Лабораторная работа - Биохимия мочи
Подождите немного. Документ загружается.
2.1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПЛОТНОСТИ.
Сущность метода.
Плотность - это масса единицы объема:
V
m
(г/см
3
; кг/м
3
)
где р - плотность жидкости
m - масса жидкости, г или кг
V - объем жидкости, см
3
или м
3
.
Плотность мочи складывается из плотности ее составных частей и отражает их
количественное соотношение. Значение плотности мочи зависит от температуры. Так,
при повышении температуры объем жидкости благодаря усилению скорости
броуновского движения и ослаблению межмолекулярных воздействий, что приводит к
уменьшению плотности. При охлаждении наблюдается обратная картина. Поэтому
величину плотности всегда приводят к 20°С, внося поправку в результаты определения.
Плотность воды при 4°С и давлении 760 мм рт. столба - 1 г/см
3
. Для
определения плотности существуют различные методы: пикнометрический, метод с
применением гидростатических весов и ареометрический - наиболее простым и
быстрым.
Ареометрический метод основан на законе Архимеда, согласно которому на
тело, погруженное в жидкость, действует выталкивающая сила (Р), направленная вверх
и равная весу вытесненной им жидкости:
gVF
(Н)
где: V – объем ареометра, м3.
ρ – плотность жидкости, кг/м3
g – ускорение свободного падения, м/с2
Очевидно, что чем ниже плотность жидкости, тем меньше выталкивающая
сила, действующая на ареометр, и тем глубже он погружается в жидкость.
Ареометр состоит из стеклянной полой трубки, в нижней части которой
помещены металлические шарики. Верхняя часть трубки сужена и имеет деления. В
зависимости от массы металлических шариков ареометры имеют различные
диапазоны измерения.
Для определения плотности мочи используют ареометры - урометры с
диапазоном измерения от 1,010 до 1,075 г/см
3
.
Ход работы
В сухой цилиндр вместимостью 100 мл (см
3
) наливают осторожно по стенке,
чтобы не образовывалась пена, около 80-85 см
3
мочи. Затем в мочу опускают сухой и
чистый урометр, диаметр которого должен быть меньше диаметра цилиндра на 1 см.
Легким толчком по верхушке урометра заставляют его совершить несколько
колебательных движений вниз и вверх.
После остановки урометра снимают показания плотности с точностью до
половины деления. Отсчет производят по нижнему краю мениска, который должен
находиться на уровне глаза.
Урометр достают из цилиндра, ополаскивают дистиллированной водой,
вытирают и помещают в специальный пенал.
Измеряют температуру мочи в цилиндре. Если температура мочи не совпадает с
указанной на урометре, следует внести поправку: на каждый 1 град. Выше - к
показанию урометра прибавляют 0,0003, на каждый 1 град. Ниже - вычитают по
0,0003.
Обработка результатов
Плотность мочи рассчитывают по формуле (2.1.3), если температура мочи была
выше 20°С, и по формуле (2.1.4), если температура мочи была ниже 20.
0003.0)20(
0003.0)20(
20
20
t
t
t
t
(г/см3)
где р
20
- плотность мочи при 20 град. С (г/см
3
);
р
t
- плотность мочи при заданной температуре (г/см
3
);
t - температура исследуемой мочи (° С).
2.2. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ АММИАКА [7]
Сущность метода
Метод основан на способности аммонийных солей реагировать с
формальдегидом с выделением соответствующих кислот. Например:
4NН
4
С1 +О=СН
2
→ N
4
(СН
2
)
б
+6 НОН+4НС1
формальдегид гексаметилен
тетрамин
(уротропин)
В результате накопления кислоты реакция среды изменяется от щелочной к
кислой, и фенолфталеин обесцвечивается. Образовавшуюся кислоту оттитровывают
щелочью, по количеству которой делают пересчет на содержание аммиака.
Если реакция мочи кислая, то необходимо нейтрализовать кислоту щелочью,
иначе результат будет завышенным.
В моче здоровых животных аммиака содержится от 0,03 до 0,07%.
Ход работы
В колбу вместимостью 100-150 см пипеткой вносят 5 см
3
свежей мочи,
добавляют 1-2 капли 1%-ного раствора фенолфталеина. Если фенолфталеин бесцветен
(реакция мочи кислая), то титруют раствором 0,1 моль/л щелочи до слабо-розового
цвета. Если фенолфталеин окрашивается в малиновый цвет (реакция мочи щелочная),
то приступают к определению аммиака без предварительной подготовки образца.
Добавляют в колбу с мочой 2,5 см
3
свеженейтрализованного 30%-ного раствора
формалина. Раствор обесцвечивается. Далее титруют из бюретки 0,Ш раствором NаОН
до слабо-розовой окраски, не исчезающей в течение 1 минуты. Объем щелочи,
пошедшей на титрование, вводят в расчетную формулу.
Обработка результатов
Массовую долю аммиака рассчитывают по формуле
g
V
1000
1007.1
(%)
где: X - количество аммиака, %;
V - объем раствора гидроксида натрия пошедшего на титрование, см , 1,7-
количество аммиака, соответствующее 1 мл (см
3
)
0,1 N р-ра гидроксида натрия, мг; § - объем мочи, взятой для анализа, см
3
; 1000 -
коэффициент пересчета массы аммиака в граммы; 100 - коэффициент пересчета в
проценты.
Для подсчета количества аммиака (М) в суточном объеме мочи (V) используют
формулу:
N = 0,1*V (г/сут),
где V - суточный объем мочи, л.
Примечания
Количество аммиака, выделяющегося в норме за сутки у крупного рогатого
скота составляет (0,40 - 0,60) г, у овец - 0,32 г, у лошадей -0,40 г, у человека - (0,6 - 1,3)
г.
Избыточное выделение аммиака свидетельствует об ацетонемии, белковой
интоксикации, избыточном приеме высококонцентрированных кормов или
заболеваний печени, связанных с ослаблением синтеза мочевины и увеличением
кислот в тканях.
2.5. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПАТОЛОГИЧЕСКИХ КОМПОНЕНТОВ [4,6,7]
а). Качественная реакция на белок.
Сущность метода
Все реакции, применяемые для исследования мочи на белок, основаны на
осаждении и выпадении его в осадок под действием концентрированных кислот. При
протеинурии в моче присутствуют альбумины (см. раздел 1). Альбумины относятся к
кислым белкам, поэтому их ИЭТ находится при рН = 4,6-4,7. Отсюда следует:
Ход работы
В пробирку наливают 1-2 см
3
концентрированной азотной кислоты и
осторожно по стенке наслаивают равный объем профильтрованной мочи.
При наличии белка на границе двух жидкостей появляется мутное белое
кольцо. Если в моче содержится незначительное количество белка, то кольцо
появляется не сразу, а спустя 2-3 минуты. Проба с азотной кислотой достаточно
чувствительна и позволяет обнаружить до 0,0033% белка.
б). Качественная реакция на сахар
Сущность метода
Определение сахара в моче основано на способности редуцирующих
Сахаров, в частности глюкозы, восстанавливать медь:
Ход работы.
В пробирку наливают 2-3 см
3
исследуемой мочи, добавляют около 1 см
3
10%-
ного раствора гидроксида натрия и осторожно, по каплям, 1%-ный раствор сульфата
меди до появления голубого окрашивания.
Затем жидкость в верхней ее части нагревают до начала кипения. Появление
желто-красного осадка оксида меди (1) свидетельствует о наличии сахара.
Изменение цвета без осадка может быть при наличии муцина, мочевой кислоты
и др.
в). Качественная реакция на кетоновые тела.
Сущность метода
При различного рода заболеваниях в моче появляются кетоновые тела. К ним
относятся ацетон, кето-масляная и окси-масляная кислоты. Основную массу
кетоновых тел составляет ацетон, обнаружить который можно йодоформной пробой:
Ход работы.
В пробирку наливают 2-3 см
3
исследуемой мочи, 5 капель реактива Люголя
(содержит свободный йод) и 5 капель 10%-ного раствора гидроксида натрия. В
присутствии ацетона образуется йодоформ в виде желтоватой мути с характерным
специфическим запахом.