метода: В основе количественного определения лежит цветная реакция Либермана-

Бурхарда.

Ход работы: В пробирку (опытная проба) прилить 1,5 мл реактива Либермана-Бурхарда, затем

осторожно по стенке пробирки добавить 0,2 мл сыворотки крови и 0,3 мл хлороформа. Содержимое

пробирки энергично встряхнуть. Пробу оставить на 20 мин для развития окраски.

В другую пробирку (контрольная проба) прилить 1,5 мл реактива Либермана-Бурхарда и 0,5 мл

хлороформа.

Интенсивность зеленого окрашивания в опытной пробе измерить на ФЭКе против контрольной

пробы при длине волны λ = 630-690нм (красный светофильтр) в кювете 0,5 см.

Построение калибровочного графика. В пробирки 1-5 внести стандартный раствор холестерина в

количествах, указанных в таблице, затем в соответствующих количествах добавить хлороформ и

реактив Либермана-Бурхарда. Содержимое пробирок встряхнуть. Через 20 минут измерить

экстинкции на ФЭКе против контрольной пробы.

Таблица 5.

№

пробирк

Количество

стандартного раствора

холестерина, мл

Количество

хлороформа,

мл

Количество

реактива

Либермана-

Бурхарда, мл

Количество

холестерина в

пробе, мг

1 0,1 0,4 1,5 0,1

2 0,2 0,3 1,5 0,2

3 0,3 0,2 1,5 0,3

4 0,4 0,1 1,5 0,4

5 0,5 - 1,5 0,5

На основании полученных результатов построить калибровочный график на миллиметровой

бумаге. По графику найти содержание холестерина в мг в опытной пробе (в 0,2 мл сыворотки).

Произвести пересчет количества холестерина на 1 л сыворотки крови.

5.3. ФОСФОЛИПИДЫ

Основная масса фосфолипидов представлена производными фосфатидной кислоты – фосфатидами

(в основном, фосфатидилхолины (лецитины), фосфатидилэтаноламины (кефалины) и

фосфатидилсерины). Кроме того, в тканях присутствуют фосфатидилинозиты, сфинофосфатиды и

дифосфатидилглицерины, в частности, кардиолипин, который обладает иммуномодуляторными

свойствами. Фосфолипиды содержатся преимущественно в биологических мембранах, являясь их

главным липидным компонентом.

Получение фосфатидилхолинов из яичного желтка

Реактивы: 1) яичный желток; 2) CH

COOH; 3) ацетон; 4) NaOH, 10% р-р; 5) CdCl

, насыщенный

р-р; 6) HCl, 10% р-р; 7) кислый сернокислый К, сухой; 8) Na

, сухой; 9) KNO

, сухой; 10) HNO

10% р-р; 11) молибденовый реактив; 12) H

O, дист.

Ход работы: Помещают в стаканчик приблизительно 1/5 часть одного куриного желтка и

добавляют при перемешивании около 10-15 мл горячего спирта. При охлаждении смесь фильтруют в

сухую пробирку. Если в фильтрате появилась муть, то фильтрование повторяют до получения

совершенно прозрачного раствора.

Осаждение ацетоном

В пробирку наливают 2-3 мл ацетона и по каплям приливают немного полученного фильтрата.

Наблюдается появление мути в ацетоне, что указывает на выпадение холинфосфатидов, которые в

ацетоне не растворимы.

Эмульгирование

К 2-3 мл спиртового раствора добавляют по каплям дистиллированную воду. Наблюдают

образование устойчивой эмульсии фосфатидилхолинов.

Осаждение фосфатидилхолинов хлористым кадмием

При добавлении хлористого кадмия к спиртовому раствору фосфатидилхолинов последние

выпадают в осадок, т.е. образуется соединение их с хлористым кадмием, в котором на 3 частицы

фосфатидилхолинов приходится 4 части хлористого кадмия. Это соединение слабо растворимо.

Ход работы: В сухую пробирку наливают 5 капель спиртового раствора фосфатидилхолинов и

добавляют 1-2 капли насыщенного раствора хлористого кадмия. Выпадает осадок.

Гидролиз фосфатидилхолинов

Ход работы: К оставшемуся спиртовому раствору фосфатидилхолинов добавляют 3-5 мл 10% р-

ра едкого натра и подвергают кипячению в течении 5-10 минут. Происходит гидролитический распад

фосфатидилхолинов с отщепление холина, жирных кислот и глицеринфосфатной кислоты. При

нагревании ощущается запах селедочного рассола или посинение лакмусовой бумажки, характерные

для триметиламина, образующегося из холина. В растворе устанавливают наличие жирных кислот,

глицерина, фосфорной кислоты.

Определение жирных кислот

Ход работы: Раствор разбавляют небольшим количеством воды и подкисляют 10% р-ром HCl,

выпадает осадок свободных жирных кислот. Осадок отфильтровывают, фильтрат нейтрализуют 10 %

р-ром щелочи (на лакмус ) и выпаривают на водяной бане досуха.

Обнаружение глицерина

В части сухого остатка определяют присутствие глицерина по акролеиновой пробе.

Обнаружение фосфора

Ход работы: Часть сухого остатка переносят в фарфоровый тигель и тщательно смешивают с

двух-, трехкратным количеством смеси, состоящей из 2 частей карбоната натрия и 1 части нитрата

калия. Тигель прикрывают крышкой и осторожно нагревают.

Реакция идет бурно, иногда она сопровождается небольшой вспышкой. Сплав осторожно

прокаливают до полного окисления. После охлаждения тигеля серовато-бурую золу растворяют в 10%

р-ре азотной кислоты (добавлять по каплям, растирая палочкой), и в полученном растворе

обнаруживают фосфорную кислоту с помощью молибдата аммония или магнезиальной смеси, для

чего к 2 мл молибденового реактива прибавляют небольшими порциями испытуемый раствор. Смесь

слегка нагревают. Образуется желто-зеленый осадок фосфомолибдата аммония:

12 (NH

)

MoO

+ 24 HNO

= 12 H

MoO

+ 24 NH

+ 12 H

MoO

= H

× 12 MoO

+ 12 H

×12 MoO

+ 3 NH

NO3 = (NH

)

×12 MoO

+ 3 HNO

_______________________________________________________________

12 (NH

)

MoO

+ 21HNO

= 21 NH

+ (NH

)

×12MoO

+ 12H

Результаты опытов и объяснение записывают.

КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ПО ТЕМЕ “ЛИПИДЫ”

1. Биологическое значение и классификация липидов. Напишите формулы и охарактеризуйте

простые липиды: ацилглицерины, стериды, воска.

2. Ацилглицерины, их строение, физико-химические свойства и роль в организме.

3. Строение, физико-химические свойства жирных кислот.

4. Строение фосфолипидов и их свойства.

5. Сфинголипиды. Их строение и свойства.

6. Стеролы и стериды. Наиболее важные биологически активные стериды (гормоны, желчные

кислоты, витамин D).

7. Дайте общую характеристику сложных липидов. Какова их биологическая роль.

Привести формулу триацилглицерина, в состав которого входят олеиновая, стеариновая и

пальмитиновая кислоты. Дать рациональное название

9. Напишите структурную формулу цереброзидов. Дать рациональное название.

10. Напишите формулы, отражающие общее строение сфингомиелинов и ганглиозидов.

11. Напишите структурную формулу сфингозина и дайте его рациональное название.

6. ВИТАМИНЫ И КОФЕРМЕН ТЫ

Витамины – это низкомолекулярные органические вещества различной химической природы,

требующиеся организму в очень небольших количествах (от нескольких мкг до нескольких мг). Они

участвуют практически во всех биохимических и физиологических процессах, составляющих в

совокупности обмен веществ. В отличие от других факторов питания, витамины, как правило, не

являются материалом для биосинтезов или источником энергии. Одни организмы нуждаются в том,

чтобы определенные витамины поступали к ним с пищей, другие наделены ферментными системами,

способными частично или полностью их синтезировать. Например, аскорбиновая кислота

синтезируется у большинства организмов, кроме человека, обезьян, морских свинок и плодоядных

летучих мышей. Поэтому сейчас термин «витамин» применяется для обозначения жизненно важного

вещества и не делается оговорки относительно того, способен ли организм сам его синтезировать или

это вещество должно поступать в готовом виде. Однако с большой степенью достоверности можно

утверждать, что каждый витамин выполняет у всех организмов одни и те же функции.

Существует несколько способов классификации витаминов, все они несовершенны. Наиболее

приемлемая классификация основана на различии в растворимости витаминов, она учитывает их

химическую природу и дает каждому тривиальное и буквенное название. Таким образом, различают:

1) водорастворимые: В

(тиамин), В

(рибофлавин), РР (никотиновая кислота), С (аскорбиновая

кислота), Н (биотин) и др.; 2) жирорастворимые: А (ретинол), D (кальциферол), Е (токоферол) и др.

Сейчас не принято выделять группу витаминоподобных веществ. Липоевая, пангамовая, оротовая,

парааминобензойная кислоты и ряд других веществ считают витаминами. К ним же относят холин и

инозитол, несмотря на то, что последние являются компонентами фосфатидилхолинов,

фосфатидилинозитолов, сфингомиелинов. Большинство водорастворимых витаминов –

предшественники коферментов. Функции жирорастворимых витаминов связаны с процессами

фоторецепции (А), свертывания крови (К), минерального обмена (D) и др.

Для определения витаминов в продуктах питания, органах и тканях растений и животных,

микроорганизмах, сыворотке крови, моче, биопсийном материале человека разработаны

соответствующие физико-химические методы.

6.1. ВОДОРАСТВОРИМЫЕ ВИТАМИНЫ

Качественные реакции на витамин В

(тиамин)

Витамин В

состоит из пиримидинового и тиазолового колец и получил название тиамина,

поскольку содержит серу и азот.

N NH

Реакция окисления

Принцип метода: В щелочной среде тиамин окисляется в тиохром

феррицианидом калия. Тиохром обладает синей флюоресценцией при

ультрафиолетовом облучении раствора.

Химизм реакции следующий:

тиохром

+ 2 K

Fe(CN)

+ 3KOH

CHOH

+ 2 K

Fe(CN)

+ 3KCl

+ 3H

Реактивы: 1) NaOH, 10 % р-р; 2) феррицианид калия, 5 % р-р; 3) сульфаниловая кислота,1 %

р-р; 4) нитрит натрия, 5 % р-р; 5) бикарбонат натрия, 10 % р-р; 6) тиамин (В

), 5% раствор (без

изобутилового спирта).

Ход работы: К 1капле 5 % раствора тиамина прибавляют 5-10 капель 10 % р-ра NaOH, 1-2 капли

5% раствора феррицианида калия и взбалтывают, прогрев флюороскоп 10 минут, наблюдают синюю

флюоресценцию.

Диазореакция

Принцип метода: В щелочной среде тиамин с диазореактивом образует сложное комплексное

соединение оранжевого цвета.

Реактивы: 1) сульфаниловая кислота,1 % р-р; 2) нитрит натрия, 5 % р-р; 3) бикарбонат натрия, 10

% р-р; 4) тиамин (В

), 5% раствор (без изобутилового спирта).

Ход работы: К диазореактиву, состоящему из 5 капель 1% р-ра сульфаниловой кислоты и 5

капель 5 % р-ра нитрита натрия, добавляют 1-2 капли 5 % р-ра тиамина и затем по стенке, наклонив

пробирку, осторожно добавляют 5-7 капель 10 % р-ра бикарбоната натрия. На границе двух жидкостей

появляется кольцо оранжевого цвета.

Качественная реакция на Витамин В

(рибофлавин)

Рибофлавин состоит из изоаллоксазинового ядра и спирта рибитола:

Принцип метода: Окисленная форма витамина В

представляет собой желтое флюоресцирующее

в ультрафиолетовых лучах вещество. Реакция на витамин В

основана на способности его легко

восстанавливаться; при этом раствор витамина В

, обладающий желтой окраской, приобретает сначала

розовый цвет за счет образования промежуточных соединений, а затем обесцвечивается, так как

восстановленная форма витамина В

бесцветна.

Реактивы: 1) хлористоводородная кислота конц.; 2) цинк металлический; 3) витамин В

, 0,025% р-

р (перед определением раствор можно развести в 5 раз).

Ход работы: В пробирку наливают 10 капель раствора витамина В

, добавляют 5 капель

концентрированной хлористоводородной кислоты и опускают зернышко металлического цинка.

Начинается выделение пузырьков водорода, жидкость постепенно розовеет, затем обесцвечивается.

изоаллоксазиновое ядро

рибитол

N N

(CHOH)

--(CHOH)

--CH

+ Zn + 2HCl

(

)

+ ZnCl

рибофлавин окисленный рибофлавин восстановленный

(желтый)

(бесцветный)

Качественная реакция на витамин РР (амид никотиновой кислоты)

Витамин РР является производным пиримидинового ядра.

Принцип метода: Витамин РР при нагревании с раствором ацетата меди образует синий осадок

медной соли никотиновой кислоты, плохо растворимый.

Реактивы: 1) ацетат меди, 5% р-р; 2) витамин РР, 3% р-р в 10% уксусной кислоты.

Ход работы: Перед определением 3% р-р витамина РР следует обязательно взболтать, затем

набирать в пробирку 20 капель и нагреть до кипения; при этом мутный р-р становится прозрачным.

Взболтать 5% р-р ацетата меди, прилить 20 капель к нагретому р-ру витамина РР. Содержимое

пробирки довести до кипения и сразу охладить под струей холодной воды; на дне пробирки выпадет

синий осадок медной соли никотиновой кислоты.

Качественная реакция на витамин В

(пиридоксин)

Группа витамина В

: пиридоксол, пиридоксаль, пиридоксамин, являющиеся производными

пиридина и носящие общее название пиридоксина, обладают активностью витамина В

Принцип метода: Витамин В

при взаимодействии с раствором хлорного железа образует

комплексную соль типа фенолята железа красного цвета.

Реактивы: 1) хлорное железо, 1% р-р; 2) витамин В

, 1% р-р.

Ход работы: К 5 каплям 1% р-ра витамина В

приливают равное количество 1% р-ра хлорного

железа и перемешивают. Развивается красное окрашивание.

Качественная реакция на витамин В

(кобаламин)

Принцип метода: При взаимодействии ионов кобальта с тиомочевиной при нагревнии образуется

роданид кобальта зеленого цвета.

Реактивы: 1) тиомочевина, 10% р-р; 2) серная кислота конц.; 3) р-р витамина В

в ампулах

(можно использовать готовый минерализат; для этого содержимое одной ампулы переливают в

пробирку, приливают 3-5 капель концентрированной серной кислоты и сжигают до обесцвечивания:

по окончании минерализации осторожно добавляют в пробирку 1 мл Н

О).

Ход работы: На беззольный фильтр наносят 2-3 капли раствора тиомочевины и высушивают над

сеткой газовой горелки. После этого наносят на фильтр 1-2 капли минерализата и снова нагревают

фильтр над сеткой. На фильтрате, чаще по краю, появляется зеленое окрашивание,

свидетельствующее о наличии кобальта.

COO

никотиновая кислота никотинамид

пиридоксол пиридоксаль пиридоксамин

Выделение фолиевой кислоты из дрожжей и ее обнаружение

Фолиевая кислота является производным птеридина и содержит парааминобензойную и

глутаминовую кислоты.

Принцип метода: Фолиевая кислота хорошо растворима в 0,1 н. р-ре гидроксида натрия. При

экстрагировании фолиевой кислоты из дрожжей и ультрофиолетовом облучении наблюдается

интенсивно голубая флюоресценция (при концентрации, равной 0,001%).

Реактивы: 1) NaOH, 0,1 н. и 0,005 н. р-ры; 2) ледяная уксусная кислота; 3) перманганат калия,

0,4% р-р; 4) пероксид водорода, 3% р-р; 5) дрожжи пищевые.

Ход работы: 1. Выделение фолиевой кислоты из дрожжей. В ступку помещают 10 г дрожжей,

добавляют 10 мл 0,1 н. р-ра NaOH, 2г кварцевого песка и растирают 5 мин. Затем центрифугируют 15

мин при 3000 об/мин.

К 10 каплям надосадочной жидкости приливают 20 капель ледяной уксусной кислоты (рН 3,0) и

приблизительно 10 капель 0,4% раствора KMnO

так, чтобы розовое окрашивание не исчезло в

течении 10 мин (если окраска исчезла, следует прилить еще несколько капель KMnO

). Через 10 мин

удаляют избыток перманганата калия путем добавления 4-5 капель 3% раствора Н

и приливают

0,005 н. раствор едкого натрия (приблизительно 5 мл) до рН 4,0-4,5 в присутствии индикаторной

бумаги.

2. Определение флюоресцирующей способности фолиевой кислоты. При ультрафиолетовом

облучении фолиевой кислоты в щелочном растворе в флюороскопе наблюдается интенсивно голубая

флюоресценция (если раствор с выделенной фолиевой кислотой поставить в холодильник, то он в

течении нескольких недель сохраняет флюоресцирующую способность).

Качественная реакция на витамин С с красной кровяной солью и хлорным железом

Принцип метода: при добавлении раствора аскорбиновой кислоты или вытяжки из шиповника

(капусты и др.), содержащей аскорбиновую кислоту, смеси растворов железосинеродистого калия

[Fe(CN)

] – красная кровяная соль) и хлорного железа, бурая жидкость окрашивается в синий цвет.

Реакция обусловлена окислением аскорбиновой кислоты и восстановлением железосинеродистого

калия в железистосинеродистый, который образует с хлорным железом берлинскую лазурь.

Реактивы: 1) раствор аскорбиновой кислоты или вытяжка шиповника, 1%; 2) 5% раствор

[Fe(CN)

]; 3) раствор FeCl

; 4) дистиллированная вода.

COH

CHOH

- 2Н

+ 2Н

аскорбиновая кислота дегидроаскорбиновая кислота

COOH

(CH

)

птероивая кислота