Для исследования стационарных свойств биологических объек-
тов широко используют разнообразные методы, в том числе абсорб-
ционную спектрофотометрию.
Существуют
различные модификации
классического абсорбционного метода, включающие дифференци-
альную, производную и поляризационную абсорбционную спектро-
фотометрию, измерение оптической активности (оптического враще-
ния,
эллиптичности, кругового дихроизма, двулучепреломления)
и
т. п. Регистрируемые при этом спектральные параметры поглоще-
ния
(положение полос, их знак, интегральная интенсивность в спект-
ре и полуширина)
дают
информацию о качественном составе и коли-
чественном соотношении компонентов биологической системы, их
состоянии
и структурной организации.
Однако несмотря на успешное развитие спектрофотометрической
аппаратуры, изучение спектральных свойств биологических объек-
тов встречает ряд трудностей. Некоторые из них имеют методичес-
кий
характер и связаны со специфическими оптическими свойства-
ми
биологических объектов (сильное светорассеяние, слишком боль-
шая
или, наоборот, слишком малая величина оптической плотности,
светочувствительность образцов, гетерогенность исследуемого пре-
парата и т. п.).
Существуют
различные методические приемы для
преодоления указанных трудностей, основанные на применении
как
стандартной, так и специально разработанной аппаратуры с вы-
сокочувствительными светоприемниками — фотоумножителями, ин-
тегрирующими сферами или компенсирующими светорассеяние плас-
тинками
и т. д. В ряде
случаев
светорассеяние частично снимается
добавлением к объекту веществ, увеличивающих показатель прелом-
ления
среды (например, сахарозы, глицерина), что приводит к
уменьшению разницы показателей преломления буферного раствора
и
рассеивающих частиц (митохондрий, хлоропластов, клеток водо-
рослей или бактерий и
т.п.).
В некторых
случаях
удается
ввести
поправки
на светорассеяние
путем
экстраполяции из спектральной
области, где поглощение практически
отсутствует,
на область поло-
сы поглощения.
В спектр поглощения биологического объекта (представляю-
щего собой многокомпонентную систему) вносят вклад различные
химически индивидуальные компоненты. Более того, каждый компо-
нент системы может находиться в различных модификациях (кон-
формационных состояниях, ассоциатах,
агрегатах
и т. п.), отличаю-
щихся своими спектральными свойствами (количеством полос по-
глощения, их интенсивностью, полушириной и положением в спект-
ре).
Вследствие указанных причин измеряемая спектральная кривая
представляет собой
результат
наложения (суперпозиции) кривых
поглощения многих компонентов и обычно имеет сложную форму.
При
этом максимумы, характерные для индивидуальных компонен-
тов системы,
могут
либо вообще не обнаруживаться на суммарной
кривой,
либо проявляться в виде слабовыраженных выступов,
«плеч»,
перегибов и т. п.