Ченцов Ю.С. Введение в клеточную биологию. Общая цитология

Подождите немного. Документ загружается.

перицентриолярный материал (головка сателлитов, околоцентриолярный

матрикс, гало и т.д.). Следовательно, центриоль как таковую нужно

рассматривать как один из компонентов более сложной структуры – клеточного

центра или центросомы. Эта оговорка связана с тем, что у всех высших

растений ЦОМТ не содержит центриолей. Более того, в раннем эмбриогенезе

позвоночных животных образуются веретена деления, не имеющие центриолей

в полюсах. По всей вероятности в последних случаях центриоли возникают

позже заново, а не образуются путем “репликации”. Вопрос о процессе

образования центриолей далек от решения. Остается неясным процесс

появления процентриолей. В процессе эмбриогенеза отмечены случаи

возникновения центриолей de novo у морского ежа, у моллюсков, у мышей. Так,

в эмбриогенезе мыши центриоли появляются только после 1-2 делений клеток

бластулы, несмотря на то, что сами клеточные деления происходят нормально,

за исключением того, что в полюсах деления в зоне бесструктурной центросомы

центриоли отсутствуют. С другой стороны, если в соматических клетках

культуры ткани уничтожить центросому с центриолью с помощью

микрооблучения, то новые центриоли не возникают.

Базальные тельца. Строение и движение ресничек и жгутиков.

Как уже указывалось, у многих клеток животных, вышедших из клеточного

цикла, в G

-стадии центриоли принимают участие в образовании аппарата

движения – ресничек. Их две группы: кинетоцилии, характерные для

специальных эпителиев (ресничные эпителии трахеи, яйцеводов) или свободно

плавающих клеток (сперматозоиды, простейшие), и так называемые первичные

реснички, встречающиеся во многих клетках, не обладающих способностью к

движению.

Вначале рассмотрим строение кинетоцилей – подвижных ресничек и

жгутиков. В световом микроскопе эти структуры видны как тонкие выросты

клетки, в их основании в цитоплазме видны хорошо красящиеся мелкие гранулы

– базальные тельца, аналоги центриолей (рис. 287). Клетки, имеющие реснички

381

или жгутики, обладают способностью двигаться, будучи в свободном состоянии,

или же перемещать жидкости в случае, если клетки неподвижны.

Свободноживущие одноклеточные организмы, снабженные одним или

несколькими жгутиками, обычно движутся тем концом вперед, который несет

жгутики. Иной способ движения можно видеть у спермиев некоторых

животных: жгутик, располагаясь сзади, толкает тело клетки вперед. Скорость

движения клеток за счет работы жгутиков может достигать очень большой

величины (до 5 мм / мин).

Множественные реснички также могут обеспечивать движение

свободноживущих клеток, таких как инфузории или некоторые жгутиконосцы.

Реснички эпителиальных клеток многих беспозвоночных и позвоночных

животных обеспечивают поток жидкостей вдоль поверхности таких клеток.

Число ресничек на клетку может достигать 300 в эпителии трахеи; у инфузории

туфельки на клетку приходится 10-14 тыс. рядами расположенных ресничек.

При движении ресничек и жгутиков не происходит уменьшения их длины,

поэтому неправильно называть это движение сокращением. Траектория

движения ресничек очень разнообразна (рис. 288). В различных клетках это

движение может быть маятникообразным, крючкообразным, воронкообразным

или волнообразным.

У многоресничных клеток (инфузории, клетки ресничного эпителия)

движение ресничек не хаотично, а строго упорядочено. В этом случае реснички

расположены рядами. В продольном ряду отдельные реснички начинают

движение и проходят отдельные его фазы по очереди, метахронно. В

поперечном же ряду все реснички находятся в одной фазе движения

(синхронны). Это создает движущую волну по поверхности клетки (рис. )289.

Общая архитектура реснички представлена на рис. 290, 291. Ресничка

представляет собой тонкий цилиндрический вырост цитоплазмы с постоянным

диаметром 300 нм. Этот вырост от основания до самой его верхушки покрыт

плазматической мембраной. Внутри выроста расположена аксонема, сложная

382

структура, состоящая в основном из микротрубочек. Нижняя, проксимальная

часть реснички, базальное тельце, погружена в цитоплазму. Диаметры аксонемы

и базального тельца одинаковы (около 200 нм).

На поперечном сечении реснички видна плазматическая мембрана,

окружающая аксонему. Аксонема в своем составе имеет девять дублетов

микротрубочек, образующих внешнюю стенку цилиндра аксонемы. Дублеты

микротрубочек слегка повернуты (около 10

) по отношению к радиусу

аксонемы. Кроме периферических дублетов микротрубочек в центре аксонемы

располагается пара центральных микротрубочек. В целом систему

микротрубочек реснички описывают как (9х2)+2. В дублетах микротрубочек

также различают А-микротрубочку, состоящую из 13 субъединиц, и В-

микротрубочку, неполную, содержащую 11 субъединиц. А-микротрубочка несет

на себе ручки, которые направлены к В-микротрубочке соседнего дуплета. От

А-микротрубочки к центру аксонемы отходит радиальная связка, или спица,

оканчивающаяся головкой, присоединяющейся к центральной муфте, имеющей

диаметр около 70 нм, окружающей две центральные микротрубочки. Последние

лежат отдельно друг от друга на расстоянии около 25 нм. Таким образом, в

аксонеме располагается 20 продольных микротрубочек, в то время как в

базальном тельце их 27 (рис. 291, 292).

Базальное тельце состоит из 9 триплетов микротрубочек (как и центриоль),

имеет ручки, втулку и спицы, расположенные в проксимальной (нижней) ее

части. На участке базального тельца, примыкающем к плазматической

мембране, есть девять придатков, выступов, идущих от каждого триплета

микротрубочек к плазматической мембране и связывающих его с клеточной

поверхностью.

Базальное тельце и аксонема структурно связаны друг с другом и

составляют единое целое: А- и В-микротрубочки триплетов базального тельца

продолжаются в А- и В-микротрубочках дуплетов аксонемы. Однако внутренние

части аксонемы и базального тельца значительно отличны друг от друга. Часто в

383

зоне перехода базального тела в аксонему наблюдают аморфную поперечную

пластинку, которая как бы отделяет эти две части. Центральные микротрубочки

аксонемы начинаются от этой пластинки так же, как в этом месте начинается и

центральная муфта (капсула) (рис. 290).

В основании ресничек и жгутиков часто встречаются исчерченные

корешки, или кинетодесмы, представляющие собой пучки тонких (6 нм)

фибрилл, обладающих поперечной исчерченностью (рис. 293). Часто такие

исчерченные кинетодесмы простираются от базальных телец вглубь цитоплазмы

по направлению к ядру. Роль этих структур не ясна. Они не изменяются при

действии колхицина, могут встречаться и в составе центриолей интерфазных

клеток, не принимающих участия в образовании ресничек.

При движении ресничек не происходит изменения их длины, они не

“сокращаются”, а изгибаются, бьются. Оказалось, что механически отделенные

реснички способны к биению в присутствии АТФ. При отделении ресничек

базальные тельца остаются в теле клетки. Это означает, что для механической

работы ресничек базальное тело не нужно, а только аксонема участвует в

генерации движения. Удалось показать, что за движение ресничек отвечают

“ручки”, сидящие на А-микротрубочках. При экстракции компонентов ручек

реснички перестают биться в присутствии АТФ.

Было найдено, что в состав ручек входят белки динеины. Это большие

белковые компоненты, состоящие из 9-12 полипептидных цепей, содержащие 2-

3 глобулярные головки, связанные в общий корешок гибкими хвостами (рис.

294). Каждая головка динеина обладает АТФ-азной активностью, которая

возрастает примерно в 6 раз при ассоциации с микротрубочками. В состав

каждой ручки входит один белковый комплекс, одна молекула динеина. Так как

экстракция ручек прекращает биение ресничек, то можно считать, что именно

динеин ответственен за это движение, то есть динеин является мотором или

двигателем при биении ресничек. Но каков механизм этого движения?

384

Этот вопрос был решен при использовании выделенных ресничек,

лишенных плазматической мембраны, радиальных спиц и связок после

частичной обработки аксонем протеазами. Оказалось, что такие аксонемы,

содержащие динеиновые ручки, при добавлении к ним АТФ начинают

увеличиваться в длину почти до девяти раз и одновременно утончаются. В

электронном микроскопе видно, что такая аксонема увеличилась в длину за счет

смещения пар микротрубочек одна относительно другой (рис. 295). Другими

словами, произошло продольное скольжение дуплетов один относительно

другого, аналогично тому, что происходит при сокращении саркомеров в

мышце: скольжение миозиновых нитей относительно актиновых. В случае

динеина повторные циклы ассоциации с субъединицами тубулина, изменения

конформации при связывании АТФ и его гидролизе, вызывают перемещение

головок вдоль микротрубочки от (+)-конца к (-)-концу. При этом соседний

дуплет двигается к верхушке реснички. Когда ресничка содержит все

компоненты, и дуплеты микротрубочек связаны друг с другом и с центральной

парой микротрубочек, такие кооперативные смещения дуплетов микротрубочек

приводят не к удлинению реснички, а к ее изгибу (рис. 296). Как регулируется

последовательное перемещение дуплетов один относительно другого, еще не

ясно.

Рост ресничек, удлинение микротрубочек их аксонем происходит на

вершине реснички. Следовательно, там локализованы (+)-концы микротрубочек.

Образование аксонемы ресничек происходит за счет роста А- и В-

микротрубочек центриолей, которые в этом случае становятся базальным

тельцем. В простейшем случае при образовании одиночных ресничек или так

называемых первичных ресничек материнская центриоль подходит к

плазматической мембране своим дистальным торцом, связывается с ней своими

придатками. В это время начинается рост микротрубочек на (+)- концах А- и В-

микротрубочек триплетов. Возникают девять дублетов микротрубочек

аксонемы, которые, наращиваясь с (+)-концов на верхушке аксонемы как бы

385

вытягивают плазматическую мембрану, образуя вырост – ресничку. Две

центральные микротрубочки возникают в связи с плотным веществом, лежащим

на границе бывшей центриоли и выроста плазматической мембраны (рис. 290а).

При образовании многоресничных клеток происходит многочисленная

репликация центриолей и образование многочисленных ресничек.

В ресничном эпителии позвоночных множественные базальные тельца

возникают вокруг так называемых дейтеросом – аморфных электронноплотных

структур размером от 60 до 700 нм, по периферии которых происходит закладка

множественных зачатков базальных телец. Вокруг одной дейтеросомы

образуются до десятка новых базальных телец. Они затем мигрируют к

плазматической мембране и принимают участие в образовании аксонем (рис.

298).

Необходимо отметить, что клетки с множеством ресничек теряют

способность к делению и не могут выходить из G

-стадии клеточного цикла. На

смену им из эпителиального пласта приходят стволовые

недифференцированные клетки, которые могут делиться и давать новые

поколения многоресничных клеток.

Микротрубочки аксонемы устойчивы к действию колхицина, но при росте

реснички колхицин полностью прекращает включение новых молекул тубулина,

что приводит к торможению роста ресничек.

Вторая категория ресничных клеток – клетки с так называемыми

первичными ресничками, не обладающими способностью к движению.

Практически все типы клеток, за исключением клеток крови, мышц и

кишечного эпителия, в G

-периоде образуют первичные реснички, которые

отличаются от настоящих ресничек, или киноцилий, тем, что они не имеют пары

центральных микротрубочек и не способны к движению. Они образуются в

результате того, что диплосома подходит к плазматической мембране и от

материнской центриоли начинается рост аксонемы, но без двух центральных

микротрубочек. Если клетки культуры фибробластов, обладающих в G

-периоде

386

такими ресничками, стимулировать к делению, то эти реснички исчезают, а

базальное тельце-центриоль начинает свой цикл как обычная центриоль в

клетках, способных к делению.

Функциональное значение этих первичных ресничек не ясно. Но интересно

отметить, что при развитии сенсорных клеток сетчатки их наружные сегменты

палочек и колбочек возникают сначала за счет образования первичных

ресничек. Возможно, что у нерецепторных клеток, имеющих такие первичные

реснички, последние выполняют функции внешних анализаторов, являются как

бы «антеннами», на поверхности которых рецепторные молекулы

плазматической мембраны могут регистрировать механические и химические

сигналы, поступающие из внешней межклеточной среды.

Двигательный аппарат бактерий

Многие бактерии способны к быстрому движению с помощью

своеобразных бактериальных жгутиков или флагелл.

Основная форма движения бактерий – с помощью жгутика. Жгутики

бактерий принципиально отличны от жгутиков эукариотических клеток. По

числу жгутиков их делят на: монотрихи – с одним жгутиком, политрихи – с

пучком жгутиков, перитрихи - с множеством жгутиков в разных участках

поверхности (рис. 299).

Жгутики бактерий имеют очень сложное строение; они состоят из трех

основных частей: внешняя длинная волнистая нить (собственно жгутик),

крючок, базальное тельце (рис. 300).

Жгутиковая нить построена из белка флагеллина. Его молекулярный вес

колеблется в зависимости от вида бактерий (40-60 тыс.). Глобулярные

субъединицы флагеллина полимеризуются в спирально закрученные нити так,

что образуется трубчатая структура (не путать с микротрубочками эукариот!) с

диаметром 12-25 нм, полая изнутри. Флагеллины не способны к движению. Они

могут спонтанно полимеризоваться в нити с постоянным шагом волны,

характерным для каждого вида. В живых бактериальных клетках нарастание

387

жгутиков происходит на их дистальном конце; вероятно, транспорт флагеллинов

происходит через полую середину жгутика.

Вблизи клеточной поверхности жгутиковая нить, флагелла, переходит к

более широкому участку, так называемому крючку. Он имеет длину около 45 нм

и состоит из другого белка.

Бактериальное базальное тельце не имеет ничего общего с базальным

тельцем эукариотической клетки (рис. 290 б, в). Оно состоит из стержня,

связанного с крючком и четырех колец – дисков. Два верхних кольца диска,

имеющихся у грамотрицательных бактерий, локализованы в клеточной стенке:

одно кольцо (L) погружено в липосахаридную мембрану, а второе (P) – в

муреиновый слой. Два других кольца - белковый комплекс «S»-статор и

«M»-ротор, локализованы в плазматической мембране. К этому комплексу со

стороны плазматической мембраны примыкает кольцевой ряд белков Mot A и B.

В базальных тельцах грамположительных бактерий имеется только два

нижних кольца, связанных с плазматической мембраной.

Базальные тельца вместе в крючками можно выделить, оказалось, что они

содержат в своем составе около 12 различных белков.

Принцип движения бактериальных жгутиков совершенно иной, чем у

эукариот. Если у эукариот жгутики движутся за счет продольного скольжения

дуплетов микротрубочек, то у бактерий движение жгутиков происходит за счет

вращения базального тельца (а именно «S»- и «М»- дисков) вокруг своей оси в

плоскости плазматической мембраны.

Это было доказано рядом красивых экспериментов. Так, закрепляя жгутики

на подложке с помощью антител к флагеллину, исследователи наблюдали

вращение бактерий. Было найдено, что многочисленные мутации по

флагеллинам (изменение изгиба нити, «курчавость» и т. д.) не сказываются на

способности клеток к движению. Мутации же по белкам базального комплекса

часто приводят к потере движения.

388

Движение бактериальных жгутиков не зависит от АТФ, а осуществляется

благодаря трансмембранному градиенту ионов водорода на поверхности

плазматической мембраны. При этом происходит вращение М-диска.

В окружении М-диска Mot-белки способны к переносу ионов водорода из

периплазматического пространства в цитоплазму (за один оборот переносится

до 1000 ионов водорода). При этом происходит вращение жгутика с огромной

скоростью, от 5-100 об/сек., что дает возможность бактериальной клетке

перемещаться на 25-100 мкм в секунду.

Часть VII. Механизмы клеточного деления.

Глава 24. Митотическое деление клеток. Общая организация митоза

Как постулирует клеточная теория, увеличение числа клеток происходит

исключительно за счет деления исходной клетки, предварительно удвоившей

свой генетический материал. Это – главное событие в жизни клетки как таковой,

а именно завершение воспроизведения себе подобного. Вся «интерфазная»

жизнь клеток направлена на полное осуществление клеточного цикла,

заканчивающегося клеточным делением. Само же деление клетки – процесс

неслучайный, строго генетически детерминированный, где в последовательный

ряд выстроена целая цепочка событий.

Как уже указывалось, деление прокариотических клеток протекает без

конденсации хромосом, хотя должен существовать ряд метаболических

процессов и, в первую очередь, синтезов ряда специфических белков,

участвующих в «простом» делении бактериальной клетки надвое.

Деление всех эукариотических клеток связано с конденсацией удвоенных

(реплицированных) хромосом, которые приобретают вид плотных нитчатых

структур. Эти нитчатые хромосомы переносятся в дочерние клетки специальной

структурой – веретеном деления. Такой тип деления эукариотических клеток –

митоз (от греч. mitos – нити), или кариокинез, или непрямое деление – является

единственным полноценным способом увеличения числа клеток. Прямое

деление клеток или амитоз достоверно описано только при делении

389

полиплоидных макронуклеусов инфузорий, их микронуклеусы делятся только

митотическим путем.

Деление всех эукариотических клеток связано с образованием

специального аппарата клеточного деления. При удвоении клеток происходят

два события: расхождение реплицированных хромосом и разделение клеточного

тела, цитотомия. Первая часть события у эукариот осуществляется с помощью

так называемого веретена деления, состоящего из микротрубочек, а вторая часть

происходит за счет участия акто-миозиновых комплексов, вызывающих

образование перетяжки у клеток животного происхождения или за счет участия

микротрубочек и актиновых филаментов в образовании фрагмопласта,

первичной клеточной перегородки у клеток растений.

В образовании веретена деления у всех эукариотических клеток принимают

участие два рода структур: полярные тельца (полюса) веретена и кинетохоры

хромосом. Полярные тельца, или центросомы, являются центрами организации

(или нуклеации) микротрубочек. От них своими «+»-концами отрастают

микротрубочки, образующие пучки, тянущиеся к хромосомам. У клеток

животных центросомы включают в свой состав и центриоли. Но у многих

эукариот центриолей нет, а центры организации микротрубочек присутствуют в

виде бесструктурных аморфных зон, от которых отходят многочисленные

микротрубочки. Как правило, при организации аппарата деления участвуют две

центросомы или два полярных тельца, находящиеся на противоположных

концах сложного, веретенообразного тела, состоящего из микротрубочек.

Второй структурой, характерной для митотического деления клеток,

связывающей микротрубочки веретена с хромосомой, являются кинетохоры.

Именно кинетохоры, взаимодействуя с микротрубочками, ответственны за

перемещение хромосом при клеточном делении.

Все эти компоненты, а именно, полярные тельца (центросомы),

микротрубочки веретена и кинетохоры хромосом встречаются у всех

390