Сайфитдинова А.Ф. Двумерная флуоресцентная микроскопия для анализа биологических образцов
Подождите немного. Документ загружается.
Двумерная флуоресцентная микроскопия для анализа биологических образцов 68
2.6. Флуоресцентная гибридизация in situ............................................................ 28
Протокол 2.6.1. Обработка стекол аминопропилтриэтоксисиланом .. 29
Протокол 2.6.2. Получение препаратов метафазных хромосом из
культуры клеток фибробластов .................................................................
29
Протокол 2.6.3. Фиксация тканей для приготовления парафиновых
срезов................................................................................................................
30
Протокол 2.6.4. Предобработка препаратов рнказой А.......................... 31
Протокол 2.6.5. Предобработка препаратов пепсином........................... 31
Протокол 2.6.6. Предобработка препаратов протеиназой К ................. 31
Протокол 2.6.7. Постфиксация препаратов перед гибридизацией....... 32
Протокол 2.6.8. Мечение ДНК-зондов методом ник-трансляции......... 33
Протокол 2.6.9. Оптимизация размеров меченых фрагментов ............ 34
Протокол 2.6.10. Олигомечение ДНК со случайными праймерами .... 35
Протокол 2.6.11. Мечение зондов методом ПЦР...................................... 36
Протокол 2.6.12. Очистка ПЦР продукта ................................................. 37
Протокол 2.6.13. Использование вырожденных праймеров для
получения первичного амплификата (DOP-ПЦР) ..................................
38
Протокол 2.6.14. Получение меченых РНК зондов ................................. 39
Протокол 2.6.15. Оценка эффективности мечения зонда....................... 40
Протокол 2.6.16. Растворение зонда в гибридизационном буфере....... 42
Протокол 2.6.17. Отмывка препаратов после гибридизации................ 44
Протокол 2.6.18. Иммунохимическая детекция гибридизовавшегося
зонда .................................................................................................................
44
Таблица 2.2. Схема M-FISH на хромосомах человека с 6
флуорохромами ..............................................................................................
47
Таблица 2.3. Схема идентификации хромосом человека методом
репробинга с 3 флуорохромами ..................................................................
47
2.7. Флуоресцирующие белки................................................................................ 48
Таблица 2.4. Список клонированных флуоресцирующих белков ....... 49
Таблица 2.5. Некоторые варианты флуоресцирующих белков на
основе GFP ......................................................................................................
50
ГЛАВА 3. РЕГИСТРАЦИЯ И АНАЛИЗ ФЛУОРЕСЦЕНТНЫХ ИЗОБРАЖЕНИЙ .......................... 53
3.1. Фотографирование........................................................................................... 53
3.2. Цифровая система фиксации изображения ................................................... 54
3.3. Методы хранения и обработки цифровых изображений ............................. 56
ПРИЛОЖЕНИЯ ...................................................................................................................... 59
Приложение 1. Спектры флуорохромов .............................................................. 59
Приложение 2. Буферные растворы .................................................................... 66
1х PBS (ph 6,0)................................................................................................. 66
1х PBS (ph 6,8-7,2)........................................................................................... 66
20x SSC (ph 7,0)............................................................................................... 66
Ацетатный буфер (ph 4,2)............................................................................. 66
Фосфатный буфер Зёренсена (ph 5,5)......................................................... 66
Фосфатный буфер Зёренсена (ph 6,8)......................................................... 66
Буфер Макильвейна ph (6,8-7,0) ................................................................. 66
Буфер Макильвейна (ph 7,3)........................................................................ 66
ОГЛАВЛЕНИЕ....................................................................................................................... 67
Алсу Фаритовна Сайфитдинова
Учебно-методическое пособие
ДВУМЕРНАЯ ФЛУОРЕСЦЕНТНАЯ МИКРОСКОПИЯ ДЛЯ АНАЛИЗА
БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБРАЗЦОВ
Alsu Saifitdinova
2-D FLUORESCENCE MICROSCOPY FOR ANALYSIS OF BIOLOGICAL SAMPLES
Обложка: А. Ф. Сайфитдинова
Компьютерная верстка: А.О. Доморацкий
Издательство СОЛО
Санкт-Петербург, Невский пр. 78
e-mail: solo@1gb.ru , www.solo-press.spb.ru, тел.: 929-43-00
Отпечатано копировально-множительным участком отдела обслуживания учебного
процесса физического факультета СПбГУ.
Приказ № 571/1 от 14.05.03.
Подписано в печать 18.04.08 с оригинал-макета заказчика.
Ф-т 30x42/4, Усл. печ. л. 4. Тираж 100 экз., Заказ № 816/с
198504, СПб, Ст. Петергоф, ул. Ульяновская, д. 3, тел. 929-43-00.
«...Книга А.Ф.Сайфитдиновой представляет уникальное
собрание разнообразных методик, которые в настоящее
время являются наиболее актуальными в клеточной
биологии, иммунологии и молекулярной цитогенетике...»
Заведующая лабораторией
Структуры и функции хромосом
Биологического НИИ СПбГУ,
д.б.н., проф. Е.Р.Гагинская
«...Отдельного внимания заслуживает замечательная
подборка молекулярных и цитологических методов, для
которых в пособии приведены подробные протоколы. Эта
часть превращает подготовленное пособие в полезный
справочник, который, несомненно, найдет свое место на
рабочем столе не только учебных, но и исследовательских
лабораторий...»
Заведующий лабораторией
Морфологии и функции клеточных структур
Института цитологии и генетики СО РАН,
д.б.н., Н.Б.Рубцов
В оформлении обложки использована микрофотография
хромосом типа ламповых щеток зяблика Fringilla coelebs,
окрашенных антителами У12 к Sm-эпитопу мяРНП.
Визуализация реакции антителами, конъюгированными с
FITC - зеленая флуоресценция. Хромосомы дополнительно
окрашены йодистым пропидием - красная флуоресценция.
ISBN 978-5-98340-207-2
9 785983 402072 >