Лысак В.В. Микробиология

Подождите немного. Документ загружается.

обитания, но и причиняют ему вред, вызывая те или иные заболевания,

т. е. паразитизм сопровождается развитием патологических процессов.

Микроорганизмы, вызывающие заболевания, называются патогенными.

Все паразитические микроорганизмы характеризуются определенной

степенью специфичности по отношению к хозяину. Например, брюшным

тифом болеют только люди; пневмококки паразитируют на мышах и на

людях, но патогенез заболевания различается

в зависимости от организ-

ма.

Большинство патогенов – паразиты, но встречаются и патогенные са-

профиты, не способные проникать в живые ткани и размножающиеся в

отмерших тканях. Примером таких бактерий являются возбудители стол-

бняка (Clostridium tetani) и ботулизма (Clostridium botulinum). Для разви-

тия заболевания достаточно, чтобы в организм попал только яд, синтези-

руемый ими.

Способность микроорганизма вызывать заболевание называется па-

тогенностью. Патогенность – важное в таксономическом отношении

свойство, поскольку оно является видовым признаком и качественной

характеристикой болезнетворного микроорганизма. Однако отдельные

штаммы внутри вида бактерий могут сильно различаться по степени па-

тогенности. Степень патогенности называется вирулентностью, т. е.

вирулентность является количественным проявлением патогенности. В

соответствии с этим

вирулентность – признак штамма, а не вида; можно

говорить о высоковирулентном, низковирулентном и даже авирулентном

штамме патогенных бактерий. За единицу измерения вирулентности

приняты минимальная летальная доза (МЛД) и LD

Минимальная летальная доза – наименьшее число патогенных мик-

роорганизмов, способное вызвать гибель подопытного лабораторного

животного. LD

– количество патогенных микроорганизмов, способное

вызывать гибель 50 % экспериментально зараженных подопытных жи-

вотных.

Вирулентность определенного штамма патогенного микроорганизма

определяется рядом факторов, из которых наибольшее значение имеют

инвазивность – способность проникать и распространяться в организме

хозяина, агрессивность – способность выживать в организме, размно-

жаться и поражать и токсигенность – способность синтезировать ток-

сины – высокоспецифические ядовитые вещества,

повреждающие, уби-

вающие клетки или нарушающие клеточные процессы макроорганизма в

малых дозах.

Вклад инвазивности микроорганизма в его повреждающее действие

на макроорганизм может быть самым разнообразным. Для некоторых

278

микроорганизмов он незначителен, так как они настолько токсичны, что

даже местная инфекция приводит к образованию и диффузии в организ-

ме хозяина такого количества токсина, которое оказывается смертель-

ным. Классический пример заболевания данного типа – дифтерия. Воз-

будитель Corynebacterium diphtheriae размножается в тканях глотки и

образует диффундирующий токсин, который поражает практически все

ткани организма

. Другие микроорганизмы оказывают свое повреждаю-

щее действие лишь при интенсивном размножении во многих тканях. К

таким заболеваниям относится сибирская язва. Возбудитель этого забо-

левания Bacillus anthracis обнаруживается в крови больных в огромном

количестве.

Инвазивность обеспечивается адгезией и продукцией веществ, спо-

собствующих проникновению микробов в макроорганизм. Под адгезией

понимают способность микроорганизма адсорбироваться (

или прили-

пать) на чувствительных клетках. Большинство инфекций начинается на

слизистых оболочках дыхательной, пищеварительной или мочеполовой

системы. Взаимодействие патогенов и слизистой оболочки высокоспе-

цифично, т. е. микроорганизм не адгезируется на всех эпителиальных

клетках в равной степени. Существуют комплементарные молекулы на

поверхности клеток возбудителя и хозяина. Роль рецепторов у бактерий

играют ворсинки

и жгутики, тейхоевые кислоты (у грамположительных

бактерий), липопротеины и липополисахариды (у грамотрицательных

бактерий). Клетки макроорганизма также обладают довольно сложным

рецепторным аппаратом. Например, в кишечнике энтеробактерии «при-

липают» к гликопротеиновому покрову ворсинок клеток энтероцитов –

гликокаликсу. При этом энтеропатогенные кишечные палочки, вызы-

вающие колиэнтериты у детей, а также холерные вибрионы, взаимодей-

ствуя

с микроворсинками энтероцитов, колонизируют их, размножаясь

на поверхности данных образований. Шигеллы и дизентериеподобные

кишечные палочки, некоторые сальмонеллы в процессе адгезии изменя-

ют микроворсинки энтероцитов и проникают в клетку, где происходит

их размножение.

Патогенные микроорганизмы проникают в организм с помощью фер-

ментов гидролаз, повышающих проницаемость тканей. Хорошо изучены

следующие ферменты инвазивности:

гиалуронидаза – расщепляет гиалуроновую кислоту, входящую в

состав соединительной ткани и обеспечивающую ее прочность и непро-

ницаемость для микробов. Обнаружена у многих патогенных микроорга-

низмов: у палочек газовой гангрены, стафилококков, стрептококков, у

возбудителей дифтерии, бруцеллеза и др.

279

2) коллагеназа – разрушает тканевый белок коллаген и вызывает рас-

пад мышц; обнаружена у возбудителей газовой гангрены и др.;

3) фибринолизин – растворяет сгустки фибрина, которые образуются

в крови в процессе воспалительных реакций и препятствуют распростра-

нению микроорганизмов. Продуцируется стрептококками (стрептокина-

за), стафилококками и другими микроорганизмами (стрептокиназу ис-

пользуют для лечения тромбозов);

4) нейраминидаза –

разрывает кетосвязь между нейраминовой (сиало-

вой) кислотой и другими моносахаридами, входящими в состав глико-

протеинов, гликолипидов, полисахаридов. Обнаружена у бактерий, раз-

множающихся на поверхности эпителия, например у холерного вибрио-

на.

Вирулентность микроорганизмов определяется также агрессивно-

стью штамма, что зависит от синтеза ферментов:

• коагулазы, свертывающей плазму крови;

• уреазы, гидролизирующей мочевину с образованием аммиака;

• ДНКазы, вызывающей деполимеризацию ДНК;

• декарбоксилаз аминокислот.

Агрессивные свойства обеспечиваются также химическими вещест-

вами, входящими в состав капсул. Капсулы предохраняют микроорга-

низмы от взаимодействия с антителами и подавляют фагоцитарную ре-

акцию как в микробном очаге, так и далеко за его пределами. Капсуль-

ные микроорганизмы дольше сохраняются в организме, чем бескапсуль-

ные, и вызывают более тяжелые заболевания

Патогенные стрептококки и стафилококки способны продуцировать

особые агрессины – лейкоцидины. С помощью лейкоцидинов они раз-

рушают лейкоциты, в которых осуществляется фагоцитоз. Масса разру-

шенных лейкоцитов образует гной, вследствие чего эти бактерии полу-

чили название гноеродных.

Однако самым важным фактором вирулентности является способ-

ность микробов синтезировать ядовитые продукты метаболизма – токси-

ны. Попадая

в ток крови, они разносятся по организму и оказывают на

него повреждающее, вплоть до летального, действие. Бактериальные

токсины делят на две группы – экзотоксины и эндотоксины. Экзотокси-

ны продуцируются клеткой и выделяются в окружающую среду. Эндо-

токсины, напротив, прочно связаны с клеткой и обнаруживаются только

после ее разрушения.

Экзотоксины называют истинными

токсинами. Они впервые были

обнаружены в 1890 г. у двух патогенных для человека микроорганизмов:

Corynebacterium diphtheriae – возбудителя дифтерии (дифтерийная па-

280

лочка) и Clostridium tetani – возбудителя столбняка (столбнячная палоч-

ка). Для доказательства продукции экзотоксинов в обоих случаях были

поставлены одинаковые эксперименты: бактерии выращивали в пита-

тельной среде in vitro и бесклеточный фильтрат, приготовленный из вы-

росшей культуры, вводили опытным животным. Животные погибали, а

при их вскрытии обнаруживали поражения, характерные для соответст-

вующей естественной инфекции

. Токсичные вещества оказались чувст-

вительными к нагреванию и, как выяснилось позже, являлись белками.

Поскольку они присутствуют в среде и не связаны с бактериальными

клетками, их назвали экзотоксинами.

Впоследствии с помощью сходных методов было показано, что экзо-

токсины, оказывающие специфическое действие на организм, образуют-

ся и другими патогенными бактериями. Была также

установлена их роль

в возникновении соответствующих болезней. Однако у многих патоген-

ных бактерий образования экзотоксинов не обнаружено.

По химической природе экзотоксины принадлежат к белкам. Они

термолабильны и разрушаются при температуре 60–80 ºС в течение 10–

60 мин. Легко разрушаются под влиянием пищеварительных ферментов.

При обработке формалином (0,3–0,4 %) при температуре 38–40 ºС экзо-

токсины обезвреживаются, но

сохраняют при этом антигенность. Такие

лишенные активности экзотоксины называются анатоксинами. Они ис-

пользуются как вакцины для профилактики столбняка, дифтерии и дру-

гих инфекционных заболеваний, возбудители которых выделяют экзо-

токсины. При парентеральном введении анатоксинов в организме выра-

батываются антитоксины (антитела), специфически нейтрализующие

соответствующие яды (экзотоксины).

Гены, определяющие синтез бактериальных экзотоксинов, во многих

случаях локализованы на плазмидах или в составе профагов, а не в бак-

териальной хромосоме. В настоящее время установлено, что дифтерий-

ный и столбнячный токсины, а также токсин ботулизма детерминируют-

ся генами профагов. Патогенные бактерии продуцируют их лишь в том

случае, когда в хромосоме находится профаг. Синтез некоторых токси-

нов, продуцируемых

штаммами Escherichia coli и других энтеробакте-

рий, детерминируется плазмидными генами (Ent-плазмиды). Во всех

этих случаях утрата профага или плазмиды делает клетку нетоксигенной.

Экзотоксины высокотоксичны, их действие направлено на разруше-

ние определенных субклеточных структур или на нарушение определен-

ных клеточных процессов. Механизм действия многих экзотоксинов до

сих пор полностью не расшифрован, хотя для

некоторых из них установ-

лена и мишень, и характер действия. Например, α-токсин одного из воз-

281

будителей газовой гангрены (Clostridium perfringens) является гидроли-

тическим ферментом лецитиназой. Лецитин – важный липидный компо-

нент клеточных и митохондриальных мембран, его гидролиз под дейст-

вием α-токсина приводит к разрушению мембран самых разнообразных

клеток, что может быть первичной причиной разрушения тканей при га-

зовой гангрене.

Дифтерийный токсин, синтезируемый Corynebacterium diphtheriae,

образует комплекс с НАД

, который взаимодействует с одним из факто-

ров трансляции белка (трансферазой II) в рибосомах, в результате чего

происходит нарушение синтеза белка и клетка хозяина погибает.

Столбнячный и ботулинический токсины относятся к нейротоксинам,

которые поражают нервную систему и вызывают паралич мышц. При

ботулизме токсин поражает периферическую нервную систему, при

столбняке – центральную нервную систему.

В норме мышцы сокраща-

ются и расслабляются попеременно. Столбнячный токсин блокирует им-

пульс расслабления, в результате чего сокращаются сразу все мышцы,

ботулинический действует за счет общего расслабления мышц. В обоих

случаях наступает смерть от паралича дыхания.

Холерный токсин проникает в кровь, активирует мембранную адени-

латциклазу, что вызывает резкое увеличение концентрации цАМФ

клетке; это в свою очередь приводит к тому, что ионы Na

не проникают

в кровь. В кишечнике создаются гипертонические условия и вода посту-

пает из тканей в кишечник. Потеря тканевой жидкости приводит к аци-

дозу и шоку. Если своевременно не восполнить потерю жидкости и ио-

нов Na

, циркулирующих в организме, может наступить смерть.

Токсин палочки чумы ингибирует респираторную активность мито-

хондрий, что приводит к гибели клетки.

Эндотоксинами являются комплексы липополисахаридов с белками

(липополисахаридпротеиновый комплекс), находящиеся в наружных

слоях клеточных стенок грамотрицательных бактерий. Они вырабатыва-

ются возбудителями брюшного типа, паратифов, дизентерии и рядом

других энтеробактерий (в том числе

патогенными штаммами кишечной

палочки).

Эндотоксины термостабильны, выдерживают кипячение и автоклави-

рование при температуре 120 ºС в течение 30 мин, под действием форма-

лина и температуры обезвреживаются частично, т. е. анатоксины из них

не образуются. Действие эндотоксинов неспецифично и при введении в

организм они всегда вызывают резкое повышение температуры. В липо-

полисахаридпротеиновом комплексе

за токсигенность и пирогенность

(повышение температуры) отвечает липополисахаридная часть молеку-

282

лы, а белковый фрагмент только за антигенные свойства. Эндотоксины –

менее токсичны, чем экзотоксины.

Иногда эндотоксины вызывают воспалительные реакции, которые

проявляются в увеличении проницаемости капилляров и разрушении

клеток. При попадании значительного количества эндотоксинов в крово-

ток возможен эндотоксиновый шок, обычно заканчивающийся смертью

больного. Бактериальные эндотоксины проявляют сравнительно слабое

иммуногенное действие, и иммунные

сыворотки не способны полностью

блокировать их токсические эффекты.

Следует отметить, что имеются микроорганизмы, которые образуют

экзо- и эндотоксины (холерный вибрион, гемолитические штаммы ки-

шечной палочки и др.).

Болезни растений, вызываемые бактериями, называются бактерио-

зами. Пути проникновения фитопатогенных бактерий в растение раз-

личны. В основном они проникают через раневую поверхность, устьица,

чечевички, либо с помощью переносчиков. Выделяют несколько основ-

ных типов бактериозов:

• увядания – поражение проводящей и корневой систем. Возбудитель

локализуется и развивается в проводящих сосудах, вызывая механиче-

скую закупорку. Увядание томатов, или «бактериальный рак», вызывают

бактерии Clavibacter michiganensis;

• гнили – размягчение и разрушение тканей растений. «Мокрые», или

«мягкие», гнили вызывают, например, фитопатогенные бактерии Erwinia

carоtovora;

• пятнистости, или некрозы, – отмирание листовой пластинки в

местах поражения бактериями. Некрозы плодовых деревьев вызывают

бактерии Pseudomonas syringae;

• гипертрофии – усиленное деление клеток и неправильное разрас-

тание тканей, при которых возникают опухоли у растений. К их возбуди-

телям в первую очередь следует отнести Agrobacterium tumefaciens, ви-

рулентные штаммы которых содержат в клетках Ti-плазмиды.

Основными факторами вирулентности фитопатогенных бактерий яв-

ляются:

1) продукция пектолитических ферментов (пектиназ, протопекти-

наз, полигалактуроназ), разрушающих пектиновые вещества

, из которых

состоит межклеточное пространство растительной ткани. Это приводит к

мацерации, или распаду, растительной ткани и образованию «мокрой»

гнили;

2) выделение целлюлолитических ферментов (целлюлаз, гемицел-

люлаз), разрушающих клеточные стенки растений;

283

3) образование токсинов, воздействующих на восприимчивые расте-

ния, и нарушающих соответствующие ферментативные системы, обмен

веществ и вызывающих отмирание либо увядание пораженных тканей

или органов. Токсины фитопатогенных бактерий – вещества различной

химической природы. Токсин, синтезируемый бактериями Pseudomonas

syringae, является низкомолекулярным пептидом, ингибирущим синтез

глутаминсинтетазы, которая необходима для образования хлорофилла. В

результате на листьях появляются

пятнистости. В качестве токсинов мо-

гут выступать полисахариды и гликопептиды слизистых слоев бактерий;

4) синтез фитогормонов, стимулирующих разрастание тканей расте-

ния с образованием опухолей, например, гетероауксин индолилуксусная

кислота, синтезируемая бактериями Agrobacterium tumefaciens. Опухоли

могут вызывать сжатие проводящих сосудов с последующей гибелью

растения. К фитогормонам относится также гиббереллин, который син-

тезируется бактериями и

вызывает ненормальное удлинение побегов.

Растения имеют определенные механизмы, противодействующие за-

ражению и размножению в них фитопатогенов. Основным из них являет-

ся наличие плотного поверхностного барьера у растений. Кутикула, по-

крывающая эпидермис всех наземных стеблей и листьев травянистых

растений, обеспечивает практически полную защиту от фитопатогенных

бактерий. Поэтому чаще всего проникновение фитопатогенов

происхо-

дит через пораженные участки. Защитным механизмом растений являет-

ся и выделение клеточного сока, имеющего кислую реакцию. Растения

также продуцируют вещества, подавляющие или тормозящие рост фито-

патогенов. Наиболее активными из них являются фенолы. В тканях рас-

тений фенолы встречаются в виде эфиров и гликозидов. Это пирокате-

хин, гидрохинон, пирогаллол, фенольные

спирты, альдегиды и кислоты.

Важное значение в устойчивости растений к поражению бактериями

имеют и фитонциды – вещества различной химической природы, лету-

чие или растворенные в цитоплазме клеток растения, обладающие широ-

ким антибиотическим действием.

В развитии устойчивости растений к заболеваниям большое значение

имеют фитоалексины, которые образуются в растении только в процес-

се заболевания

, т. е. при внедрении или контакте микроорганизма с клет-

ками растения. Примером фитоалексина является ришитин, синтези-

рующийся в клубнях картофеля, сдерживающий распространение «мок-

рой» гнили и уменьшающий поражение.

Фитопатогенные микроорганизмы причиняют большой ущерб сель-

скому хозяйству, вызывая снижение урожая и ухудшение его качества.

Среди заболеваний растений почти половину составляют бактериозы.

284

настоящее время известно свыше 200 экономически важных болезней

растений, которые вызываются бактериальными возбудителями. Для

борьбы с болезнями растений проводятся следующие мероприятия:

• выведение новых устойчивых сортов;

• чередование сельскохозяйственных культур в расчете на то, что

специализированные паразиты при длительном нахождении в почве без

растения-хозяина гибнут;

• карантинные мероприятия – контроль за качеством семян, особенно

импортных;

• применение ядохимикатов для уничтожения болезнетворных мик-

роорганизмов;

• использование микробов-антагонистов или препаратов антибиоти-

ков;

• повышение устойчивости растений путем применения микроэле-

ментов;

• удаление из растения пораженных мест; выкорчевка больных де-

ревьев и т. д.;

• применение здорового посадочного материала (клубни, корневища

и т. д.);

• борьба с переносчиками бактерий. Если насекомые являются пере-

носчиками бактерий или облегчают их проникновение в растения (на-

пример, листовые тли), борьба с ними может существенно сдержать рас-

пространение болезни.

285

Глава 9. ХАРАКТЕРИСТИКА НЕКОТОРЫХ

ГРУПП БАКТЕРИЙ

Материал, изложенный в этой главе, сгруппирован и рассмотрен та-

ким образом, что в одних случаях характеризует отдельные таксономи-

ческие группы бактерий, а в других – определенные физиологические их

группы. Это обусловлено тем, что среди бактерий нельзя выделить наи-

более важные или наиболее полезные виды. Все известные, а тем более

еще не изолированные

штаммы представляют существенный научный и

практический интерес, выполняют свои функции и занимают свою эко-

логическую нишу.

9.1. Фототрофные бактерии

Физиологическая группа фотосинтезирующих прокариотических ор-

ганизмов представлена пурпурными и зелеными бактериями, большой

группой цианобактерий и недавно обнаруженными организмами – ге-

лиобактериями и прохлорофитами. На основании использования энергии

света в эту группу могут быть включены и галобактерии. Преобразова-

ние световой энергии в энергию химических связей может осуществ-

ляться при фотосинтезе трех типов:

• с помощью бактериохлорофиллов без выделения молекулярного

кислорода (бескислородный, или аноксигенный, фотосинтез). Этот тип

фотосинтеза осуществляют пурпурные и зеленые бактерии, гелиобакте-

рии;

• зависимого от наличия хлорофилла, сопровождающегося выделе-

нием молекулярного кислорода (кислородный, или оксигенный, фото-

синтез). Кислородный фотосинтез, связанный со способностью исполь-

зовать в качестве донора электронов молекулы воды, присущ большой

группе цианобактерий и прохлорофитам;

• с помощью белка бактериородопсина, ковалентно связанного с

каротиноидом ретиналем (бесхлорофилльный фотосинтез). Этот процесс

286

не сопровождается выделением молекулярного кислорода. Он характе-

рен для галобактерий, которые относятся к архебактериям.

Способность организмов существовать за счет энергии света в пер-

вую очередь связана с наличием у них специфических пигментов.

Набор пигментов специфичен и постоянен для определенных групп

фотосинтезирующих прокариот. Соотношения же между отдельными

типами пигментов колеблются в зависимости

от вида и условий культи-

вирования. В целом фотосинтетические пигменты прокариот обеспечи-

вают поглощение света с длиной волны 300–1100 нм. Все фотосинтети-

ческие пигменты относятся к двум химическим классам соединений: 1)

пигменты, в основе которых лежит тетрапиррольная структура (хлоро-

филлы, фикобилипротеины); 2) пигменты, основу которых составляют

полиизопреноидные цепи (каротиноиды).

У фотосинтезирующих прокариот известно

более десяти видов хло-

рофиллов. Хлорофиллы прокариот, осуществляющих бескислородный

фотосинтез (пурпурные и зеленые бактерии, гелиобактерии), получили

общее название бактериохлорофиллов. В настоящее время идентифи-

цировано шесть основных видов бактериохлорофиллов: а, b, с, d, е и g.

Клетки пурпурных бактерий в зависимости от вида содержат только од-

ну форму бактериохлорофилла – либо а, либо

b. Клетки зеленых бакте-

рий всегда содержат два типа бактериохлорофилла – основной и минор-

ный. В зависимости от вида бактерий основным может быть бактерио-

хлорофилл c, d или e. Роль основного бактериофилла заключается в по-

глощении света. Минорным пигментом у всех зеленых бактерий являет-

ся бактериохлорофилл а; он и входит в

состав фотохимических реакци-

онных центров. Необычный бактериохлорофилл g с максимумом погло-

щения 790 нм обнаружен у облигатных анаэробных фотосинтезирующих

бактерий Heliobacterium chlorum и Heliobacillus mobilis, выделенных в

группу гелиобактерий.

Прокариоты, фотосинтез которых сопровождается выделением моле-

кулярного кислорода (цианобактерии и прохлорофиты), содержат хло-

рофиллы, характерные для фотосинтезирующих эукариотических орга-

низмов. У цианобактерий – это хлорофилл а

; в клетках прохлорофит –

хлорофиллы а и b.

К фотосинтетическим пигментам относятся и фикобилипротеи-

ны – красные и синие пигменты, содержащиеся только у одной группы

прокариот – цианобактерий. Хромофорная группа пигмента называется

фикобилином. Различают два типа хромофорных групп: фикоцианоби-

лин и фикоэритробилин (рис. 83)

287