Колтовая Н.А. Практикум по молекулярной биологии

5. После того как гель полностью затвердеет (через 30-45 мин при комнатной

температуре), осторожно удалите гребенку и поместите гель в электрофорезную

кювету.

6. Добавьте достаточное количество электрофорезного буфера (при необходимости

содержащего 0,5 мкг/мл бромистого этидия), так чтобы гель был закрыт слоем

буфера толщиной 1 мм.

7. Смешайте пробы с буфером для нанесения пробы, содержащим 5-10% глицерина,

7% сахарозы или 2,5% фикола и краситель (0,025% бромфенолового синего или

ксилолцианола) и внесите их в лунки геля под электрофорезный буфер. Обычно

буфер для нанесения проб готовят в виде раствора 6-10-кратной концентрации. Его

смешивают с пробой, а затем осторожно вливают в лунку с помощью

автоматической микропипетки.

8. Подсоедините электроды к источнику напряжения. Напряженность при проведении

разделения в агарозных гелях составляет 1-8 В/см. Маркерный краситель движется

с той же скоростью, что и фрагменты ДНК, содержащие указанные в табл. число

пар оснований.

9. По окончании разделения выньте пластинку с гелем из кюветы и поместите гель

вместе с пластинкой в красящий раствор (1 мкг/мл бромистого этидия). Будьте

осторожны! Гель хрупок и легко соскальзывает с пластинки. После 15 мин

прокрашивания выньте пластину вместе с гелем и промойте в воде в течение 20

мин.

10. Жидкость с пластинки удалите с помощью фильтровальной бумаги и переложите

пластинку на стекло Трансиллюминатора, пропускающее ультрафиолет.

Предостерижение. Работая с УФ-излучением необходимо предохранять глаза и

кожу от ожогов. Одевайте очки!