(Однако в природе наблюдаются случаи, когда чужеродная ДНК (вируса или
бактериофага) включается в генетический аппарат клетки и с помощью её
обменных механизмов начинает синтезировать "свой" белок. Учёные
исследовали особенности внедрения чужеродной ДНК и использовали как
принцип введения генетического материала в клетку.)
Важное открытие - обнаружение в бактериальных клетках, помимо
главной ее хромосомы, внехромосомных кольцевых молекул ДНК -
плазмид. Плазмиды можно извлечь из одной клетки и перенести в другую.
Плазмиды можно разрезать, фрагменты сращивать друг с другом, а затем
такие комбинированные плазмиды вводить в клетки. Поскольку плазмидная
ДНК представляет собой замкнутую кольцевую молекулу, кольцо нужно
сперва разорвать таким образом, чтобы свободные концы были в химическом
отношении реакционноспособными, пригодными для последующего
соединения. Достичь этого удается либо простым механическим путем
(например, сильным встряхиванием), либо с помощью различных
ферментов, называемых нуклеазами (рестриктазами). Затем фрагменты
ДНК соединяют с помощью лигаз - ферментов, исправляющих повреждения
в ДНК и сшивающих (склеивающих) концы ее разорванных нитей.
Рестриктазы-ферменты - способны расщеплять ДНК в строго
определенном месте с образованием "липких" концов у образуемых
фрагментов. Иными словами, с помощью рестриктаз ген можно разрезать на
кусочки - нуклеотиды, а затем с помощью лигаз такие кусочки можно
"склеивать", соединять в иной комбинации, конструируя новый ген.
Осуществление введение генных конструкций в бактериальную клетку.
Сначала плазмиды режут рестриктазами и получают односпиральные
концы, комплементарные концам генов, проводят гибридизацию гена и
плазмиды в пробирке, а затем рекомбинантную плазмиду вводят в клетку.
Плазмиды содержат маркерный ген, например ген, сообщающий клетке
устойчивость к определенному антибиотику. .
В рекомбинантных клетках плазмида участвует в процессах репликации,